Summary
Человеческие множественной миеломы (ММ) клетки требует поддерживающей микроокружение мезенхимальных клеток и компонентов внеклеточного матрикса для выживания и пролиферации. Мы установили в естественных условиях куриного эмбриона модели с привитых человека миеломы и мезенхимальных клеток для изучения эффектов противоопухолевых лекарств на рост опухоли, инвазии и ангиогенеза.
Abstract
Множественная миелома (ММ), злокачественное заболевание плазматических клеток, остается неизлечимым и новые препараты, необходимые для улучшения прогноза пациентов. Из-за отсутствия микросреды костей и авто / паракринная факторов роста клетки ММ человека трудно культивировать. Таким образом, существует настоятельная необходимость в создании собственно в пробирке и в естественных системах культивирования для изучения действия новых терапевтических клеток ММ на человека. Здесь мы представляем модель для роста клетки множественной миеломы человека в сложной 3D-среде в пробирке и в естественных условиях. Клеточные линии ММ ОПМ-2 и RPMI-8226 были трансфицированы выразить трансгена GFP и культивировали в присутствии мезенхимных клеток человека и коллагена типа I матрицы в виде трехмерных сфероидов. Кроме того, сфероиды были привиты на хориоаллантоисной мембране (САМ) куриных эмбрионов и рост опухоли контролировали с помощью стерео флуоресцентной микроскопии. Обе модели позволяют исследование новых терапевтических друGS в сложной 3D окружающей среды и количественного определения массы опухолевых клеток после гомогенизации трансплантатов в трансгенной конкретных GFP-ELISA. Кроме того, кровеносных сосудов, ответы на хозяина и вторжения опухолевых клеток в подстилающей ткани хозяина можно контролировать ежедневно стереомикроскопом и проанализированы иммуногистохимического окрашивания против опухолевых клеток человека (Ki-67, CD138, Виментин) или настенной клеток-хозяев, охватывающих кровеносных сосудов (десмин / ОУРА).
В заключение, onplant система позволяет исследовать рост клеток ММ и ангиогенез в сложной среде 3D и позволяет скрининг новых терапевтических соединений, направленных на выживание и размножение клеток ММ.
Protocol
Согласно австрийскому законодательству, а Управления лабораторных животных благосостояния Здравоохранение эмбрионов птиц США не считаются живыми позвоночных животных, пока hatching.The НИЗ Управление лабораторией животных благосостояния не предоставил письменное руководство в этой области (HTTP: // www.grants.nih.gov/grants/olaw/references/ilar91.htm и NIH Издание № 06-4515 .:).
1. Культура клеток и Лентивирусов Трансфекцию
- Культура линии клеток ММ ОПМ-2, среда RPMI-8226 и мезенхимальных стволовых клеток человека из костного мозга в среде RPMI 1640, дополненной 10% фетальной бычьей сыворотки теленка и 100 МЕ / мл пенициллина, 100 мкг / мл стрептомицина и 2 мМ глутамина, в присутствии 5% СО 2 при 37 ° С.
- Трансфекции 5 × 10 6 клеток НЕК 293FT клетки с вирусной сборки смеси (9 мкг) ДНК и 3 мкг / V5 pLenti6 Dest EGFP вектора путем использования 30 мкл реагента для трансфекции липосомальной и трансфекции среду (10 мл). Удалить трансфекции среду после 12 ч иДобавьте 10 мл DMEM среде с 10% бычьей сыворотки теленка и 1% заменимых аминокислот (NEAA).
- Через 5 дней, собирать супернатанты HEK293FT клеток после центрифугирования плавание клеток (1000 XG, 5мин). Определить титр вируса путем ПЦР в реальном времени, как описано в другом месте 28.
- Трансфекции 1 × 10 6 клетки ММ с EGFP лентивирусных частиц (1 х 10 5 частиц) в луночного планшета в полной среде роста 24. После 3-х дней, начать процесс отбора добавлением 2 мкг / мл бластицидин в культуральную среду. Для коммерчески доступного EGFP лентивирусов, использовать 500 мкг / мл неомицина.
