Protocol
Todos os procedimentos experimentais foram aprovados pelo Comitê Animal Care Institucional e Use o McLean Hospital. NOTA: O protocolo a seguir descreve uma única abordagem para a CPP e sensibilização locomotora, muitos detalhes dos quais diferem de outros protocolos de sucesso (testes de fase escura por exemplo, luz- vs., consecutiva vs. dosagem intermitente, etc.). Noviços podem querer começar com estes protocolos, ou simplesmente usá-los como guias, adaptando alterações a partir da literatura com base na pergunta experimental (s) em questão. métodos automáticos de medição são descritos; No entanto, é possível utilizar meios não automatizados para cada ensaio (isto é, a gravação vídeo, mão-de pontuação).
1. preferência por lugar condicionado
- Equipamentos e Room Set-Up:
- Pega ratinhos experimental para 1-3 min cada dia, durante pelo menos 3-5 dias antes do teste.
Nota: Nunca-tratada camundongos pode achar remoção da câmara de stressful, o que pode interferir ou alterar condicionado. - Obter quatro ou mais aparelhos CPP três câmaras, de preferência, equipados com photobeams para coleta automatizada de dados 18. Certifique-se que cada câmara tem duas câmaras maiores, visually- e tactilely-distintas na conexão com uma câmara menor, neutro através de portas que podem ser levantado / descido para controlar o acesso. Tampas em cada câmara deve abrir para a inserção / remoção de ratos e ser montado com luzes pequenas, individualmente controláveis (reguláveis) (um por câmara).
Nota: Os projetos de câmara CPP variam e podem ser adquiridos comercialmente ou construídos pelos pesquisadores. Para o projeto "equilibrado", um esquema recomendada é de uma maior câmara com paredes brancas e piso de grade de arame e outro com paredes pretas e piso bar. A câmara do meio deve ter paredes cinza e cinza piso Plexiglass sólida. Para fins de esclarecimento, estas câmaras vai ser referido como "branco", "preto" e "meio".As tampas devem ser claras Plexiglass. configurações do compartimento alternados (uma ou duas câmaras) também são possíveis e discutido em outro lugar (ver discussão). - Configuração da sala como será durante o teste: desligar ou definir luzes do teto para a configuração mais obtuso e feche a porta. Use um medidor de luz dentro de cada câmara e definir as luzes da tampa de modo que as câmaras de coração são ligeiramente mais brilhante (15-20 lux) do que as câmaras a preto e branco (6-10 lux) a fim de desencorajar os ratos de passar o tempo lá.
NOTA: Se o tempo médio gasto no meio é tanto ou mais do que nas câmaras pretas ou brancas, aumentar ainda mais o contraste de iluminação descrito no Passo 1.1.3. Como alternativa, use piso menos atraente para o meio. (Por exemplo, ~ 220 furos de 0,5 cm de diâmetro, uniformemente espaçados em 6 x 3,5 x ¼ "Plexiglas), mas evitar fazer essa câmara aversivo. Pilot quaisquer alterações para garantir que diminui com o tempo médio não são devido a reduções na exploração totais (cruzamentos) . - Programa coleta automática de dados ( "procedimento" Figura 1A) ou coletar dados manualmente de acordo com os seguintes parâmetros. Definir ensaios para começar após o primeiro intervalo feixe em qualquer câmara de condicionamento. Definir as sessões de "teste" para ser 20 min de comprimento e para controlar o tempo gasto e feixe breaks em cada câmara. Definir as sessões de "condicionamento" para ser 30 min longa e (opcionalmente) para medir intervalos de viga em cada câmara. Defina todas as luzes da câmara para iluminar durante o julgamento.
- Prepare volume completo de solução de cocaína necessária para o experimento em questão. Dissolver o cloridrato de cocaína em 0,9% de NaCl (salina), baseando-se a concentração final num volume de injecção de 0,1 ml / 10 g de peso corporal (por exemplo, para uma dose de 5 mg / kg, a concentração da solução é de 0,5 mg / ml). mistura Vortex por 30-45 seg, filtro estéril (0,2 mm filtros de seringa) e armazenar a RT.
- Pega ratinhos experimental para 1-3 min cada dia, durante pelo menos 3-5 dias antes do teste.
- Teste:
NOTA: O cronograma geral para a CPP é pré-teste, condicionamento eem seguida, pós-teste. O pré-teste pode ser separado a partir condicionado por 1-3 dias; no entanto, condicionado e no dia pós-teste deverá ocorrer em dias consecutivos (Figura 2A). Este tempo deve ser mantida a mesma para todos os grupos na mesma experiência.- Teste durante a fase de luz dos animais utilizando o mesmo aparelho para cada animal ao longo dos dias.
- Cada dia de teste (ou seja, testes e dias de condicionamento), mova ratos à antecâmara comportamental e permitir-lhes para se sentar sem ser perturbado em suas gaiolas para 1-1,5 horas antes do julgamento. Escolha um local onde os ratos podem ser movidos rapidamente de sua gaiola para o aparelho, com o mínimo de interrupção, quando o julgamento começa. Ligue todos os equipamentos de modo que quaisquer ruídos associados com o teste (por exemplo, ventiladores equipamentos) estão presentes.
