Protocol
وقد تمت الموافقة على جميع الإجراءات التجريبية من قبل لجنة رعاية الحيوان المؤسسية واستخدم مستشفى ماكلين. ملاحظة: يصف بروتوكول اتباع نهج واحد لحزب الشعب الكمبودي والتوعية الحركي، الكثير من التفاصيل التي تختلف عن غيرها من البروتوكولات ناجحة (على سبيل المثال، ضوئية مقابل في المرحلة المظلمة الاختبار، على التوالي مقابل جرعات متقطعة، وما إلى ذلك). قد ترغب المبتدئين لتبدأ هذه البروتوكولات، أو ببساطة استخدامها كأدلة، والتكيف مع التغيرات من الأدب على أساس تجريبي السؤال (ق) في متناول اليد. ووصف طرق القياس الآلي. ومع ذلك، فإنه من الممكن استخدام وسائل غير مؤتمتة لكل فحص (أي، تسجيل الفيديو، ومن ناحية التهديف).
1. مشروطة مكان الأفضلية
- المعدات وغرفة تعيين الهاتفي:
- التعامل مع فئران التجارب لمدة 1-3 دقيقة كل يوم، لمدة 3-5 أيام على الأقل قبل الاختبار.
ملاحظة: التعامل معها أبدا الفئران قد تجد إزالة من تعزيز بنية الشع الغرفةssful، التي يمكن أن تتداخل مع أو تغيير تكييف. - الحصول على أربعة أو أكثر من أجهزة حزب الشعب الكمبودي ثلاث غرف، مجهزة يفضل مع photobeams لجمع البيانات آليا (18). تأكد من أن كل غرفة واثنين من أكبر وغرف visually- وكثير اللمس، متميزة تربط ل، غرفة محايدة الصغيرة عبر الأبواب التي يمكن أن تثار / خفض للتحكم في الوصول. يجب الأغطية على كل من المجلسين فتح لإدراج / إزالة الفئران وأن يتم تنظيمها مع، يمكن السيطرة عليها بشكل فردي أضواء صغيرة (عكس الضوء) (واحدة لكل غرفة).
ملاحظة: حزب الشعب الكمبودي تصاميم غرفة تختلف ويمكن شراؤها تجاريا أو التي شيدت من قبل الباحثين. لتصميم "متوازن"، وهي خطة الموصى بها هي واحدة أكبر غرفة مع الجدران البيضاء والأرضيات سلك الشبكة والآخر مع الجدران السوداء والأرضيات العارضة. يجب أن يكون غرفة الوسطى الجدران الرمادية والأرضيات شبكي الرمادية الصلبة. لأغراض التفسير، هذه الدوائر وسوف يشار إليها باسم "أبيض"، "الأسود" و "المتوسطة".يجب أن تكون الأغطية واضح زجاج شبكي. تكوينات حجرة بديلة (واحد أو اثنين من غرفة) هي أيضا ممكنة وناقشت مكان آخر (انظر مناقشة). - إعداد غرفة كما سيتم خلال الاختبار: إيقاف أو مجموعة أضواء علوية لالأكثر خفوت الإعداد وإغلاق الباب. استخدام ضوء متر داخل كل غرفة وتعيين أضواء الغطاء بحيث الدوائر المتوسطة هي أكثر إشراقا قليلا (15-20 لوكس) من الدوائر السوداء والبيضاء (6-10 لوكس) وذلك للحد من الفئران من قضاء بعض الوقت هناك.
ملاحظة: إذا كان متوسط الوقت الذي يقضيه في منتصف هو بقدر أو أكثر مما كانت عليه في غرف سوداء أو بيضاء، زيادة على النقيض الإضاءة هو موضح في الخطوة 1.1.3. بدلا من ذلك، استخدام الأرضيات أقل جاذبية للوسط. (على سبيل المثال، ~ 220 0.5 سم ثقوب قطرها، متباعدة بشكل متساو في 6 × 3.5 × ¼ "زجاج شبكي)، ولكن تجنب الوقوع في هذه القاعة مكره. التجريبية أي تعديلات لضمان أن يقلل في الوقت المتوسط ليست بسبب انخفاض في إجمالي الاستكشافات (المعابر) . - Program جمع البيانات آليا ( "الإجراء" الشكل 1A) أو يدويا جمع البيانات وفقا للمعايير التالية. تعيين تجارب تبدأ بناء أول كسر شعاع في أي من المجلسين تكييف. تعيين جلسات "اختبار" ليكون 20 دقيقة في طول وتتبع الوقت الذي يقضيه والحزم فواصل في كل غرفة. تعيين جلسات "تكييف" ليكون 30 دقيقة طويلة و(اختياريا) لقياس فواصل شعاع في كل غرفة. تعيين كافة أضواء غرفة لإلقاء الضوء أثناء المحاكمة.
- إعداد حجم الكامل من حل الكوكايين المطلوبة للتجربة في متناول اليد. حل الكوكايين حمض الهيدروكلوريك في 0.9٪ كلوريد الصوديوم (المالحة)، مستندة على التركيز النهائي على وحدة ضخ 0.1 مل / 10 غرام من وزن الجسم (على سبيل المثال، لجرعة من 5 ملغ / كغ، وتركيز الحل هو 0.5 ملغ / مل). خليط دوامة لمدة 30-45 ثانية، وتصفية العقيمة (0.2 ميكرون مرشحات حقنة) وتخزينها في RT.
- التعامل مع فئران التجارب لمدة 1-3 دقيقة كل يوم، لمدة 3-5 أيام على الأقل قبل الاختبار.
- الاختبار:
ملاحظة: الجدول الزمني العام لحزب الشعب الكمبودي هو PRE-TEST، تكييف، وثم بعد الاختبار. يجوز فصل الاختبار القبلي من تكييف من 1-3 أيام. ومع ذلك، ينبغي تكييف واليوم بعد الاختبار تتم في أيام متتالية (الشكل 2A). يجب أن تبقى هذا التوقيت نفسه بالنسبة لجميع الأفواج في التجربة نفسها.- اختبار خلال المرحلة الخفيفة الحيوانات باستخدام نفس الجهاز لكل حيوان مدار الأيام.
- كل يوم المحاكمة (أي، التجارب والأيام تكييف)، ونقل الفئران إلى حجرة الانتظار السلوكية والسماح لهم الجلوس دون عائق في أقفاص وطنهم لقبل المحاكمة 1-1.5 ساعة. اختيار الموقع حيث الفئران يمكن نقلها بسرعة من القفص لجهاز، مع أقل قدر من الاضطراب، عند بدء المحاكمة. تشغيل جميع المعدات بحيث أن أي ضوضاء المرتبطة الاختبار (على سبيل المثال، والمراوح المعدات) موجودة.
- تنظيف شامل كل جهاز (الجدران الداخلية والأرضيات وصواني) مع خفيفة، الكحول، وجلايكول-ether- أو القائمة على الأمونيا تعقيم مناديل قبل وبعد كل فأر (استخدام سامنوع البريد الأنظف في كافة مراحل التجربة). لا تهمل الأرضيات السفلى.
- تحقق من المقرر أن أضواء غرفة بشكل مناسب (خارج أو خافتة) في بداية كل يوم.
- المضي قدما في ما يلي وفقا لما إذا كان "اختبار" أو "تكييف" اليوم:
- على أيام المحاكمة 1 و 6 (أي قبل وبعد الاختبارات)، ووضع الأبواب بين غرفة في موقف فتح (الشكل 2B).
- تحميل "اختبار" برنامج الكمبيوتر وأدخل معرفات الحيوانية (الشكل 1A)، ثم إصدار أمر بدء (الشكل 1B)، إن وجدت.
- انخفاض بلطف كل فأر في غرفة الوسطى من جهاز المسندة إليه، ووجهه إلى الحائط الخلفي، وبهدوء إغلاق الغطاء. مرة واحدة يتم تحميل جميع الدوائر، ومغادرة قاعة الاختبار وتقليل الضوضاء.