- Через 2 недели отбора, кластеры EGFP экспрессирующие клетки ММ появится; собирают клетки центрифугированием (1000 х г, 5 мин) и расширить их ОПМ-2 EGFP и RPMI-8226 EGFP сублиний для экспериментов (раздел 2 и 3).
2. 3D-модель множественной миеломы Сфероид
- Типа я Холод раствора коллагена и 10 х DMEM, оп лед.
- Смешайте 1/10 объема 10 х DMEM среды в коллагеновой матрице; добавить NaOH (0,2 N), чтобы нейтрализовать кислотную коллагеновую раствора до рН 7,4; магазин коллаген / средний решение на льду.
- Смешайте трансгенные линии клеток ММ (OPM-2 EGFP или RPMI-8226 EGFP; 250000 за сфероида,) с мезенхимальных клеток человека (50000 клеток / сфероида, то есть, 30 мкл капли).
- Центрифуга смесь клеток в 15 мл пробирки (1000 хг, 5мин), добавить холодную подготовленный коллагена смесь (1 мл) к осадку клеток и хорошо перемешать (с 1000 мкл кончика).
- Сразу пипетки 30 мкл смеси коллагена / клеток (100 мкл кончика) в 24-луночный планшет по стерильным парафиновой пленки и позволить клеток / коллагена смесь для полимеризации в течение 30 мин при 37 ° С (см фиг.1А).
- Наложение MM сфероиды с 1 мл культуральной среды, содержащей 1, 10 и 100 нм Бортезомиб (см фиг.1В).
- После 72 ч инкубации при 37 ° С, сфероиды документафлуоресценции стереомикроскопия (рис 1С).
- Передача каждого сфероид с помощью щипцов с широкими плоскими губками в реакционную трубку для измерения GFP (рис 1D).
3. 3D Множественная миелома модели ксенотрансплантата в CAM
- Выдержите куриные яйца в специальном инкубаторе для птиц яйца на 37 ° C и 70% влажности в течение трех дней.
- После этого открытые яйца и эмбрионы передачи в стерилизуют этанолом, квадрат, 10-см пластиковой весом лодки с клеточной культуры пластины крышкой и инкубировать "экс ово" для дальнейших шести дней, так что САМ способен развивать (рис 2А).
- Типа I Холод раствора коллагена и 10 х DMEM на льду, смесь 1/10 объема 10 х DMEM среде в коллагеновой матрице, добавить NaOH (0,2 N), чтобы нейтрализовать кислотную коллагеновую раствора до рН 7,4; магазин коллаген / средний решение на льду.
- Смешайте клеточных линий трансгенных мм (OPM-2 EGFP илиRPMI-8226 EGFP; 250000 в сфероида,) с мезенхимальных клеток человека (50000 клеток / сфероид).
- Центрифуга клетки в 15 мл пробирки (1000 XG, 5мин; для каждого испытуемого соединения 1 флакона), добавьте 1 мл холодного подготовленную смесь коллагена с препаратом (при желаемой рабочей концентрации) к осадку клеток и хорошо перемешать (с 1000 мкл кончика).
- Поместите коллагена падает (30 мкл каждый) на парафином в 6 также паштет в течение 30 мин, чтобы позволить полимеризации внеклеточного матрикса при 37 ° С.
- Передача "onplants", начиная с шага 3.6 с использованием щипцов для необработанной поверхности САМ (2 см от эмбриона) от 9-дневных эмбрионов куриных (4 onplants для каждого эмбриона курицы, рис 2B)
- Через 5 дней роста в естественных условиях в яйцо инкубатор при 37 ° С и 70% влажности, ксенотрансплантатах документа флуоресценции стереомикроскопии (рис 2С). Эвтаназии куриные эмбрионы гипотермией при 4 ° С в холодильнике в течение 5 часов.
