في هذا البروتوكول، ث ه التعرف على السكان رواية من خلايا تشبه الخلايا الصباغية (المعروف أيضا باسم الخلايا الصباغية القلب) في قلوب الفئران والبشر التي تساهم في عدم انتظام ضربات القلب الأذيني يتسبب في الفئران.
حددنا عدد سكانها رواية من خلايا تشبه الخلايا الصباغية (المعروف أيضا باسم الخلايا الصباغية القلب) في قلوب الفئران والبشر التي تساهم في عدم انتظام ضربات القلب الأذيني المشغلات في الفئران. للتحقيق في الخواص الكهربائية والبيولوجية للخلايا الميلانين القلب وضعنا الداخلي لعزلهم من قلوب الماوس أننا المستمدة من تلك المصممة لعزل العضلية الفئران حديثي الولادة. من أجل الحصول على الخلايا الصباغية القلب صحية مناسبة لالمشبك التصحيح أكثر اتساعا أو الدراسات البيوكيميائية، وضعنا إجراء المكرر لعزل وطلاء الخلايا الصباغية القلب بناء على تلك المصممة أصلا لعزل الخلايا الصباغية الجلدية. ويتجلى هذا الإجراء المكرر في هذا الاستعراض، وتنتج أعدادا أكبر من خلايا تشبه الخلايا الصباغية الصحية التي يمكن مطلية حيث يبلغ عدد سكانها النقي أو مع العضلية.
حددنا مؤخرا سكان الخلية رواية في قلب الفئران والبشر التي تعبر عن الانزيمات الميلانين التوليف وشكليا تشبه الخلايا الصباغية الجلدية. كنا نسميها "الخلايا الصباغية القلب" وجدت هذه الخلايا كانت موجودة في مواقع تشريحية من عدم انتظام ضربات القلب الأذيني مشغلات التي غالبا ما تنشأ في البشر. وجدنا أيضا تساهم الخلايا الصباغية إلى عدم انتظام ضربات القلب الأذيني في الفئران مع حذف سلالة الجرثومية من محول جيب التمام. وتوزع الخلايا الصباغية القلب قليلة في جميع أنحاء الأذين الماوس حيث أنهم يشكلون أقل من 0.1٪ من مجموع خلايا الأذيني. للتحقيق في الخواص الكهربائية والبيولوجية للخلايا الميلانين القلب وضعنا الداخلي لعزلهم من القلب الماوس باستخدام علامات محددة الصباغية جنة المساواة العرقية، محرض. وقد وضعت لدينا الإجراء الأولي من تلك المستخدمة لعزل العضلية الفئران حديثي الولادة وأسفرت عن أعداد صغيرة جدا من الخلايا مناسبة للتسجيلات المشبك التصحيح أو تحليل PCR. ومع ذلك، من أجل تحسين شفاءعشر وبقاء الخلايا الصباغية القلب، لأكثر تعمقا تحليل الكهربية أو الدراسات البيوكيميائية، وضعنا إجراء المكرر من تلك المصممة لعزل الخلايا الصباغية الجلدية. الإجراء الموضح وأظهرت في هذا الاستعراض في الاستفادة من إنتاج الخلايا الصباغية صحة القلب التي يمكن مطلية حيث يبلغ عدد سكانها النقي أو مع العضلية.
الخلايا الصباغية القلب موجودة في مواقع التشريحية داخل القلب التي تعطي عادة يؤدي إلى عدم انتظام ضربات القلب الأذيني المشغلات. وتشمل هذه المناطق الأوردة الرئوية، وبالطوق الأذينية البطينية، والأذين الأيسر الخلفي والثقبة البيضوية (الشكل 4). لفهم الدور الذي تق?…
The authors have nothing to disclose.
وأيد هذا العمل من قبل المعاهد الوطنية للصحة منح R01 HL105734 إلى VVPMDL ويدعم، في جزء منه، من قبل المعاهد الوطنية للبحوث الصحية الوظيفي جائزة K08 HL094748. VVP هو باحث المبتكر من جمعية القلب الأميركية بدعم من منحة 11IRG900384.
Name of the reagent | Company | Catalogue number | Comment |
MCDB 153 | Sigma-Aldrich | M7403 | Dissolve in: Water |
DPBS, no calcium no magnesium | Invitrogen | 14190136 | Stock Conc.: 1X Working Conc.: 1X |
Sodium Bicarbonate, or Sodium Bicarbonate Solution, 7.5% | Sigma-Aldrich | S5761 or S8761 | Water Stock Conc.: 1X Working Conc.: 1X |
Penicillin-streptomycin | Invitrogen | 15140163 | Stock Conc.: 100X Working Conc.: 1X |
Fetal Bovine Serum | Life Technology | Certified | Working Conc.: 4% |
TPA | Sigma-Aldrich | P1585 | DMSO Stock Conc.: 3.2 μM Working Conc.: 32 nM |
Transferrin | Sigma-Aldrich | T8158 | DPBS Stock Conc.: 0.1 mg/ml Working Conc.: 1 μg/ml |
Dibutyryl cyclic AMP | Sigma-Aldrich | D0627 | DPBS Stock Conc.: 0.5 mM Working Conc.: 5 μM |
Insulin | Sigma-Aldrich | I6634 | 10 mM
acetic acid Stock Conc.: 1 mg/ml Working Conc.: 5 μg/ml |
Basic FGF | BD Biosciences | 354060 | Water Stock Conc.: 4 ng/μl Working Conc.: 4 ng/ml |