- ترك الفئران داخل كل جهاز حتى أغلقت المحاكمات لجميع الفئران / انتهى (الشكل 1C). معطيات التجارب التصدير.
<لى> فقط قبل أو بعد إجراء الاختبار القبلي لل، وزن الحيوانات. استخدام هذه الأوزان لحساب جرعة خلال تكييف.
- من أجل التحضير للمحاكمات تكييف، وحساب كل فأر في مرحلة ما قبل الاختبار "تفضيل" للدوائر السوداء والبيضاء عن طريق طرح الوقت الذي يقضيه في كل من هذه من الآخر (أي "الأسود ناقص الأبيض" و "الأبيض ناقص الأسود"، وانظر الشكل (3)، الأعمدة 9 و 10).
- منذ الفئران مع تفضيلات الأولية قوية تجعل التوازن الصعب، ووضع حدا مقبولا لعشرات تفضيل (على سبيل المثال، <33٪ من إجمالي وقت المحاكمة) واستبعاد الفئران التي تتجاوز ذلك من العمليات الحسابية. استخدام الحد الليبرالي (<66٪ من إجمالي وقت المحاكمة) لتعظيم إدراج عندما يكون من المحتمل الاستنزاف بعد اكتمال الاختبار (على سبيل المثال، بسبب بعيدا عن الهدف التلاعب الجراحية).
ملاحظة: لا يزال الفئران تجاوز الحد يتم اختبارها، مع محاولة للحفاظ على تفضيلات قبل الاختبار متوازنة. وفي وقت لاحق، رالفئران ذات المناظر يمكن استبعادها من التحليل، وإذا لزم الأمر، لتحقيق التوازن عشرات قبل الاختبار. إذا المتطرفة التحيزات قبل الاختبار (أي،> 800 ثانية) تؤثر بشكل غير متناسب مجموعة واحدة، والنظر في تغيير البيئات تكييف و / أو استخدام فحوصات أخرى. - اختيار غرفة سوداء أو بيضاء مثل غرفة الاقتران المخدرات لكل الماوس، ملخصا وفي الوقت نفسه عشرات تفضيل ما قبل اختبار المقابلة داخل كل مجموعة مع الأولويات التالية في الاعتبار:
ملاحظة: احرص على تحقيق التوازن بين العشرات بين الجماعات داخل كل جماعة وكذلك عبر أي الأفواج السابقة.- جعل المبالغ لجميع الفئات كما تعادل ممكن.
- جعل مبالغ أقرب إلى الصفر قدر الإمكان (أي اختيار الجانب المفضل لبعض الفئران والجانب غير المفضل للآخرين). إذا كان قريب من الصفر المبلغ هو المستحيل على أي مجموعة معينة، وإعادة ضبط جميع الآخرين إلى المباراة عن كثب على أفضل نتيجة يمكن الحصول عليها لمجموعة الحد، لصالح مجموعة السلبية قليلا تلخص مدىإيجابي.
- وبقدر الإمكان، والحفاظ على الواجبات السوداء مقابل أبيض ويفضل مقابل غرف غير المفضلة بالنسبة لأزواج المخدرات حتى داخل كل مجموعة.
- كما أنه ليس من الممكن دائما لتحقيق الأهداف المذكورة أعلاه، تصحيح أي انحرافات بجعل معارضة اعتبارات التوازن في الأفواج في وقت لاحق. ومع ذلك، في محاولة لتجنب إنتاج الأفواج مع متوسط مختلفة بعنف تفضيلات قبل الاختبار.
- على تكييف يوم 2-5، ووضع الأبواب بين غرفة مغلقة في الموقف (الشكل 2C).
- إعداد الحقن الفردية مع الكوكايين (أيام 2 و 4) أو المالحة (أيام 3 و 5) حل، كما هو موضح في الخطوة 1.1.5 وبناء على وزن الجسم تقاس في مرحلة ما قبل الاختبار.
وينبغي اختيار الجرعة فيما يتعلق التوقعات التجريبية، الاعتبارات المذكورة في المقدمة، والأرضية والسقف الآثار المحتملة: ملاحظة. غالبا ما يكون من الأفضل لإجراء تجارب مستقلة باستخدام اثنين على الأقل جرعات مختلفة. - تحميل "جمعرفات الحيوان onditioning "برنامج الكمبيوتر وأدخل (الشكل 1A)، ثم إصدار أمر بدء (الشكل 1B)، إن وجدت.
- القفا وحقن كل فأر (الملكية الفكرية)، وتخفيض على الفور الى غرفة سوداء أو بيضاء المناسبة من جهاز المسندة إليها في مواجهة الحائط الخلفي، ثم بهدوء إغلاق الغطاء. مرة واحدة يتم تحميل جميع الدوائر، ومغادرة قاعة الاختبار وتقليل الضوضاء.
- إزالة الفئران من الغرفة الخاصة بهم أقرب إلى بالضبط 30 دقيقة ممكنا حتى (أي، تتم إزالة الفئران أول من الدوائر، بينما الفئران الأخرى لا تزال تكييف). إزالة الحيوانات كما بهدوء ممكن، دون إدخال الضوضاء.
- اختيار طريقة التحليل. إما وقت طرح قضى على الجانب يقترن المالحة خلال مرحلة ما بعد اختبار من الوقت الذي يقضيه على الجانب يقترن الكوكايين خلال الاختبار البعدي (الكوكايين - المالحة، ثانية) أو استخدام الوقت الذي يقضيه في غرفة-يقترن المخدرات في مرحلة ما بعد اختبارناقص الوقت قبل الاختبار قضى على غرفة-يقترن المخدرات.
ملاحظة: في حالة استخدام الأسلوب الأول، أيضا الرسوم البيانية خط المؤامرة متوسط الوقت الذي يقضيه في الوسط، غرف saline- ويقترن المخدرات خلال اختبارات بعد قبل ولكل مجموعة. بالمقارنة مع ما قبل الاختبار، ويجب أن مرحلة ما بعد اختبار تظهر زيادة الوقت في الجانب يقترن المخدرات وانخفض الوقت الذي يقضيه في الجانب يقترن المالحة (انظر الشكل 6، أسفل، ومناقشة لشرح). - وهذا يتوقف على طبيعة وعدد من الجماعات يجري مقارنة، استخدام اختبار (ت)، واحدة أو اتجاهين أنوفا، حسب الاقتضاء، وربما مع تحليل ما بعد مخصصة، لتحليل أي من عشرات الطرح قدمت المذكورة.
ملاحظة: عشرات تفضيل الكوكايين تميل إلى أن تكون متغيرة، وعلاوة على ذلك، يمكن أن تكون سلبية (أي، تشير إلى النفور من الجانب يقترن المخدرات). الفئران التي تظهر النفور لا يجب إزالة (ما لم تكن القيم المتطرفة الإحصائية)، حيث أن هذه نتيجة طبيعية ويرجح هامة لتحديد الاختلافات بين غرامoups. نتوقع أن يحتاج حجم العينة من 12 إلى 30 حيوانات في كل مجموعة، وهذا يتوقف على حجم تأثير العلاج.
2. الحركي للتوعية
- المعدات وغرفة تعيين الهاتفي
- الحصول على 4 × 8 (X X Y) photobeam مجموعة (أبعاد خارجية 11.5 "× 20"). بناء على الغرفة ذات السقف المفتوح مصنوعة من زجاجي أسود (الأبعاد الداخلية 22 1/6 "× 13 ¾" × 9 3/8 ") لإيواء مجموعة الشكل (4A).
- إعداد غرفة الاختبار بحيث الضوء الأحمر (ceiling- أو الحائط) يمكن استخدامها أثناء الاختبار.
- إعداد دورات برنامج منفصلة عن التعود وحقن التجارب اليومية.