- Удалить ксенотрансплантаты с нижележащего CAM ткани глазного ножницами и щипцы с широкими плоскими челюстями. Используйте их для измерения GFP (раздел 4, рис 2D) или для иммуногистохимического анализа кровеносных сосудов и / или вторжение опухолевых клеток (раздел 5).
4. Количественное определение белка EGFP методом ИФА
- Передача каждого сфероида мм или ксенотрансплантата вырезали в 0,5 мл буфера РИПА содержащий 200 мкг / мл ингибиторов протеазы.
- Перемешать сфероид / ксенотрансплантат с ткани гомогенизатора на льду.
- Выполните три замораживания / оттаивания-циклов в жидком азоте и 37 ° С на водяной бане.
- Центрифуга гомогената при температуре 4 ° С в течение 20 мин (12000 г) и хранения супернатанты.
- Развести образцы 1:20 в буфере для анализа (200 мкл) из комплекта ELISA. Измерьте GFP-уровни коммерческой GFP ELISA набор с использованием биотинилированных анти-GFP антитела, в соответствии с протоколом производителя.
5. Immunohistochemical Анализ сосудов и вторжение в опухолевых клетках
- Исправление вырезали ксенотрансплантатов с кулачковым области в 4% параформальдегид O / N при 4 ° С.
- Место назначения ксенотрансплантатов в заливочных кассет и передавать их в ткани вложения станции с увеличением градуированной серии спирта (50%, 70%, 80%, 95% этанола, ксилол и парафин; каждый шаг 60 мин).
- Раздел ксенотрансплантатов (5 мкм) с использованием настольной поворотного микротома. Выпекать парафиновых срезов на стеклах O / N на 56 ° C.
- Deparaffinize разделы по убывающей градуированной алкоголя серии в бидистиллированной воде (ксилол, 95%, 80%, 70%, 50% этанола, дважды дистиллированной воде; каждый шаг 10 мин).
- Выполнение извлечение антигена на водяной бане (95 ° C, 20 мин) с раствором извлечения антигена (citrate- буфера, рН 7,0, объем 100 мкл).
- Блок активности эндогенной пероксидазы с 100 мкл 3% H 2 O 2 / метанол в течение 30 мин.
- Блок-секций в PBS, содержащий10% фетальной сыворотки теленка в течение 45 мин (объем 100 мкл).
- Пятно в течение 1 часа с 100 мкл первичного антитела (1 мкг / мл), разведенного в PBS, содержащий 1% фетальной телячьей сыворотки при комнатной температуре.
- После промывки 3 раза в PBS, инкубируют в течение 1 ч с биотинилированного вторичного антитела (0,1 мкг / мл) в PBS, содержащий 1% фетальной телячьей сыворотки при комнатной температуре.
- После промывки 3 раза в PBS цветную реакцию с раствором авидин / биотин-комплекс (ABC) и диаминобензидина (DAB) подложки в соответствии с инструкциями производителя.
- 5.11. Остановить реакцию путем переноса разделов двойной дистилляции воды, контрастирующая с гематоксилином и смонтировать разделы с синтетическим монтажа среды.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Representative Results
В пробирке анализа целевых соединений в 3D Множественная миелома сфероидных анализов
Из-за ограничения культивирования первичных ММ клетки человека в пробирке мы установили новые 3D-модели культуры в пробирке для линий ММ клеток человека делает использование внеклеточной матрицы роста и благоприятной первичных мезенхимных клеток человека из костного мозга (рис 1а, б). EGFP линии трансгенных клеток ММ позволяют визуализировать и количественно М. опухолевой массы после роста в 3D сфероидов. Обе клеточные линии ММ ОПМ-2 EGFP и RPMI-8226 EGFP культивировали в течение 3 дней в присутствии возрастающих концентраций (1- 100 нм) и бортезомибом опухолей были визуализированы с помощью экспрессии GFP на стерео флуоресцентного микроскопа (рис 1C) , Масса опухолевых клеток количественно после гомогенизации сфероидов и измерительных содержание EGFP с помощью GFP-ELISA (рис 1D).
