Estabelecer um modelo de tumor de bexiga ortotópico para avaliar os efeitos antitumorais de sarna intravesical entregue e acompanhamento do crescimento tumoral por ultra-som e de imagem de bioluminescência.
Abstract
Apresentamos um novo método para o tratamento de cancro da bexiga com intravesical entregue pequena activador RNA (sarna) em um xenoenxerto modelo de rato ortotópico tumor da bexiga. O modelo do rato é estabelecido por cateterismo uretral sob anestesia geral inalatória. Queimadura química é então introduzido para a mucosa da bexiga usando solução de nitrato de prata intravesical para romper a camada de glicosaminoglicano bexiga e permite que as células para anexar. Após várias lavagens com água estéril, cancro da bexiga humana KU-7-luc2-GFP células são instilado através do cateter no interior da bexiga para habitar durante 2 horas. Subsequente crescimento de tumores de bexiga é confirmada e monitorado por ultra-som na bexiga vivo e de imagem de bioluminescência. Os tumores são então tratados com intravesical sarna formulados em nanopartículas de lípidos (LNPs). O crescimento do tumor é monitorizado com ultra-sons e bioluminescência. Todos os passos do presente processo são demonstradas no vídeo que o acompanha.
Protocol
Procedimentos que envolvem seres animais foram aprovados pelo Institutional Animal Care e do Comitê de Uso (IACUC) da Universidade da Califórnia, em San Francisco. 1. Preparação de células A bexiga humana linha de células de cancro KU-7-luc2-GFP (Caliper Life Sciences, Hopkinton, MA) é crescido em meio RPMI-1640 suplementado com 10% de soro fetal de bovino e 50 gentamicina ug / ml. As culturas são mantidas a 37 ° C, 5% de CO 2 com os meios de muda a c…
Discussion
Apresenta um protocolo para o estabelecimento de um modelo ortotópico xenoenxerto rato tumor da bexiga, seguido de tratamento intravesical dos tumores com LNP sarna formulado que tem como alvo o promotor de p21 CIP1/WAF1 (p21) para a activação transcricional. 2, 3 Os tumores resultantes podem ser confirmada e monitorados com exames de imagem de bioluminescência e ultra-som da bexiga. Modelos ortotópicos pode ser superior à intraperitoneal, subcutânea ou intravenosa os modelos, fornecendo um …
Disclosures
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
Esta pesquisa é financiada pelo Henry AACR Bexiga Shepard Cancer Research Grant (09-60-30-LI).
Kang, M. R., Yang, G., Charisse, K., Epstein-Barash, H., Manoharan, M., Li, L. An Orthotopic Bladder Tumor Model and the Evaluation of Intravesical saRNA Treatment. J. Vis. Exp. (65), e4207, doi:10.3791/4207 (2012).