- تعيين المحاكمات التعود أن يكون بين 30-60 دقيقة، وحقن التجارب ما بين 60-120 دقيقة (الشكل 5B). طول الموصى بها لكل 60 دقيقة. حافظ على طول المحاكمة متناسقة عبر الأفواج متعددة داخل نفس التجربة.
- تعيين تجارب تبدأ ريكوrding على كسر شعاع الأولى التي يحدث بعد بدء إشارة البدء (الشكل 5B). للمحاكمة الحقن، وتعيين إشارة البداية حتى أن صناديق يمكن بدء فردي (وليس في انسجام تام)، إذا كان ذلك ممكنا.
- فواصل شعاع من المقرر أن يتم تسجيلها في المعرفة "صناديق"، ويفضل 5 دقائق لكل منهما (الشكل 5B).
- إعداد حجم الكامل من حل الكوكايين المطلوبة للتجربة في متناول اليد. حل الكوكايين حمض الهيدروكلوريك في 0.9٪ كلوريد الصوديوم (المالحة)، مستندة على التركيز النهائي على وحدة ضخ 0.1 مل / 10 غرام من وزن الجسم (على سبيل المثال، لجرعة من 5 ملغ / كغ، وتركيز الحل هو 0.5 ملغ / مل). خليط دوامة لمدة 30-45 ثانية، وتصفية العقيمة (0.2 ميكرون مرشحات حقنة) وتخزينها في RT.
- تجريب
ملاحظة: إن المرحلة الأولى من اختبار تمتد ل10-11 أيام متتالية. الفئران تتلقى تجربتين اليومية: التعود (خالية من حقن)، والحقن. إدارة المالحة لأول ثلاثة إلى fأيامنا (انظر مناقشة لأهمية التعود المالحة)، والكوكايين لسبعة المقبل باستخدام نفس الجرعة (على سبيل المثال، 15 ملغ / كغ / يوم).- كل يوم، يتأقلم الفئران في أقفاص وطنهم إلى غرفة المدخل السلوكي لمدة 30 دقيقة إلى 1 ساعة.
- إعداد نظيفة القياسية واضحة أقفاص السكن الاكريليك الماوس الحجم مع طبقة رقيقة جدا من الفراش الطازجة (مثل رقائق الصنوبر)، وذلك لعدم photobeams غامضة، إن أمكن (الشكل 4C & D).
- أقفاص مكان ضد العمودي للمجموعة photobeam قرب نهاية واحدة، بحيث يتباعد خمس عوارض بالتساوي على طوله. لا يتم استخدام أشعة X-axis في هذا الاختبار (الشكل 4C & D).
- خذ الفئران من القفص وطنهم، وبترتيب عشوائي، القفا ووزن لهم. إزالة كل فأر من وزن القارب قاعدة الذيل (مع الدعم) ومكان مباشرة إلى من قفص الحركي المعين. تغطية كل قفص مع معيار تصفية أعلى الغطاء.
- إعداد الحقن الفردية ثالمالحة إيث أو حل الكوكايين، كما هو موضح في الخطوة 2.1.7، على أساس وزن الجسم في اليوم الحالي. تبدأ مع جرعة من 15 أو 20 مغ / كغ، والنظر في التجربة الثانية باستخدام جرعة أعلى أو أدنى (انظر مناقشة للعوامل ذات الصلة).
- مرة واحدة قد انتهت المحاكمات التعود لجميع الأقفاص، تحميل برنامج الحقن.
- في وقت واحد، وإزالة الفئران من لهم اختبار القفص، القفا وإعطاء الحقن الخاصة (IP). قبل أن تعود الماوس لقفص تجربتها، بسرعة البدء في إشارة البدء لهذا القفص (الشكل 5C، أسفل).
- بعد كل التجارب الحقن قد انتهت، والعودة الفئران لأقفاص وطنهم وغرفة مساكنهم.
- إذا رغبت في ذلك، والسماح الفئران إلى الخضوع لسلسلة من فترات الانسحاب وتحديات المخدرات، مثل ما يلي: نفس الجرعة من الأصلي، نصف جرعة، جرعة مضاعفة، ثم المالحة، والسماح قبل سبعة أيام من التحدي جرعة واحدة و06:57 أيام قبل كل تحديا إضافيا. ومهما كان خيار التحديات، maintaiن فترات انسحاب مماثلة في أنحاء الأفواج داخل التجربة.
ملاحظة: إذا كانت الجرعة الأصلية عالية (على سبيل المثال، 30 ملغ / كغ أو أكثر)، يجب تخطي جرعة مزدوجة أو استبدالها مع جرعة أقل. التحدي المالحة يكشف أي تفعيل الحركي مشروطة بيئة يقترن الكوكايين وحده، وفي هذه العملية، وكمية الحركة توعيتهم التي هي تعتمد على الكوكايين (انظر مناقشة).
- التحليل الإحصائي
- اختيار جزء (ق) من كل محاكمة التي سيتم استخدامها لتحليلها. معظم الحركة التي يسببها الكوكايين في القوارض يحدث في أول ~ 15-30 دقيقة بعد حقن المخدرات. اعتمادا على متغيرات المعنية، والنظر في تحليل الحركة التراكمي للنوافذ زمنية متعددة (على سبيل المثال، فإن أول 15، 30، 60 و / أو 120 دقيقة) أو التركيز على قطاعات مستقلة للمحاكمة.
- باستخدام الإطار الزمني المختار، خلاصة القول فواصل الحزم لكل حيوان يوميا لمدة التعود وحقن التجارب على حدة وبعد ذلكverage المبالغ لكل مجموعة. مؤامرة والخطأ المعياري للمتوسط (SEM) في الرسم البياني الخط أكثر من كل الأيام. كما العلاجات قد يغير كيفية استجابة الفئران للدواء في وقت مبكر و / أو في وقت متأخر في كل محاكمة اليومية، كما رسم متوسط فواصل شعاع مجموعة من 5 دقائق بن على مدى كل محاكمة اليومية.
ملاحظة: التآمر المتوسطات النشاط اليومي للالتعود وحقن التجارب (على سبيل المثال، أول دقيقة 15) يجعل الأمر يبدو بشكل مصطنع وقلل التي تنقل عن طريق الحقن بالمحلول الملحي، ولكن تذكر أن النشاط له (على الأرجح) رفض هذا المستوى قبل نهاية التعود كل يوم . - تحليل المياه المالحة والعلاج من تعاطي المخدرات أيام متتالية بشكل منفصل باستخدام تدابير المتكرر (RM) ANOVAs وجود عامل داخل موضوعات اليوم / الساعة وبما في ذلك أي عوامل بين-المواضيع في التصميم، حسب الاقتضاء. استخدام اختبار (ت) أو في اتجاه واحد أنوفا للتحقيق في الخلافات جماعة في يوم 1 من الكوكايين (التعرض الحاد)، وأنوفا متعدد المتغيرات لمواجهة التحديات. عند الاقتضاء، اتبع significancه مع الاختبارات بعد خاصة أو أحادي المتغير ANOVAs.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Representative Results
وتظهر نتائج ممثلة من الفحص حزب الشعب الكمبودي في الشكل (6) باستخدام البرية من نوع الفئران C57BL / 6N في حوالي تسعة أسابيع من العمر. كان تصميم الدراسة مضروب 2 × 3 مختلطة، مع متغير داخل تخضع للاختبار (قبل وبعد) وتخضع بين-المتغير في المعاملة (المالحة والكوكايين 5 و 10 ملغ / كلغ). أظهر RM أنوفا تفاعل كبير بين الاختبار والعلاج (F 2،20 = 3،68، ف <0.05)، وفسر بدلا من الآثار الرئيسية الهامة لوحظ لكل اختبار (F 1،20 = 9،86، ف <0.01) و العلاج (F 1،20 = 4،37، ف <0.05). وأظهرت المقارنات خاصة بعد أن أيا من المجموعات تختلف عن بعضها البعض خلال مرحلة ما قبل الاختبار. في مرحلة ما بعد الاختبار، و5 ملغ / كغ و 10 ملغم / كغم لم تختلف كثيرا عن بعضها البعض. ومع ذلك، أظهرت كلا المجموعتين أكبر بكثير تفضيل للغرفة-يقترن الكوكايين من السيطرة على المجموعة المالحة فقط (توكي في: 5 ملغ / كغ، ص <0.5 و 10 مغ / كغ، ص &# 60؛ 0.01). وبالإضافة إلى ذلك، أظهرت بونفيروني اللاحق الاختبارات أن كلا من 5 (ف <0.05)، وأظهرت 10 (ف <0.05) ملغم / مجموعة كغ أكبر تفضيل الجانب يقترن الكوكايين في الاختبار البعدي مقارنة مع ما قبل الاختبار، في حين أن المياه المالحة أظهرت مجموعة -saline أي تغيير من بعدها إلى ما بعد الاختبار.