В естественных условиях анализа целевых соединений в нескольких ксенотрансплантатах миеломы в куриных эмбрионах
Три дня старый куриные эмбрионы культивировали бывших ово в течение 6 дней и в день 9, используемый для прививки клеток ММ (2А). EGFP трансгенные клетки миеломы (ОПМ-2 EGFP), вместе с человеческих мезенхимальных клеток костного мозга были встроены в коллагена типа I, как внеклеточного матричного компонента. Бортезомиб целевое вещество наносили местно на 1 нмоль (рис 2b). Для каждого животного 4 "onplants" были привиты на хорионаллантоисной мембраны (CAM) куриного эмбриона. Через 5 дней, MM ксенотрансплантатов опухоли образуются, которые могут быть визуализированы с помощью экспрессии EGFP. По сравнению с контрольной группой, бортезомиб ингибируют рост клеток ММ в ксенотрансплантатов. Прививки отображается меньше зеленый мм Масса опухолевых клеток (рис 2С). Холост MM ксенотрансплантаты из йРЗЭ различных животных (N = 12) вырезали, гомогенизировали, а затем, измеряется с помощью ELISA GFP. При прямом сравнении с контрольной бортезомибом обработанные ксенотрансплантаты имели значительно уменьшенную массу клеток миеломы (рис 2D).
В естественных условиях анализа ангиогенных ответов и вторжения миеломы ксенотрансплантатах в куриных эмбрионах
Ангиогенные ответы около onplants можно наблюдать стереомикроскопии. Васкуляризация ксенотрансплантатах была значительно снижена в наркотиков лечение ксенотрансплантатах (1 нМол Plitidepsin, рисунок 3). Ангиогенные ответы были количественно путем подсчета кровеносных сосудов прорастания в onplant как описано в желатиновой губки анализе путем Ribatti соавт. 21.
Для анализа вторжения, ксенотрансплантатов вырезали с смежной области CAM. Ксенотрансплантаты были зафиксированы, заливали в парафин и разделов, подготовленных (рисунок 4 (рисунок 4).
Рисунок 1. 3D Множественная миелома Сфероиды. () Генерация OPM-2 EGFP и RPMI-8226 EGFP сфероидов с первичных человеческих костного мозга мезенхимальных клеток и коллагена типа I, как внеклеточной матрицы компонента. (B) сфероидов инкубировали с культуральной средой и соответствующего концентрации бортезомибом (1- 100 нм). (С) мм сфероиды были выращены в течение 3 дней и фотографировали с помощью стерео-флуоресцентного микроскопа. Бары указывают 500 мкм. (D) Одноместный SPHeroids гомогенизировали в буфере для лизиса, после чего, измеряли в ELISA GFP. Были рассчитаны GFP концентрации отдельных сфероидов (п = 5, среднее ± SEM). Звезды указывают на значения р <0,05; Ко = контроль; BZB = Бортезомиб. Пожалуйста, нажмите здесь, чтобы посмотреть большую версию этой фигуры.
Рисунок 2. множественной миеломы модели ксенотрансплантата. () В день развития 9 бывших ово куриные эмбрионы были использованы для прививки эксперименты. (Б) ОПМ-2 EGFP и RPMI-8226 EGFP были смешаны с первичных человеческих мезенхимальных костного мозга клеток, коллаген типа I, как внеклеточного матричного компонента и с 1 нМ бортезомиба. После затвердевания сфероиды (N = 4) были привиты на хориоаллантоисной мембране куриного эмбрионас. (С) в течение 5 дней ММ трансплантатов в CAM могут быть визуализированы с помощью экспрессии EGFP. Ксенотрансплантаты можно сфотографироваться ежедневно стерео-флуоресцентного микроскопа. Бары указывают 500 мкм. (D) Одноместный MM ксенотрансплантаты вырезали с нижележащего CAM ткани, гомогенизировали в буфере для лизиса и измеряется в GFP ELISA. Были рассчитаны GFP концентрации отдельных опухолей (N = 12, среднее ± SEM). Звезды указывают на значения р <0,05; BZB = Бортезомиб. Пожалуйста, нажмите здесь, чтобы посмотреть большую версию этой фигуры.
