अलगाव और वयस्क माउस तंत्रिका स्टेम सेल के विस्तार Neurosphere परख का उपयोग
Summary
यह वीडियो प्रोटोकॉल neurosphere परख करने के लिए पैदा करते हैं और वयस्क माउस periventricular क्षेत्र से तंत्रिका स्टेम कोशिकाओं का विस्तार विधि दर्शाता है, और तकनीकी अंतर्दृष्टि प्रदान करता है सुनिश्चित करने के लिए के लिए एक प्रतिलिपि प्रस्तुत करने योग्य neurosphere संस्कृतियों प्राप्त कर सकते हैं.
Abstract
अलगाव और ख्यात वयस्क murine मस्तिष्क से तंत्रिका स्टेम सेल (एनएससी) के विस्तार के पहले रेनॉल्ड्स और Weiss द्वारा वर्णित किया गया था 1992 में एक रासायनिक परिभाषित सीरम मुक्त संस्कृति neurosphere परख (एनएसए) के रूप में जाना जाता है प्रणाली को रोजगार. इस परख में, विभेदित सेल प्रकार के बहुमत संस्कृति के कुछ दिनों के भीतर मर जाते हैं, लेकिन वृद्धि कारक उत्तरदायी अग्रदूत साबित कोशिकाओं की एक छोटी सी आबादी epidermal वृद्धि कारक (EGF) और / बुनियादी fibroblastic वृद्धि कारक (bFGF) की उपस्थिति में सक्रिय प्रसार से गुजरना. इन कोशिकाओं undifferentiated neurospheres नामक कोशिकाओं, जो बारी में तंत्रिका स्टेम कोशिकाओं के पूल का विस्तार subcultured किया जा सकता है की कालोनियों के रूप में. इसके अलावा, कोशिकाओं के लिए अंतर प्रेरित किया जा सकता है, सीएनएस यानी न्यूरॉन्स, astrocytes, और oligodendrocytes के तीन प्रमुख प्रकार की कोशिकाओं पैदा. इस परख के लिए एक सुसंगत, undifferentiated सीएनएस व्यापारियों, जो इन विट्रो अध्ययन में और भी उपचारात्मक उद्देश्यों के लिए के लिए इस्तेमाल किया जा सकता के अक्षय स्रोत की आपूर्ति के लिए एक अमूल्य उपकरण प्रदान करता है.
यह वीडियो एनएसए उत्पन्न करने के लिए और वयस्क माउस periventricular क्षेत्र से एनएससी का विस्तार विधि को दर्शाता है, और तकनीकी अंतर्दृष्टि प्रदान करता है सुनिश्चित करने के लिए के लिए एक प्रतिलिपि प्रस्तुत करने योग्य neurosphere संस्कृतियों प्राप्त कर सकते हैं. प्रक्रिया वयस्क माउस, periventricular क्षेत्र के सूक्ष्म – विच्छेदन, ऊतक तैयारी में एनएसए और संस्कृति से मस्तिष्क संचयन शामिल हैं. पहले काटा ऊतक रासायनिक एनएससी माध्यम trypsin – EDTA और तो यंत्रवत् अलग उपयोग कर एक एकल कक्ष निलंबन को प्राप्त करने और अंत में एनएसए में चढ़ाया पचा. संस्कृति में 7-10 दिनों के बाद, जिसके परिणामस्वरूप प्राथमिक neurospheres subculture के लिए भविष्य के प्रयोगों के लिए आवश्यक कोशिकाओं की मात्रा तक पहुँचने के लिए तैयार हैं.
Protocol
Discussion
neurosphere 2 परख अलगाव और 4-5 सीएनएस से एनएससी के अध्ययन के लिए न केवल, लेकिन यह भी कई ऊतकों से ख्यात स्टेम 6 स्तन और 7 दिल जैसे, कोशिकाओं के अन्य प्रकार के अलगाव के लिए अनुसंधान समुदाय में व्यापक ध्?…
Disclosures
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
इस काम Overstreet फाउंडेशन से धन के द्वारा समर्थित किया गया.
Materials
| Material Name | Type | Company | Catalogue Number | Comment |
|---|---|---|---|---|
| NeuroCult NSC Basal Medium | Medium | Stem Cell Technologies | 05700 | |
| NeuroCult NSC Proliferation Supplements | Medium supplement | Stem Cell Technologies | 05701 | |
| %0.05 trypsin-EDTA | Reagent | Gibco | 25300-062 | |
| Soybean trypsin inhibitor | Reagent | Sigma | T6522 | |
| Cell strainer | Sieve | BD Falcon | 352340 | |
| T25 flask | Culture ware | Nalge Nunc international | 136196 | |
| T80 flask | Culture ware | Nalge Nunc international | 178905 | |
| EGF | Growth factor | R&D | 2028-EG | |
| Pen/Strep | Reagent | Gibco | 15140-122 | |
| *MEM | Reagent | Gibco | 41500-018 | HEM component |
| *HEPES | Reagent | Sigma | H4034 | HEM component |
| *Distilled water | Reagent | Gibco | 15230-147 | |
| 15 ml tubes | Culture ware | BD Falcon | 352096 | |
| 50 ml tubes | Culture ware | BD Falcon | 352070 | |
| Fine curved forceps | Surgical tools | Fine Science Tools | 11251‐35 | |
| Small fine forceps | Surgical tools | Fine Science Tools | 11272‐30 | |
| Small forceps | Surgical tools | Fine Science Tools | 11050‐10 | |
| b-FGF | Growth factor | R&D | 3139-FB | |
| Heparin | Growth factor | Sigma | H4784 | Reconstituted in PBS |
*To make HEM, mix 1×10L packet of MEM and160ml of 1M HEPES and bring the volume to 8.75 L using distilled water. Set the final PH to 7.4 and store it at 4°C.
References
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