وتظهر نتائج ممثلة من الفحص الحركي في الشكل 7A & B باستخدام البرية من نوع الفئران C57BL / 6N السيطرة littermate من سلسلة من التجارب المنفصلة التي تم نشرها سابقا 18. بعد تأقلم لحقن محلول ملحي لمدة 3-4 أيام، تلقت الفئران واحدة حقن الكوكايين (الملكية الفكرية) في 5، 10، 15 أو 30 مغ / كغ يوميا لمدة سبعة أيام. بعد فترة انسحاب سبعة ايام او 14 يوما، تلقت كل مجموعة تحديا الكوكايين في الجرعة الأصلية، ثم بعد مزيد من (متغير) فترات الانسحاب، تلقى بعض التحديات الكوكايين إضافية في جرعات أخرى، كما هو مبين. لغرض إثبات تأثير جرعة كوكايين في locomأذني التوعية في نشر الحالي، تم الجمع بين أربع مجموعات جرعة مختلفة إلى 4 × 7 تصميم مختلط مضروب، مع داخل تخضع متغير من يوم (أول 7 حقن الكوكايين) وعامل بين-موضوعات الجرعة. أظهر RM أنوفا تفاعل كبير بين الجرعة ويوم (F 18276 = 12.53، ف <0.0001)، وفسر بدلا من الآثار الرئيسية الهامة التي لوحظت أيضا لكل يوم (F 6276 = 18.25، ف <0.0001) والجرعة ( F 3،46 = 22،63، ف <0.0001). وتوكي اللاحق التحليلات أظهرت اختلافات كبيرة الشاملة بين 5 و 15 مغ / كغ (ع <0.0001) و 5 و 30 مغ / كغ (ع <0.0001)، و 10 و 15 مغ / كغ (ف <0.01). وقد لوحظ عدد من فروق ذات دلالة إحصائية عند قورنت المجموعات كل يوم. الإشارة هنا إلى اختلافات ليوم 1 الكوكايين (5 مقابل 30 مغ / كغ، ف <0.01، 10 مقابل 30 مغ / كغ، ف <0.05، 15 مقابل 30 مغ / كغ، ف <0.01) ويوم 7 الكوكايين ( 5 مقابل 10 مغ / كغ، ف <0.05، 5 مقابل 15 مغ / كغ، ف <0.0001 و 10 مباراة. 15 مغ / كغ، ف <0.01. 15 مقابل 30 مغ / كغ، ف <0.0001). ويبين الشكل 7C شخصيات وهمية توضح الجوانب الرئيسية للتوعية الحركي التي قد تختلف مجموعات العلاج المبلغ. في حين يتم توضيح هذه الميزات بشكل مستقل هنا، فمن الممكن أيضا أن نلاحظ الاختلافات في خليط منها.
الشكل 1. ميد PC CPP السيطرة جلسة الأساسية. (A) عرض افتراضي، رمز جلسة مفتوحة (المربع الأحمر)، ومربع الحوار جلسة علنية (الشكل). حدد "اسم العرف" واستخدام إطار المجلد للانتقال إلى مجلد البيانات واسم الدورة. اختيار البرنامج المناسب من القائمة المنسدلة "إجراءات". لكل مربع في الاستخدام، والتحقق من عدد مربع وإدخال المعلومات ذات الصلة إلى صناديق الموضوع، التجربة، والمجموعة. (ب) تحميل عرض غرفة، تبدأ رمز إشارة (المربع الأزرق)، وإرسال إشارةمربع الحوار آخرون (الشكل). مرة واحدة وقد تم إدخال جميع البيانات غرفة مختارة الدوائر، بحيث يمكن تحميلها ومسألة بدء إشارة. والآن يمكن تشغيلها الدوائر التي كتبها شعاع كسر لبدء توقيت الدورة وجمع البيانات. (C) انتهى عرض الدورة. كما يكمل كل غرفة على برنامج معين، فإن منطقة جمع البيانات (المربع الأخضر) تصبح ثابتة وسوف منطقة المعلومات غرفة (مربع برتقالي) تظهر غرف بأنها "مغلقة". يرجى النقر هنا لمشاهدة نسخة أكبر من هذا الرقم.
الشكل 2. CPP التكوين غرفة. (A) عينة خط الزمن التجريبية. ويتبع ما قبل الاختبار الكوكايين يوميا بالتناوب (الرمادي) والمالحة (أبيض) جلسات تكييف. يتم إجراء الاختبار البعدي 24hrs بعد آخر جلسة تكييف. ( ب) تكوين غرفة المفتوح للاستخدام في جلسات ما قبل وما بعد الاختبار. لاحظ أن الأبواب بين غرفة هي في موقف أثار / فتح. (ج) تكوين غرفة مغلق للاستخدام في جلسات تكييف. لاحظ أن أبواب اليدوية وخفضت، مع عدم الوصول بين الدوائر. الرجاء انقر هنا لعرض نسخة أكبر من هذا الرقم.
الشكل 3. حسابات التصميم المتوازن لحزب الشعب الكمبودي. مثال يوضح الحسابات والأهداف عند موازنة عشرات قبل الاختبار في حزب الشعب الكمبودي. الرجاء انقر هنا لعرض نسخة أكبر من هذا الرقم.
ig4.jpg "/>
الشكل 4. الحركي غرفة التكوين. (A) تتكون الدائرة الخارجية للمربع مبهمة الأسود داخلها مجموعة شعاع يلائم بشكل مريح (B). ينبغي أن تملأ الإسكان مربع / حذاء غرف الحجم مع طبقة رقيقة من الفراش (C) والانحياز بحيث يتم توزيع الحزم بالتساوي على طول المحور الطويل (D). الرجاء انقر هنا لعرض نسخة أكبر من هذا الرقم.
الرقم 5. الحركي عملية. برنامج الحاسوب (A) افتراضي غرفة الحاسوب. بدء قاعدة بيانات الدورة الجديدة (المربع الأزرق وأقحم). إعادة تسمية ملف ودليل لكل تجربة (الأزرق دون أقحم). إنشاء الدورة الجديدة (مربع أحمر وأقحم) مع معرف فريد. تحرير الدورة (أقحم الأحمر) و ENثالثا معلومات معرف الحيوان في علامة التبويب غرفة (المربع الأخضر وأقحم) وأقامت بدء / إيقاف التحكم لكل نوع الدورة (مربع برتقالي). (ب) حدد المناسبة تحكم بداية وقف لكل نوع الدورة. تعيين طول الفاصل إلى 300 ثانية (لمدة 5 دقائق بن) و 12 فترات في مرحلة (لمدة 1 ساعة جلسة). لجلسات التعود (يسار)، وسيتم تشغيل غرف للبدء في انسجام تام (تمكين المرحلة ... الكل في انسجام يدويا) وسوف تبدأ لرصد النشاط مباشرة بعد نهاية الشوط الاول شعاع الأول. لجلسات حقن (يمين)، وسيتم تشغيل غرف فردية (يدويا تمكين المرحلة ... فردي أزرار الشاشة)، وسوف تبدأ لرصد النشاط مباشرة بعد نهاية الشوط الاول شعاع الأول. ستنتهي كلا النوعين الجلسة عندما يحين الوقت مرحلة الكلي قد انتهت صلاحيتها لكل غرفة على حدة. (ج) إذا ما بدأت الدورة، ويمكن أن تبدأ جلسات التعود عن طريق اختيار زر "ابدأ كل شيء" (أعلى). لاحظ أنه بعد تريغ]تعافي فإن جميع أقسام وسيتم الانتظار لكسر شعاع الأول لبدء الدورة. لجلسات حقن، كل غرفة يمكن أن تبدأ بشكل مستقل (القاع). لاحظ أنه بعد اثار غرف فردية (بينما الحيوان هو من غرفة للحقن)، وغرف في انتظار لكسر شعاع الأول لبدء الدورة. الرجاء انقر هنا لعرض نسخة أكبر من هذا الرقم.
