$$\rightleftharpoonup{xx}$$
$$\longleftharp{xx}$$,
$$\longrightharp{xx}$$,
Isolatie en uitbreiding van de vermeende neurale stamcellen (NSCs) van de volwassen muizen hersenen werd voor het eerst beschreven door Reynolds en Weiss in 1992 in dienst een chemisch welbepaalde serum-vrije cultuur dat bekend staat als de neurosphere assay (NSA). In deze test, de meerderheid van de gedifferentieerde celtypen sterven binnen een paar dagen cultuur, maar een kleine populatie van de groeifactor responsieve voorloper cellen ondergaan actief proliferatie in de aanwezigheid van de epidermale groeifactor (EGF) en / basic fibroblastische groeifactor (bFGF). Deze cellen vormen kolonies van ongedifferentieerde cellen genaamd neurospheres, die op hun beurt kunnen worden subcultuur naar het zwembad van neurale stamcellen uit te breiden. Bovendien kunnen de cellen worden geïnduceerd om te differentiëren, het genereren van de drie belangrijkste celtypes van het centrale zenuwstelsel zoals neuronen, astrocyten en oligodendrocyten. Deze test geeft een waardevol instrument om een consistente, duurzame bron van ongedifferentieerde CNS precursoren, die kunnen worden gebruikt voor in vitro studies en ook voor therapeutische doeleinden te leveren.
Deze video toont de NSA methode te genereren en uit te breiden NSCs van de volwassen muis periventriculaire regio, en biedt technische inzichten om ervoor te zorgen kan men reproduceerbare neurosphere culturen te bereiken. De procedure omvat het oogsten van de hersenen van de volwassen muis, micro-dissectie van de periventriculaire regio, het prepareren van weefsels en cultuur in de NSA. De geoogste weefsel wordt eerst chemisch verteerd met behulp van trypsine-EDTA en vervolgens mechanisch gedissocieerd in NSC medium om een enkele celsuspensie te bereiken en uiteindelijk uitgeplaat in de NSA. Na 7-10 dagen in de cultuur, de resulterende primaire neurospheres zijn klaar voor subcultuur om de hoeveelheid cellen die nodig is voor toekomstige experimenten te bereiken.