Рисунок 3. Анализ миеломы ангиогенеза. MM ксенотрансплантаты (ОПМ-2 EGFP) были зарегистрированы пять дней после трансплантации на САМ куриных эмбрионов. В сравнении с контрольной трансплантатов, сточных вENT с plitidepsin (1nMol, п = 10) в результате поверхностно растущие опухоли, которые были менее развитую сосудистую сеть по CAM ткани. Кровеносные сосуды растут на onplants (красный) подсчитывали как показано в графической модели типов кровеносных сосудов. Бары указывают 1 мм. Пожалуйста, нажмите здесь, чтобы посмотреть большую версию этой фигуры.
Рисунок 4. Анализ миеломы вторжения клеток. Иммуногистохимический анализ ММ ксенотрансплантатах (ОПМ-2 EGFP) с нижележащего принимающей CAM ткани (Бортезомиб лечение против контроля). Пролиферирующие клетки ММ человека пятно положительным для Ki-67, CD138 и Виментин и вторгнуться в кластеры клеток ткани хозяина. Курица кровеносные сосуды окрашены росписи клеточных маркеров ОУРА (больших сосудов и артерий) и десмина (капилляров). Magnificatiна 200х, звездочки показывают кровеносные сосуды САМ. Пожалуйста, нажмите здесь, чтобы посмотреть большую версию этой фигуры.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Discussion
Разработка новых терапевтических агентов для огнеупорной ММ требует меньше времени и средств в естественных систем, чтобы оценить чувствительность клеток ММ человека к наркотикам. До сих пор, только несколько в естественных систем для доклинической оценки новых анти-миеломы терапии. Все они имеют свои ограничения для крупномасштабного скрининга библиотек соединений 29.
Лучшие современные модели для клеток ММ человека весьма иммунные дефицитные мыши 7,13,30 и Турция эмбрионы 29. Оба SCID мыши и птиц модели эмбрион ксенотрансплантатов может быть использован для изучения биологии ММ и проверить новые терапевтические соединения. Тем не менее, мышиные системы имеют ряд ограничений, в том числе врожденной генотипа, технически сложных процедур, длительных периодов наблюдений и высокой стоимости.
В этом исследовании, роман 3D сфероида и птичий модель ксенотрансплантата представлен для изучения биологии человеческого MM клеток, что подразумевает наличие человека месenchymal стволовых клеток и внеклеточного матрикса, как вспомогательные компоненты. MM клетки сильно зависят от их соответствующей микросреде, т.е. наличие стромы факторы роста, цитокины и компонентов ECM, чтобы выжить и размножаться 31-33. Кроме того, препараты могут быть неэффективны или отобразить измененное активность при клетки миеломы защищены их микроокружения 31,34.
По сравнению с мышиных моделях, описанных в 3D пробирке и в естественных условиях модельных систем, не дорого, быстро и легко в обращении. Кроме того, пересадка 3D ММ сфероидов в куриных эмбрионах позволяет проводить анализ миеломы индуцированного ангиогенеза. Ограничение нашей системы короткое время роста клеток ММ и, таким образом, анализ метастазов птиц костей невозможно. Дальнейшее ограничение наших моделей является то, что мы работаем с местным применением препаратов в CAM, что не может отразить системные приложения и оборота наркотиков / модификации от ферментов печени. ВКроме того, выживаемость примерно 50% до прививки наблюдалось за счет экс ово условий роста куриных эмбрионов. Что касается эндотелиальных маркеров для анализа IHC, большинство маркеров, используемые в человека и мыши разделе окрасить эндотелиальные клетки не являются специфическими для кровеносных сосудов в курицу. Поэтому, мы рекомендуем окрашивание для росписи клеточных маркеров десмин / ОУРА или инъекции лектинов в куриных эмбрионах 35. Не все доступные линии клеток миеломы человека вырастет инвазивно в куриный ткани хозяина и отображения поверхностный рост. Это приведет к разрушенной ткани после резки разделы на микротоме. Кроме того, особое внимание (выбор антибиотиков) должны быть приняты, что трансфицированные клетки не теряют выражение GFP трансгена во времени, из-за постоянных перестроек генетических или метилирования ДНК процессов.