الشكل 6. النتائج الممثل حزب الشعب الكمبودي. (الأعلى) في حزب الشعب الكمبودي، أظهرت الفئران تفضيل كبير لغرفة إرفاقها سابقا مع الكوكايين (5 أو 10 ملغ / كلغ)، في حين أن الفئران التي تلقت حدودا المالحة في مجلسي لم تتطور أي تفضيل. الاختصارات عمود دلالة كبيرة الاختلافات بين مجموعة من شريط المسمى مقارنة مع مجموعة لوحظ في نفس الاختبار منظمة الشفافية الدوليةلي أن أشير. (القاع) حسب بالتآمر الوقت الذي يقضيه في الكوكايين مقابل غرف-يقترن المالحة خلال مرحلة ما قبل وما بعد الاختبارات، ويزيد في الجانب يقترن الكوكايين يمكن أن ينظر إليه في 5 و 10 ملغ مجموعة / كغ التي هي على حساب الوقت قضى في كلا المجلسين، مقترنة المالحة والمتوسطة. في المقابل، لم تكن هناك فروق مذهلة في الوقت الذي يقضيه في أي غرفة بين اختبارات آخر قبل وفي المجموعة الضابطة المالحة. البيانات المقدمة كما يعني ± SEM. الرجاء انقر هنا لعرض نسخة أكبر من هذا الرقم.
الرقم 7. ممثل النتائج الحركي التوعية (A) فواصل شعاع التراكمي للدقيقة 20 الأول من كل محاكمة اليومية لأربع جرعات منفصلة: 5، 10، 15 و 30 ملغ / كغ في البرية من نوع الفئران تليها same-، النصفي ، انقر نقرا مزدوجا جرعة لالتحديات المالحة د، من تعديل (18). تلقت جميع الفئات تحديات الجرعة نفسها إما واحد (10، 15، 30 ملغ / كلغ) أو أسبوعين (5 ملغ / كلغ) بعد التعرض الكوكايين الماضي. بعض المجموعات تلقت مزيدا من التحديات، التي أجريت في فترات انسحاب متغير. (ب) قطعة البيانات الحركي (فواصل شعاع) لخص بنسبة 5 دقائق بن لمحاكمات اليومية خلال 15 ملغم / كغم من الكوكايين تجربة التوعية. (ج) الرسوم التوضيحية التي تبين الفروق في توعية الحركي لمجموعتين العلاج التي يقودها في المقام الأول من قبل (يسار) فروق استجابة الكوكايين الحادة، (وسط) فرق سعر التوعية أو (يمين) فروق في توعية القصوى. البيانات المقدمة كما يعني ± SEM. الرجاء انقر هنا لعرض نسخة أكبر من هذا الرقم.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Discussion
يوضح هذا البروتوكول طرق مشروط مكان تفضيل والتوعية الحركي، كل منها يمكن أن يتم استخدامها من قبل مختبر متوسط لتقييم جوانب المرونة السلوكية الناجمة عن المخدرات. كما هو الحال مع معظم التجارب السلوكية، هناك اعتبارات جديرة إضافية تتجاوز البروتوكول الأساسي. أولا، يمكن تصور كل من هذه التقنيات وجود مرحلتين، تحريض والتعبير. "الحث" يشمل تطوير السلوك لحزب الشعب الكمبودي حدث ذلك خلال تكييف، وتوعية أنها فترة أولية مدتها (عادة على التوالي) التعرض المخدرات. "التعبير" عن حزب الشعب الكمبودي هو الاختبار البعدي، بينما لتوعية أنه يمكن تعريفها بأنها تحد دواء معين إما بعد انسحاب أو ببساطة عن التعرض الماضي على التوالي.
ومن الجدير بالذكر أن تنظر التلاعب الحد إلى واحدة من هذه المراحل مقابل الآخر إلى تحليل أفضل آثارها المحتملة. الفيروسات مع فعالية محدودة زمنيا (على سبيل المثال، HSV) أو المخدرات شارك في الإدارات / المعالجة المسبقة (على سبيل المثال، منبهات / الخصوم) مفيدة في مثل هذه الجهود. عند اتخاذ هذا النهج، قد يكون من الضروري كذلك استخدام بروتوكولات مضغوط بحيث مرحلة معينة سوف يتزامن بشكل أفضل مع التعبير الفيروسي. لحزب الشعب الكمبودي، فمن الممكن لإجراء طريقة تكييف لمدة يومين، كما وصفناها سابقا 37. خاصة لتوعية الحركي، والتغيرات في فترة الانسحاب بين الحث والتعبير جنبا إلى جنب مع هذه الأساليب، قد كشف العمليات التي تدخل في صيانة واستقرار السلوك. وبالإضافة إلى ذلك، فإن هذه المقاربات يمكن استخدامها لدراسة ظاهرة عبر التوعية، حيث هو فعل سلوك توعية باستخدام دواء واحد ولكن يمكن التعبير عن التعرض للدواء مختلف. منذ لا تحدث عبر التوعية بين جميع الأدوية توعية من سوء المعاملة، قد يثير سلوك توعية يختلف إلى حد ما عن الأصل، وليس بالضرورة ثنائي الاتجاه لأي مجموعة معينة من المخدرات، ودراستها قد تقدم فرصا فريدة لفهم أين وكيف عقاقير مختلفة تؤثر اللدونة الدماغ ووظيفته.
التفسير الصحيح لحزب الشعب الكمبودي، على وجه الخصوص، يعتمد على استبعاد تفسيرات بديلة للنتائج. البيانات التي تم إنشاؤها في جهاز ثلاث حجرات ينبغي مواصلة التدقيق قبل تحديد الطرح من الوقت الذي يقضيه في الجانب يقترن المالحة من الجانب يقترن الكوكايين في مرحلة ما بعد اختبار تفضيلات، وذلك لأن الزيادة في تفضيل الجانب-يقترن المخدرات التي ينتج فقط من انخفاض في الوقت الذي يقضيه في غرفة-يقترن المالحة من المرجح غير صالحة لمثل هذا التفسير. الغرفة الوسطى تسمح لهذه النتيجة منذ الماوس قد تغير الوقت الذي يقضيه هناك بدلا من الغرفة-يقترن المخدرات. ومن الممكن أيضا أن نلاحظ زيادة الوقت الذي يقضيه في الجانب يقترن المخدرات على حساب الغرفة الوسطى بدلا من الجانب يقترن المالحة. يمكن القول، قد تكون هذه النتيجة لا تزال interpre مقبولتيد كزيادة في تفضيل المخدرات. إدراج المقصورة الثالثة يوفر غرفة محايدة أن يسمح وضع غير متحيز للحيوان خلال جلسات ما قبل وما بعد الاختبار 41. على الرغم من فائدتها فى معالجة التحيز وضع الأولية المساهمة في درجات الاختبار لمدة يوم، ليس مطلوبا الغرفة الثالثة للتكييف. وتناقش تصاميم CPP البديلة التي تتميز قسمين متميزين أو حجرة واحدة مع تكوينات التحفيز المتنوعة في أماكن أخرى 41-42.