- Limpe cuidadosamente cada aparelho (paredes internas, pisos e bandejas) com leve, álcool, glicol-ETHER- ou à base de amônia desinfecção limpa antes e depois de cada rato (use o same tipo de produto de limpeza durante todo o experimento). Não negligencie inferiores pavimentação.
- Verifique se as luzes da sala são definidas de forma adequada (desligado ou desactivado) no início de cada dia.
- Prosseguir com o seguinte de acordo com se é um "teste" ou o dia de "condicionamento":
- Em julgamento Dias 1 e 6 (ou seja, o pré e pós-testes), coloque as portas inter-câmara na posição aberta (Figura 2B).
- Carregar o programa de computador "teste" e digite IDs de origem animal (Figura 1A), em seguida, emitir comando de arranque (Figura 1B), se aplicável.
- Suavemente inferior cada rato na câmara meio do seu aparato atribuído, de frente para a parede de trás, e suavemente feche a tampa. Uma vez que todas as câmaras são carregados, deixar a sala de testes e minimizar o ruído.
- Deixar ratos dentro de cada aparelho até que ensaios para todos os ratos têm fechado / terminado (Figura 1C). dados de ensaios de exportação.
<li> Pouco antes ou após o pré-teste, pesar os animais. Use estes pesos para cálculos de dose durante o condicionamento.
- A fim de se preparar para ensaios condicionado, calcule pré-teste "preferência" de cada rato para as câmaras de preto e branco, subtraindo o tempo gasto em cada uma delas a partir do outro (isto é, "black menos branco" e "menos branco preto"; veja A Figura 3, colunas 9 e 10).
- Desde camundongos com fortes preferências iniciais tornar equilíbrio difícil, estabelecer um limite aceitável para os escores de preferência (por exemplo, <33% do tempo de ensaio total) e não incluem ratos que ultrapassá-lo a partir de cálculos. Use um limite liberal (<66% do tempo de ensaio total) para maximizar a inclusão, quando a redução é provável após a conclusão do teste (por exemplo, devido a fora do alvo manipulações cirúrgicas).
NOTA: Os ratos que excedam o limite ainda pode ser testado, com uma tentativa de manter as suas preferências pré-teste equilibrada. Mais tarde, tratinhos stas podem ser excluídos da análise, se necessário, para equilibrar a pontuação do pré-teste. Se extremas preconceitos pré-teste (isto é,> 800 seg) afetam desproporcionalmente um grupo, considerar alterar os ambientes de condicionamento e / ou utilizar outros ensaios. - Escolha a câmara de preto ou branco como a câmara de fármaco-emparelhamento para cada rato, enquanto isso soma dos correspondentes pontuações de preferência pré-teste dentro de cada grupo com as seguintes prioridades em mente:
NOTA: Tenha cuidado para equilibrar contas entre grupos dentro de cada coorte, bem como através de qualquer coortes anteriores.- Faça as somas de todos os grupos como equivalentes possível.
- Adicione as somas mais próximo de zero quanto possível (isto é, escolher o lado preferido para alguns ratinhos e o lado não-preferida para os outros). Se um quase zero soma é impossível para qualquer grupo, re-ajustar todos os outros para igualar a melhor pontuação obtida para o grupo limitante, favorecendo grupo ligeiramente negativo resume maispositivo.
- Tanto quanto possível, manter as atribuições de negro contra branco e preferenciais em relação câmaras não preferidos para emparelhamentos de drogas, mesmo dentro de cada grupo.
- Como nem sempre é possível cumprir os objetivos acima, corrigir eventuais desvios, fazendo opostas considerações de equilíbrio em coortes posteriores; no entanto, tentar evitar a produção de coortes com descontroladamente diferentes preferências médias pré-teste.
- No condicionamento Dias 2-5, coloque portas inter-câmara na posição fechada (Figura 2C).
- Preparar seringas individuais com cocaína (Dias 2 e 4) ou solução salina (dias 3 e 5) de solução, conforme descrito no passo 1.1.5 e com base nos pesos corporais medidos no pré-teste.
NOTA: A dose deve ser escolhido com relação às expectativas experimentais, as considerações mencionadas na introdução, e os efeitos potenciais piso e teto. Muitas vezes, é melhor para conduzir experimentos independentes, utilizando pelo menos duas doses diferentes. - Load "conditioning programa "computador e entrar IDs de origem animal (Figura 1A), em seguida, emitir comando de arranque (Figura 1B), se aplicável.
- Nuca e injectar cada ratinho (IP), reduzindo-os imediatamente para a câmara de preto ou branco apropriada de atribuído o seu aparelho de frente para a parede traseira, então suavemente fechar a tampa. Uma vez que todas as câmaras são carregados, deixar a sala de testes e minimizar o ruído.