В заключение, наша курица эмбрион ксенотрансплантат модель ММ клеток человека с стромы поддержки предусматривает воспроизводимым и предсказуемым в естественных условиях модель студу рост человеческого ММ клеток и ангиогенез. Это описано ММ модель может способствовать быстрее в естественных процессов скрининга анти-ММ наркотиков, помогая сократить время и стоимость разработки новых лекарственных средств для. С дальнейшим шагам оздоровительных, таких как кости замены материала, сложный ECM матрицы и цитокинов система может быть улучшена для тестирования терапии и против образцов. Это является необходимым условием для персонализированной медицины рака и тестирования лекарственной чувствительности в отдельных огнеупорных больных ММ.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Disclosures
Авторы не имеют конкурирующие финансовые интересы
Materials
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| RPMI-8226 cells | DSMZ | ACC 9 | STR profiled |
| OPM-2 cells | DSMZ | ACC 50 | STR profiled |
| Human mesenchymal stem cells | PromoCell | PC-C-12974 | |
| HEK293FT cells | Invitrogen | R700-07 | |
| RPMI1640 Medium | Sigma Aldrich | R0883 | |
| Fetal Bovine Serum HyClone | ThermoScientific | SH30070.03 | |
| L-Glut- Pen- Strep solution | Sigma | G6784 | |
| DMEM Medium | Gibco | 31966 | |
| NEAA | Sigma Life Sciences | M7145 | |
| Transfection Medium/Opti-MEM | Gibco | 51985 | |
| eGFP lentiviral particles | GeneCopoeia | LPP-EGFP-LV105 | Ready to use viral particles |
| pLenti6/V5Dest6 eGFP vector | Invitrogen | PN 35-1271 | from authors |
| ViralpowerTM packaging mix | Invitrogen | P/N 35-1275 | |
| Transfection reagent/ Lipofectamin 2000 | Invitrogen | 11668-027 | |
| Blasticidin | Invitrogen | R210-01 | |
| Neomycin | Biochrom | A2912 | |
| Collagen-Type1 Rat Tail | BD Biosciences | 354236 | |
| DMEM powder | Life Technologies | Art.Nr. 10338582 | |
| plitidepsin | Pharmamar | ||
| bortezomib | LKT Lab., Inc. | B5871 | |
| SPF-white hen eggs | Charles River | Fertilized white Leghorn chicken eggs | |
| Plastic weighing boats | neoLab | Art.Nr. 1-1125 | for ex-ovo culture |
| Petridish square (Lids) | Simport | D210-16 | for ex-ovo culture |
| RIPA Buffer (10x) | Cell Signaling | #9806 | |
| Protease Inhibitor Tablets | Roche | 11 836 170 001 | |
| Complete Mini EDTA-free | |||
| GFP ELISA | Cell Biolabs, Inc. | AKR-121 | |
| Histocette II | Simport | M493-6 | |
| PFA 37% | Roth | 7398.1 | |
| DPBS | Lonza | BE17-512F | |
| Ethanol absolut | Normapur | 20,821,321 | |
| Roti-Histol | Roth | Art.Nr.6640.4 | |
| Paraplast | Sigma | A6330 | |
| SuperFrost Microscope Slides | R. Langenbrinck | Art.-Nr. | |
| Labor- u. Medizintechnik | 03-0060 | ||
| DakoCytomation Wash Buffer 10x | DakoCytomation | Code-Nr. | |
| S 3006 | |||
| Target Retrieval Solution (10x) pH 6,1 | DAKO | Code-Nr. | |
| S 1699 | |||
| H2O2 | Merck | ||
| m-a-hu ASMA clone 1A4 | DAKO | M0851 | |
| m-a-hu CD138 clone MI15 | DAKO | M7228 | |
| m-a-hu Vimentin clone V9 | DAKO | M0725 | |
| m-a-hu Desmin clone D33 | DAKO | M0760 | |