وينبغي أيضا أن يرافق أي عجز في مكان تفضيل المخدرات عن طريق تقييم كل من القدرة على التعلم الجمعيات السياقية وظيفة مكافأة العامة. وهناك عدد من التعديلات التي يمكن إدخالها على النموذج CPP التي يمكن أن مساعد في تفسير تفضيل تغير، بما في ذلك تعديل بروز من UCS (المخدرات) عن طريق زيادة (أو النقصان) عدد حدودا أو باستخدام أعلى أو أدنى المخدرات جرعة. حزب الشعب الكمبودي يمكن تنفيذها باستخدام FO مستساغاالتطوير التنظيمي (على سبيل المثال، نسبة عالية من الدهون، والسكروز) أو التفاعلات الاجتماعية لتقييم ما إذا كان التغيير لوحظ تقتصر على المخدرات أو غير ذات صلة المكافآت الطبيعية؛ النهج غير CPP-مفيدة لهذا الغرض تشمل داخل الجمجمة التحفيز الذاتي، وتفضيل السكروز، و / أو المهام نهج مشهي. ومع ذلك، كل من هذه الخيارات تختلف في قدرتها على معالجة كافية مسألة المطلوب. حزب الشعب الكمبودي القائمة على الغذاء قد يكون مفيدا بشكل خاص نظرا لأن الاستجابات العادية تظهر القدرة على التعلم وتكوين الجمعيات السياقية المناسبة مع مكافأة الطبيعية. وتشمل ضوابط إضافية لتقييم القدرة على التعلم المهام التي تعتمد على التعلم السياقية / الذاكرة (تكييف الخوف السياقية وCPA). اتفاق السلام الشامل لديه ميزة تدار على نحو مماثل لحزب الشعب الكمبودي، وغالبا في نفس الدوائر، لتحل محل الدواء مشهي مع تجربة مكره (على سبيل المثال، والليثيوم حقن كلوريد). الحيوانات التي تظهر العجز في حزب الشعب الكمبودي، ولكن اتفاق السلام الشامل العادي، تثبت قدرة على تشكيل جمعية السياقية المناسبةالصورة، مما يدل على أن الضعف في حزب الشعب الكمبودي المخدرات على الأرجح تتصل مكافأة (المخدرات محددة أو غير ذلك). واحد الحذر لاتفاق السلام الشامل باستخدام كلوريد الليثيوم للنظر هو ما إذا كان هذا الدواء هو علاج معروف لأي حالة قد تكون على غرار من قبل حيوانات التجارب. على سبيل المثال، فقد تبين علاج الليثيوم لمواجهة العجز في التعلم في نموذج الفأر من X الهشة 43، التي من شأنها أن نخلط هذا أسلوب التحكم.
بالإضافة إلى نموذج حزب الشعب الكمبودي الكلاسيكية، وهناك ملحقات المحتملة المستخدمين قد تجد من المفيد، مثل اختبار انقراض جمعية السياق المخدرات المستفادة وإعادة العمل بها بعد حزب الشعب الكمبودي. ردود مكيفة (CRS)، عند إنشائه، لا يمكن الحفاظ عليه لفترات طويلة 19،20 عندما يتم ترك الحيوانات دون عائق. على الرغم من استمرار النسبي للCR، فإنه يمكن أن تسقط على نحو فعال من خلال العروض المتكررة من CS (السياق) في غياب UCS (المخدرات). تظهر طريقتين الانقراض حزب الشعب الكمبودي في مضاءة erature: التعرض المتكرر الاختبار دون حقن 21 أو إعادة حدودا للجانب سابقا يقترن المخدرات مع سيارة 22. وتعكس عمليات الانقراض التعلم الجديد، في مقابل "عدم تعلمها" من تكييف الأصلي، وهي فكرة أثبتت بشكل فعال من خلال "إعادة". يتم تشغيل إعادة كلاسيكي من خلال إعادة التعرض إلى UCS، التي تنتج انتعاش CR. في سياق حزب الشعب الكمبودي، وحقنة واحدة من الدواء التدريب يسبب الحيوانات لإظهار مكان تفضيل. يمكن للعديد من المثير للاهتمام غير التدريب العظة المخدرات تنتج أيضا إعادة حزب الشعب الكمبودي، بما في ذلك فتيلة مع الأدوية البديلة 22 ومجموعة متنوعة من الضغوطات 23-26. الانقراض وإعادة التجارب ذات أهمية خاصة لمجال إدمان المخدرات كنماذج من العلاج من تعاطي المخدرات والانتكاس. التدخلات التي من شأنها تحسين معدل الانقراض و / أو تقليل حجم إعادة يمكن أن تكون أهدافا ثمينة للالدوائية الإنسان.
الصورة = "jove_content"> وبالمقارنة مع حزب الشعب الكمبودي، وتعتبر التوعية الحركي لتكون أقل بكثير تعتمد على التعلم، وبالتالي، قد يكون الأسلوب المفضل لتقييم اللدونة المخدرات التي يسببها في نماذج القوارض مع الصعوبات المعرفية المعروفة. وقال ان هناك بالتأكيد أدلة على أن على الأقل في بعض النماذج للتوعية، وعلمت جمعية السياق المخدرات تتطور وتسهم في استجابة محسسة. الأدلة المؤيدة يتضمن قدرا أعظم من التوعية لوحظ عند إعطاء الدواء في بيئة اختبار خارج المنزل قفص، وأحيانا، وعدم وجود توعية تماما عندما الجرعات يحدث في المنزل قفص (على سبيل المثال، 27-29). والجدير بالذكر ومع ذلك، فقد ثبت بوضوح مستقل للسياق التوعية في دراسات أخرى (على سبيل المثال، 30-32). تفاصيل التجريبية التي يمكن أن تسهم في ما إذا كانت الزيادة التي تعتمد على السياق في التوعية هي ملاحظتها تشمل جرعة المخدرات، مدة التعرض، ما إذا كان يجب أن تنقل أي مجموعة لاختبار سو التوعية وجوانب معينة من قبل التعرض إلى غرفة الاختبار؛ ولكن هذه التفاصيل لا تزال غير واضحة إلى حد ما. طريقة واحدة لتحديد مساهمة توعية السياقية هو إعطاء التحدي المالحة التالية توعية المخدرات 33. استخدام نموذج وصف يقلل من مساهمة التوعية التي تعتمد على السياق كما يتضح من تفعيل الحركي القليل جدا في الدراسات السابقة على التحدي المالحة. تم استعراض مساهمة السياقية للتوعية في عدد من الصحف، في كثير من الأحيان بما في ذلك المناقشات من السلوكيات الأخرى من النشاط الحركي 34.
للحد من تلوث تفعيل الناجم عن المخدرات والتوعية مع الحركي تحفيز الآثار الناجمة عن بيئة جديدة، وتأقلم الفئران لحقن المالحة لمدة ثلاثة إلى أربعة أيام في بداية كل تجربة. كما يمكن أن يرى في الشكل 7، الفئران عادة ما تظهر انخفاض تنقل بين الأول وآخر يوم التأقلم المالحة. وبالإضافة إلى ذلك، فإن الفئران بشكل ملحوظ أكثر هدوءا وأسهل في التعامل معها وحقن عن طريق التعرض المالحة الماضي. لقد اختبرت الأعمال السابقة سلالات متعددة والأنماط الوراثية للفئران باستخدام هذا النموذج ولا نرى الكثير من التباين في النشاط التأقلم المالحة عبر لهم. ومع ذلك، فمن الممكن أن نلاحظ في بعض الأحيان الظواهر فرط النشاط قوية جدا المرتبطة معينة المورثات التي لم يتم التغلب عليها باستخدام هذا الأسلوب. في هذه الحالات، قد يكون مطلوبا لأداء عدة أيام التأقلم المالحة (حتى الهضاب الحركة في مجموعة مفرط)، ومن ثم تطبيع مجموعة مفرط مع مجموعة التحكم باستخدام بيانات المالحة مشاركة اليوم الحقن. في حين ليست مثالية، لأنها تتيح مقارنة أكثر معقولية من آثار المخدرات على الحركة بين هذه الجماعات. الخيارات الأخرى التي قد تهدئة فرط النشاط المتطرف هي تمديد التعود طول المحاكمة قبل حقن كل يوم واحد إلى 5 ساعة، و / أو استخدام المحاكمات حقن أطول (2-4 ساعة) هاليوم منظمة العمل ضد الجوع.
