I denne protokollen, w e identifisert en roman befolkning på melanocyte lignende celler (også kjent som hjerte melanocytter) i hjertene til mus og mennesker som bidrar til atrial arytmi utløser hos mus.
Vi identifiserte en roman befolkning på melanocyte lignende celler (også kjent som hjerte melanocytter) i hjertene til mus og mennesker som bidrar til atrial arytmi triggere i mus. For å undersøke de elektriske og biologiske egenskaper hjerte melanocytter vi utviklet en prosedyre for å isolere dem fra mus hjerter at vi stammer fra de som er laget for å isolere neonatale muse kardiomyocytter. For å få sunnere hjerte melanocytter egnet for mer omfattende patch clamp eller biokjemiske studier, har vi utviklet en raffinert metode for isolering og plating hjerte melanocytter basert på de som opprinnelig laget for å isolere kutane melanocytter. Den raffinerte fremgangsmåten er vist i dette og gir et større antall friske melanocyte-lignende celler som kan bli belagt som en ren populasjon eller med kardiomyocytter.
Vi har nylig identifisert en roman cellepopulasjon i hjertet av mus og mennesker som uttrykker melanin-syntese enzymer og morfologisk ligner kutane melanocytter. Vi kalte disse cellenes kardiale melanocytter 'og funnet at de er tilstede i anatomiske steder hvorfra atrial arytmi utløser ofte har sin opprinnelse i mennesker. Vi fant også hjerte melanocyttene bidra til atriearytmier i mus med germline sletting av Dct. Hjerte melanocyttene er tynt fordelt over hele musen atrium der de utgjør mindre enn 0,1% av alle atrial celler. For å undersøke de elektriske og biologiske egenskaper hjerte melanocytter vi utviklet en prosedyre for å isolere dem fra musen hjertet ved hjelp av Cre-induserbar melanocyte spesifikke markører. Vår første prosedyren ble utviklet fra de som brukes til å isolere neonatale murine cardiomyocytes og gitt meget lite antall celler egnet for patch clamp opptak eller PCR analyse. Imidlertid, for å forbedre helbredeth og levedyktighet av hjerte melanocytter, for mer dyptgående elektrofysiologisk analyse eller biokjemiske studier, har vi utviklet en raffinert prosedyren fra de som er laget for å isolere kutane melanocytter. Den fremgangsmåte som er beskrevet og vist i dette har fordelen av å produsere sunnere hjerte melanocytter som kan bli belagt som en ren populasjon eller med kardiomyocytter.
Hjerte melanocyttene er tilstede i anatomiske steder i hjertet som ofte gir opphav til atrial arytmi triggere. Disse områdene omfatter lungevenene, atrioventrikulær ringrom, bakre venstre atrium og foramen ovale (figur 4). For å forstå hvilken rolle disse cellene spiller i arrhythmogenesis, vi utvikler teknikker for å isolere dem og studere deres fysiologi. Men vi anerkjent som å forbedre denne teknikken til å gi sunnere og større mengder av hjerte melanocytter ville tillate videre studier for ?…
The authors have nothing to disclose.
Dette arbeidet ble støttet av National Institutes of Health award R01 HL105734 til VVPMDL støttes delvis av National Institutes of Health Research Career Award K08 HL094748. VVP er en innovativ Forsker av American Heart Association støttet av tilskudd 11IRG900384.
Name of the reagent | Company | Catalogue number | Comment |
MCDB 153 | Sigma-Aldrich | M7403 | Dissolve in: Water |
DPBS, no calcium no magnesium | Invitrogen | 14190136 | Stock Conc.: 1X Working Conc.: 1X |
Sodium Bicarbonate, or Sodium Bicarbonate Solution, 7.5% | Sigma-Aldrich | S5761 or S8761 | Water Stock Conc.: 1X Working Conc.: 1X |
Penicillin-streptomycin | Invitrogen | 15140163 | Stock Conc.: 100X Working Conc.: 1X |
Fetal Bovine Serum | Life Technology | Certified | Working Conc.: 4% |
TPA | Sigma-Aldrich | P1585 | DMSO Stock Conc.: 3.2 μM Working Conc.: 32 nM |
Transferrin | Sigma-Aldrich | T8158 | DPBS Stock Conc.: 0.1 mg/ml Working Conc.: 1 μg/ml |
Dibutyryl cyclic AMP | Sigma-Aldrich | D0627 | DPBS Stock Conc.: 0.5 mM Working Conc.: 5 μM |
Insulin | Sigma-Aldrich | I6634 | 10 mM
acetic acid Stock Conc.: 1 mg/ml Working Conc.: 5 μg/ml |
Basic FGF | BD Biosciences | 354060 | Water Stock Conc.: 4 ng/μl Working Conc.: 4 ng/ml |