| m-a-hu Ki67 clone MIB-1 | DAKO | M7240 | |
| biotinylated goat- anti-mouse IgG | Vector Laboratories Inc. | BA-9200 | |
| Vectastain Elite ABC Kit | Vector Laboratories Inc. | # PK-6100 | |
| FAST DAB Tablet Set. | Sigma Biochemicals | # D4293 | |
| Mayer’s haemalaun solution | Merck | 1,092,490,500 | |
| Roti Histokitt | Roth | Art.Nr.6638.2 | |
| Bench top rotary microtome | Thermo Electron, Shandon Finesse ME+ | ||
| Tissue embedding station | Leica, TP1020 | ||
| Egg-Incubator | Grumbach | BSS160 | |
| Stereo fluorescence microscope equipped with an connected with a digital camera (Olympus E410) and flexible cold light | Olympus, SZX10 | ||
| Ultra Turrax | IKA T10 | Homogenizer |
References
- Kuehl, W. M., Bergsagel, P. L. Multiple myeloma: evolving genetic events and host interactions. Nat.Rev.Cancer. 2 (3), 175-187 (2002).
- Kumar, S. K., Gertz, M. A. Risk adapted therapy for multiple myeloma: back to basics. Leuk.Lymphoma. , (2014).
- Prideaux, S. M., Conway, O. E., Chevassut, T. J. The genetic architecture of multiple myeloma. Adv.Hematol. 2014, 864058 (2014).
- Chauhan, D., et al. A novel orally active proteasome inhibitor ONX 0912 triggers in vitro and in vivo cytotoxicity in multiple myeloma. Blood. 116 (23), 4906-4915 (2010).
- Kuehl, W. M. Mouse models can predict cancer therapy. Blood. 120 (2), 238-240 (2012).
- Nefedova, Y., Gabrilovich, D. Mechanisms and clinical prospects of Notch inhibitors in the therapy of hematological malignancies. Drug Resist.Updat. 11 (6), 210-218 (2008).
- Yaccoby, S., Barlogie, B., Epstein, J. Primary myeloma cells growing in SCID-hu mice: a model for studying the biology and treatment of myeloma and its manifestations. Blood. 92 (8), 2908-2913 (1998).
- Dazzi, F., et al. Normal and chronic phase CML hematopoietic cells repopulate NOD/SCID bone marrow with different kinetics and cell lineage representation. Hematol.J. 1 (5), 307-315 (2000).
- Lock, R. B., et al. The nonobese diabetic/severe combined immunodeficient (NOD/SCID) mouse model of childhood acute lymphoblastic leukemia reveals intrinsic differences in biologic characteristics at diagnosis and relapse. Blood. 99 (11), 4100-4108 (2002).
- Feuring-Buske, M., et al. Improved engraftment of human acute myeloid leukemia progenitor cells in beta 2-microglobulin-deficient NOD/SCID mice and in NOD/SCID mice transgenic for human growth factors. Leukemia. 17 (4), 760-763 (2003).
- Pearce, D. J., et al. AML engraftment in the NOD/SCID assay reflects the outcome of AML: implications for our understanding of the heterogeneity of AML. Blood. 107 (3), 1166-1173 (2006).
- Li, M., et al. Combined inhibition of Notch signaling and Bcl-2/Bcl-xL results in synergistic antimyeloma effect. Mol.Cancer Ther. 9 (12), 3200-3209 (2010).
- Tassone, P., et al. A clinically relevant SCID-hu in vivo model of human multiple myeloma. Blood. 106 (2), 713-716 (2005).
- Ranga, A., Gjorevski, N., Lutolf, M. P. Drug discovery through stem cell-based organoid models. Adv.Drug Deliv.Rev. 69-70, 19-28 (2014).