هناك اعتبارات إضافية التي تعتبر مهمة لتفسير السلوك الحركي. كما هو موضح في الشكل 7C، وقد يكون سبب الاختلافات مجموعة وحظ في المقام الأول عن طريق التفاوت في الاستجابة الحركي الحاد، فإن معدل التوعية خلال أيام، والحد الأقصى من التوعية، أو مزيج من هذه العوامل. تحليل مساهمات هذه العوامل بشكل فردي يمكن أن تكون مفيدة. لهذا الغرض، واستجابة الحركي الحاد يمكن تحليلها إحصائيا وحدها. ثم معدل التوعية يمكن تقييم باستخدام برنامج قادر على منحنى المناسب وعملية التطبيع معدل لخصم أي خلافات حادة الحركي. وعادة ما يتم كشف غيرت توعية القصوى في RM أنوفا خلال الأيام التعرض للمخدرات على التوالي، حيث المتابعة المقارنات بعد يوم خاصة بعد يوم هامة في أيام بعد أن استقر الردود المجموعة. ينبغي للمرء أن يكون على علم بأن التوعية القصوى لا يمكن تحديدهلأي مجموعة أن يحافظ على استجابة الحركي الخطية خلال الأيام التعرض للمخدرات، مثل صورت في الشكل 7C (وسط، الخط الأزرق). في مثل هذه الحالة، يجوز تمديد التعرض للمخدرات في محاولة لتحديد توعية القصوى.
وأخيرا، فإنه عادة ما يكون أفضل لمقارنة التوعية بين المجموعات باستخدام اثنين على الأقل جرعات المخدرات الأولية التي أجريت في الأفواج منفصلة من الحيوانات. فروق في أي من الجوانب المذكورة أعلاه من تفعيل الحركي، في جرعة واحدة أو على حد سواء، وينبغي أن تستخدم لتوجيه مزيد من الاختبارات لاستبعاد تفسيرات أخرى، بما في ذلك التعديلات في تطوير الرتابة. التعرض المتكرر لبعض الأدوية، مثل الكوكايين والأمفيتامين، لا ينتج سوى تحرك توعيتهم بطريقة تعتمد على الجرعة، ولكن محسس أيضا السلوكيات النمطية المتنافسة. تصبح هذه stereotypies العلنية خاصة في الجرعات العالية، بحيث الحركي للتوعية وغالبا ما تحجب جزئيا أو كليا، ولكن كشفت مرة أخرى على إدارةعلى أقل جرعة. لهذا السبب، فإن "العجز" في توعية الحركي في المجموعة التجريبية واحد قد تعكس الواقع الحساسية المفرطة للتنمية المخدرات التي يسببها من stereotypies. تقييم الرتابة يمكن أن يكون تحديا، ولكن هناك عدد من المقاييس التي نشرت 35 والمناهج الأخرى (36). باستخدام كل نطاق نمطية العام وتقييم سلوكيات معينة ينصح، كما نشرت سابقا (18).
وفي الختام، تم وضع عدد من الاختبارات السلوكية في نماذج حيوانية في محاولة لتحليل التعقيد من إدمان البشري. مشروط مكان تفضيل والتوعية الحركي نوعان من الاختبارات الأساسية المستخدمة على نطاق واسع في القوارض و، على التوالي، أنها قد تكون مفيدة بشكل خاص في التقييم في وقت مبكر من مكافأة المرتبطة بالمخدرات واللدونة المستمرة الناجمة عن الاستخدام المتكرر. وهناك عدد من الاعتبارات لتصميم وتفسير كل نوع من الدراسة، مما يجعل من العthwhile إلى النظر بعناية في أهداف التجريبية والدراسات السابقة عند التخطيط لهذه التقييمات.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Disclosures
الكتاب تعلن أنه ليس لديهم مصالح مالية المتنافسة.
Acknowledgments
الكتاب أشكر كارين ديتز وشاري بيرنبوم لإدخال السابق على اعتبارات التصميم السلوكية ولورين PECA للمساعدة في اختبار السلوكي. الكتاب أيضا يعترف بدعم سخي من مؤسسة سيمونز (مبادرة أبحاث التوحد مؤسسة سيمونز منحة لاتفاقية حظر الأسلحة الكيميائية)، نيدا (DA008277، DA027664، وDA030590 لاتفاقية حظر الأسلحة الكيميائية، F32DA027265 إلى LNS وF32DA036319 إلى RDP)، ومؤسسة البحوث FRAXA واليانور ومايلز برنامج زمالة الشاطئ (دعم الزمالة إلى LNS)، وبرنامج زمالة Kaneb جون (دعم الزمالة لMT).
Materials
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| Cocaine Hydrochloride USP | Mallinckrodt Pharmaceuticals | 0406-1520 | Purchase and use (Schedule II controlled substance) for research purposes requires compliance and licensure according to state and federal law. |
| Conditioned Place Preference, Three Compartment Apparatus with Manual Doors and Lights for Mouse | Med-Associates Inc. | MED-CPP-MS & MED-CPP-3013 | Our laboratory has used these boxes; however, many alternative boxes are available & acceptable. |
| PAS-Home Cage Activity Monitoring Photobeam Arrays | San Diego Instruments | 2325-0223 & 7500-0221 | Our lab houses these arrays inside of custom built chambers, as described in the text. There are alternatives available. |
| Disposable Sani-Cloth disenfecting wipes | PDI | 13872 |
References
- National Institute on Drug Abuse. Drug Facts: Understanding Drug Abuse and Addiction. www.drugabuse.gov. , Available from: http://www.drugabuse.gov/publications/drugfacts/understanding-drug-abuse-addiction (2012).
- Kasanetz, F., et al. Transition to addiction is associated with a persistent impairment in synaptic plasticity. Science. 328 (5986), 1709-1712 (2010).
- Beach, H. D. Morphine addiction in rats. Can J Psychol. 11 (2), 104-112 (1957).
- van der Kooy, D. Chapter 13, Place Conditioning: A simple and effective method for assessing the motivational properties of drugs. Methods of Assessing the Reinforcing Properties of Abused Drugs. Bozarth, M. A. , 229-240 (2012).
- Carlezon, W. A. Place conditioning to study drug reward and aversion. Methods Mol Med. 84, 243-249 (2003).
- Prus, A. J., James, J. R., Rosecrans, J. A. Chapter 4, Conditioned Place Preference. Methods of Behavior Analysis in Neuroscience. Buccafusco, J. J. , (2009).
- Tzschentke, T. M. Measuring reward with the conditioned place preference (CPP) paradigm: update of the last decade. Addict Biol. 12 (3-4), 227-462 (2007).
- Aguilar, M. A., Rodrìguez-Arias, M., Miñarro, J. Neurobiological mechanisms of the reinstatement of drug-conditioned place preference. Brain Res Rev. 59 (2), 253-277 (2009).
- Feduccia, A. A., Duvauchelle, C. L. Novel apparatus and method for drug reinforcement. JoVE. (42), (2010).
- Brabant, C., Quertemont, E., Tirelli, E. Influence of the dose and the number of drug-context pairings on the magnitude and the long-lasting retention of cocaine-induced conditioned place preference in C57BL/6J mice. Psychopharmacology. 180 (1), 33-40 (2005).
