En este protocolo, w e identificado una nueva población de células melanocitos como (también conocido como melanocitos cardíacos) en los corazones de los ratones y los seres humanos que contribuyen a la arritmia auricular provoca en ratones.
Identificamos una nueva población de células melanocitos como (también conocido como melanocitos cardíacos) en los corazones de los ratones y los seres humanos que contribuyen a los factores desencadenantes de arritmia auricular en ratones. Para investigar las propiedades eléctricas y biológicas de los melanocitos cardíacos se desarrolló un procedimiento para aislarlos de los corazones del ratón que deriva de los diseñados para aislar los cardiomiocitos murinos neonatales. A fin de obtener los melanocitos cardíacos saludables adecuados para más extensa de patch clamp o estudios bioquímicos, hemos desarrollado un procedimiento de refinado para aislar y chapado melanocitos cardíacos basados en los diseñado originalmente para aislar los melanocitos cutáneos. El procedimiento de refinado se demuestra en esta revisión y produce un mayor número de células melanocitos como saludables que pueden sembrarse como una población pura o con cardiomiocitos.
Recientemente hemos identificado una población de células novela en el corazón de los ratones y los seres humanos que expresan enzimas melanina-síntesis y se asemejan morfológicamente a los melanocitos cutáneos. Llamamos 'melanocitos cardíacos' estas células y encontramos que están presentes en localizaciones anatómicas de la que la arritmia auricular desencadena a menudo se originan en los seres humanos. También encontramos melanocitos cardiacos contribuyen a las arritmias auriculares en ratones con deleción de la línea germinal de Dct. Melanocitos cardíacos se distribuyen escasamente lo largo de la aurícula del ratón donde se comprenden menos del 0,1% de todas las células auriculares. Para investigar las propiedades eléctricas y biológicas de los melanocitos cardíacos hemos desarrollado un procedimiento para aislarlos del corazón de ratón utilizando marcadores específicos de melanocitos Cre-inducible. Nuestro procedimiento inicial se desarrolló a partir de los que se usan para aislar los cardiomiocitos murinos neonatales y dado muy pequeños números de células adecuados para las grabaciones de patch clamp o análisis de PCR. Sin embargo, para mejorar la curarª y la viabilidad de los melanocitos cardíacos, por más profundo análisis electrofisiológico o estudios bioquímicos, se desarrolló un procedimiento de refinado de los diseñados para aislar los melanocitos cutáneos. El procedimiento descrito y demostrado en esta revisión tiene la ventaja de producir melanocitos cardíacos saludables que pueden sembrarse como una población pura o con cardiomiocitos.
Melanocitos cardíacos están presentes en localizaciones anatómicas dentro del corazón que normalmente dan lugar a los factores desencadenantes de arritmia auricular. Estas regiones incluyen las venas pulmonares, el anillo atrioventricular, la aurícula izquierda posterior y el foramen oval (Figura 4). Para entender el papel que estas células juegan en arritmogénesis, desarrollamos técnicas para aislar a ellos y estudiar su fisiología. Sin embargo, nos dimos cuenta de que la mejora de esta técni…
The authors have nothing to disclose.
Esta labor fue apoyada por los Institutos Nacionales de Salud premio R01 HL105734 a VVPMDL se apoya, en parte, por los Institutos Nacionales de la Salud Carrera de Investigación Premio K08 HL094748. VVP es un investigador innovador de la Asociación Americana del Corazón con el apoyo de subvención 11IRG900384.
Name of the reagent | Company | Catalogue number | Comment |
MCDB 153 | Sigma-Aldrich | M7403 | Dissolve in: Water |
DPBS, no calcium no magnesium | Invitrogen | 14190136 | Stock Conc.: 1X Working Conc.: 1X |
Sodium Bicarbonate, or Sodium Bicarbonate Solution, 7.5% | Sigma-Aldrich | S5761 or S8761 | Water Stock Conc.: 1X Working Conc.: 1X |
Penicillin-streptomycin | Invitrogen | 15140163 | Stock Conc.: 100X Working Conc.: 1X |
Fetal Bovine Serum | Life Technology | Certified | Working Conc.: 4% |
TPA | Sigma-Aldrich | P1585 | DMSO Stock Conc.: 3.2 μM Working Conc.: 32 nM |
Transferrin | Sigma-Aldrich | T8158 | DPBS Stock Conc.: 0.1 mg/ml Working Conc.: 1 μg/ml |
Dibutyryl cyclic AMP | Sigma-Aldrich | D0627 | DPBS Stock Conc.: 0.5 mM Working Conc.: 5 μM |
Insulin | Sigma-Aldrich | I6634 | 10 mM
acetic acid Stock Conc.: 1 mg/ml Working Conc.: 5 μg/ml |
Basic FGF | BD Biosciences | 354060 | Water Stock Conc.: 4 ng/μl Working Conc.: 4 ng/ml |