- Pereira, R. F., Barrias, C. C., Granja, P. L., Bartolo, P. J. Advanced biofabrication strategies for skin regeneration and repair. Nanomedicine.(Lond). 8 (4), 603-621 (2013).
- Fischbach, C., et al. Engineering tumors with 3D scaffolds). Nat.Methods. 4 (10), 855-860 (2007).
- Boulland, J. L., Halasi, G., Kasumacic, N., Glover, J. C. Xenotransplantation of human stem cells into the chicken embryo. J.Vis.Exp. (41), (2010).
- Deryugina, E. I., Quigley, J. P. Chapter 2. Chick embryo chorioallantoic membrane models to quantify angiogenesis induced by inflammatory and tumor cells or purified effector molecules. Methods Enzymol. 444, 21-41 (2008).
- Deryugina, E. I., Quigley, J. P. Chick embryo chorioallantoic membrane model systems to study and visualize human tumor cell metastasis. Histochem.Cell Biol. 130 (6), 1119-1130 (2008).
- Kern, J., et al. GRP-78 secreted by tumor cells blocks the antiangiogenic activity of bortezomib. Blood. 114 (18), 3960-3967 (2009).
- Ribatti, D., Nico, B., Vacca, A., Presta, M. The gelatin sponge-chorioallantoic membrane assay. Nat.Protoc. 1 (1), 85-91 (2006).
- Ribatti, D. The chick embryo chorioallantoic membrane as a model for tumor biology. Exp.Cell Res. , (2014).
- Dohle, D. S., et al. Chick ex ovo culture and ex ovo CAM assay: how it really works. J.Vis.Exp. (33), (2009).
- Kobayashi, T., et al. A chick embryo model for metastatic human prostate cancer. Eur.Urol. 34 (2), 154-160 (1998).
- Koop, S., et al. Fate of melanoma cells entering the microcirculation: over 80% survive and extravasate. Cancer Res. 55 (12), 2520-2523 (1995).
- Martowicz, A., Spizzo, G., Gastl, G., Untergasser, G. Phenotype-dependent effects of EpCAM expression on growth and invasion of human breast cancer cell lines. BMC.Cancer. 12, 501 (2012).
- Martowicz, A., et al. EpCAM overexpression prolongs proliferative capacity of primary human breast epithelial cells and supports hyperplastic growth. Mol.Cancer. 12, 56 (2013).
- Geraerts, M., Willems, S., Baekelandt, V., Debyser, Z., Gijsbers, R. Comparison of lentiviral vector titration methods. 6, 34 (2006).
- Farnoushi, Y., et al. Rapid in vivo testing of drug response in multiple myeloma made possible by xenograft to turkey embryos. Br.J.Cancer. 105 (11), 1708-1718 (2011).
- Wunderlich, M., Krejci, O., Wei, J., Mulloy, J. C. Human CD34+ cells expressing the inv(16) fusion protein exhibit a myelomonocytic phenotype with greatly enhanced proliferative ability. Blood. 108 (5), 1690-1697 (2006).
- Hideshima, T., Mitsiades, C., Tonon, G., Richardson, P. G., Anderson, K. C. Understanding multiple myeloma pathogenesis in the bone marrow to identify new therapeutic targets. Nat.Rev.Cancer. 7 (8), 585-598 (2007).
- Parikh, M. R., Belch, A. R., Pilarski, L. M., Kirshner, J. A three-dimensional tissue culture model to study primary human bone marrow and its malignancies. J.Vis.Exp. (85), (2014).
- Schuler, J., Ewerth, D., Waldschmidt, J., Wasch, R., Engelhardt, M. Preclinical models of multiple myeloma: a critical appraisal. Expert.Opin.Biol.Ther. 13, Suppl 1. S111-S123 (2013).
- Kirshner, J., et al. A unique three-dimensional model for evaluating the impact of therapy on multiple myeloma. Blood. 112 (7), 2935-2945 (2008).
- Jilani, S. M., et al. Selective binding of lectins to embryonic chicken vasculature. J.Histochem.Cytochem. 51 (5), 597-604 (2003).