- Pliakas, A. M., Carlson, R. R., Neve, R. L., Konradi, C., Nestler, E. J., Carlezon, W. A. Altered responsiveness to cocaine and increased immobility in the forced swim test associated with elevated cAMP response element-binding protein expression in nucleus accumbens. J Neurosci. 21 (18), 7397-7403 (2001).
- Knackstedt, L. A., Samimi, M. M., Ettenberg, A. Evidence for opponent-process actions of intravenous cocaine and cocaethylene. Pharmacol Biochem Behav. 72 (4), 931-936 (2002).
- Post, R. M., Rose, H. Increasing effects of repetitive cocaine administration in the rat. Nature. 260 (5553), 731-732 (1976).
- Marin, M. T., Cruz, F. C., Planeta, C. S. Cocaine-induced behavioral sensitization in adolescent rats endures until adulthood: lack of association with GluR1 and NR1 glutamate receptor subunits and tyrosine hydroxylase. Pharmacol Biochem Behav. 91 (1), 109-114 (2008).
- Henry, D. J., White, F. J. The persistence of behavioral sensitization to cocaine parallels enhanced inhibition of nucleus accumbens neurons. J Neurosci. 15 (9), 6287-6299 (1995).
- Hope, B. T., Simmons, D. E., Mitchell, T. B., Kreuter, J. D., Mattson, B. J. Cocaine-induced locomotor activity and Fos expression in nucleus accumbens are sensitized for 6 after repeated cocaine administration outside the home cage. Eur J Neurosci. 24 (3), 867-875 (2006).
- Shuster, L., Yu, G., Bates, A. Sensitization to cocaine stimulation in mice. Psychopharmacology. 52 (2), 185-190 (1977).
- Smith, L. N., Jedynak, J. P., Fontenot, M. R., Hale, C. R., Dietz, K. C., Taniguchi, M., Thomas, F. S., Zirlin, B. C., Birnbaum, S. G., Huber, K. M., Thomas, M. J., Cowan, C. W. Fragile X mental retardation protein regulates synaptic and behavioral plasticity to repeated cocaine administration. Neuron. 82 (3), 645-658 (2014).
- Mueller, D., Stewart, J. Cocaine-induced conditioned place preference: reinstatement by priming injections of cocaine after extinction. Behav Brain Res. 115 (1), 39-47 (2000).
- Sakoori, K., Murphy, N. P. Maintenance of conditioned place preferences and aversion in C57BL6 mice: effects of repeated and drug state testing. Behav Brain Res. 160 (1), 34-43 (2005).
- Bardo, M. T., Neisewander, J. L., Miller, J. S. Repeated testing attenuates conditioned place preference with cocaine. Psychopharmacologia. 89 (2), 239-243 (1986).
- Itzhak, Y., Martin, J. L. Cocaine-induced conditioned place preference in mice: induction, extinction and reinstatement by related psychostimulants. Neuropsychopharmacology. 26 (1), 130-134 (2002).
- Kreibich, A. S., Blendy, J. A. cAMP response element-binding protein is required for stress but not cocaine-induced reinstatement. J Neurosci. 24 (30), 6686-6692 (2004).
- Briand, L. A., Blendy, J. A. Not all stress is equal: CREB is not necessary for restraint stress reinstatement of cocaine-conditioned reward. Behav Brain Res. 246, 63-68 (2013).
- Redila, V. A., Chavkin, C. Stress-induced reinstatement of cocaine seeking is mediated by the kappa opioid system. Psychopharmacology. 200 (1), 59-70 (2008).
- Do Couto, R. ibeiro, Aguilar, B., A, M., Manzanedo, C., Rodriguez-Arias, M., Armario, A., Minarro, J. Social stress is as effective as physical stress in reinstating morphine-induced place preference in mice. Psychopharmacology. 185 (4), 459-470 (2006).
- Post, R. M., Lockfeld, A., Squillace, K. M., Contel, N. R. Drug-environment interaction: context dependency of cocaine-induced behavioral sensitization. Life sciences. 28 (7), 755-760 (1981).
- Badiani, A., Browman, K. E., Robinson, T. E. Influence of novel versus home environments on sensitization to the psychomotor stimulant effects of cocaine and amphetamine. Brain Res. 674 (2), 291-298 (1995).
- Li, Y., Acerbo, M. J., Robinson, T. E. The induction of behavioural sensitization is associated with cocaine-induced structural plasticity in the core (but not shell) of the nucleus accumbens. Eur J Neurosci. 20 (6), 1647-1654 (2004).
- Partridge, B., Schenk, S. Context-independent sensitization to the locomotor-activating effects of cocaine. Pharmacol Biochem Behav. 63 (4), 543-548 (1999).
- Le Foll, B., Diaz, J., Sokoloff, P. Increased dopamine D3 receptor expression accompanying behavioral sensitization to nicotine in rats. Synapse. 47 (3), 176-183 (2003).
- Heidbreder, C. A., Babovic-Vuksanovic, D., Shoaib, M., Shippenberg, T. S. Development of behavioral sensitization to cocaine: influence of kappa opioid receptor agonists. J Pharmacol Exp Ther. 275 (1), 150-163 (1995).
- Tirelli, E., Michel, A., Brabant, C. Cocaine-conditioned activity persists for a longer time than cocaine-sensitized activity in mice: implications for the theories using Pavlovian excitatory conditioning to explain the context-specificity of sensitization. Behav Brain Res. 165 (1), 18-25 (2005).
- Anagnostaras, S. G., Schallert, T., Robinson, T. E. Memory processes governing amphetamine-induced psychomotor sensitization. Neuropsychopharmacology. 26 (6), 703-715 (2002).
- Spangler, R., Zhou, Y., Schlussman, S. D., Ho, A., Kreek, M. J. Behavioral stereotypies induced by 'binge' cocaine administration are independent of drug-induced increases in corticosterone levels. Behav Brain Res. 86 (2), 201-204 (1997).
- Kelley, A. E. Measurement of rodent stereotyped behavior. Curr Protoc Neurosci. Chapter 8, Unit 8.8 (2001).
- Taniguchi, M., Carreira, M. B., Smith, L. N., Zirlin, B. C., Neve, R. L., Cowan, C. W. Histone deacetylase 5 limits cocaine reward through cAMP-induced nuclear import. Neuron. 73 (1), 108-120 (2012).
- Zangen, A., Solinas, M., Ikemoto, S., Goldberg, S. R., Wise, R. A. Two brain sites for cannabinoid reward. J Neurosci. 26 (18), 4901-4907 (2006).
- Huston, J. P., de Souza Silva, M. A., Topic, B., Müller, C. P. What's conditioned in conditioned place preference. Trends Pharmacol Sci. 34 (3), 162-166 (2013).
- Schechter, M. D., Calcagnetti, D. J. Trends in place preference conditioning with a cross-indexed bibliography; 1957-1991. Neurosci Biobehav Rev. 17, 21-41 (1993).
- Bevins, R. A., Cunningham, C. L. Chapter 9, Place Conditioning: A Methodological Analysis. Tasks and Techiniques: A sampling of methodologies for the investigation of animal learning, behavior, and cognition. Anderson, M. , 99-110 (2006).
- Hitchcock, L. N., Cunningham, C. L., Lattal, K. M. Cue configuration effects in the acquisition of a cocaine-induced place preference. Behav Neurosci. 128 (2), 217-227 (2014).
- Liu, Z. -H., Chuang, D. M., Smith, C. B. Lithium amerliorates phenotypic deficits in a mouse model of fragile X syndrome. Int J Neuropscyhopharmacol. 14 (5), 618-630 (2011).
- Bardo, M. T., Rowlett, J. K., Harris, M. J. Conditioned place preference using opiate and stimulant drugs: A meta-analysis. Neurosci Biobehav Rev. 19 (1), 39-51 (1995).