- Remover os ratinhos a partir da sua câmara para o mais próximo exactamente 30 min quanto possível (isto é, o primeiro ratos são removidos das suas câmaras, enquanto outros ainda são ratinhos condicionado). Retirar os animais o mais silenciosamente possível, sem introduzir ruído.
- Escolha um método de análise. De qualquer tempo subtrair gasto no lado emparelhado com soro fisiológico durante o pós-teste do tempo gasto no lado emparelhado ao uso de cocaína durante o pós-teste (cocaína - salina, sec) ou usar o tempo gasto na câmara emparelhado com a droga pós-testemenos o tempo de pré-teste gasto na câmara emparelhado com a droga.
NOTA: se estiver usando o primeiro método, também os gráficos de linhas lote de tempo médio gasto no meio, câmaras saline- e emparelhado com a droga durante o pré e pós-testes para cada grupo. Em comparação com o pré-teste, pós-teste deve mostrar o aumento do tempo no lado emparelhado com a droga e diminuição do tempo gasto no lado emparelhado com solução salina (ver Figura 6, inferior e de discussão para explicação). - Dependendo da natureza e o número de grupos a ser comparados, usar um t-teste, com uma ou ANOVA de duas vias, como apropriado, possivelmente com a análise post-hoc, para analisar qualquer das pontuações subtração acima apresentada.
NOTA: pontuação de preferência de cocaína tendem a ser variável, e, além disso, pode ser negativo (ou seja, indicar aversão ao lado do emparelhado com a droga). Os ratos que mostram aversão não deve ser removido (a menos que estejam de outliers estatísticos), uma vez que este resultado é normal e provavelmente importante para determinar diferenças entre groups. Esperar a necessidade tamanhos de amostra de 12 a 30 animais por grupo, dependendo do tamanho do efeito do tratamento.
2. Locomotor Sensibilização
- Equipamentos e Room Set-Up
- Obter um photobeam matriz 4 x 8 (X x Y) (dimensões externas 11.5 "x 20"). Construir uma câmara de topo aberto feito de plexiglas preto (dimensões internas 22 1/6 "X 13 ¾" x 9 3/8 ") para alojar a matriz (Figura 4A).
- Preparar a sala de teste a fim de que uma luz vermelha (ceiling- ou montado na parede) pode ser usado durante o teste.
- Prepare sessões de programa separado para ensaios de habituação e injeção diárias.
- Jogo ensaios de habituação ser entre 30-60 min e ensaios de injecção para ser entre 60-120 minutos (Figura 5B). O comprimento recomendado para cada um é de 60 min. Mantenha comprimento julgamento consistente em vários grupos dentro da mesma experiência.
- Definir ensaios para começar recording após a primeira pausa feixe que ocorre após o sinal de partida foi iniciado (Figura 5B). Para o ensaio da injeção, defina o sinal de partida para que as caixas podem ser iniciado individualmente (não em uníssono), se possível.
- Definir quebras de feixe a ser registrado nas definidos pelo usuário "caixas", de preferência, 5 min cada (Figura 5B).
- Prepare volume completo de solução de cocaína necessária para o experimento em questão. Dissolver o cloridrato de cocaína em 0,9% de NaCl (salina), baseando-se a concentração final num volume de injecção de 0,1 ml / 10 g de peso corporal (por exemplo, para uma dose de 5 mg / kg, a concentração da solução é de 0,5 mg / ml). mistura Vortex por 30-45 seg, filtro estéril (0,2 mm filtros de seringa) e armazenar a RT.
- ensaio
NOTA: A fase inicial de testes é executado por 10-11 dias consecutivos. Ratos receber dois ensaios por dia: habituação (sem injecção) e injeção. Administrar solução salina durante os primeiros três a fnossos dias (ver discussão para importância de habituação solução salina), e cocaína para o próximo sete utilizando a mesma dose (por ex., 15 mg / kg / dia).- Cada dia, aclimatar os ratos nas suas gaiolas para a antecâmara comportamental durante 30 min a 1 h.
- Prepare limpas gaiolas de habitação de tamanho padrão do rato acrílico transparente com uma camada extremamente fina de roupas de cama (por exemplo, chips de pinheiros), de modo a não photobeams obscuras, se for o caso (Figura 4C & D).
- Coloque gaiolas contra o eixo Y da matriz photobeam perto de uma extremidade, de modo que cinco feixes são espaçados uniformemente ao longo do seu comprimento. Feixes de eixo-X não são usados neste ensaio (Figura 4C e D).
- Tome ratos de sua gaiola, no aleatório ordem, nuca e pesar. Remova cada rato do barco pesar pela base de sua cauda (com suporte) e coloque diretamente em sua gaiola locomotor atribuído. Cubra cada gaiola com uma tampa de filtro-top padrão.
- Prepare seringas individuais wom solução salina ou solução de cocaína, tal como descrito no passo 2.1.7, com base nos pesos corporais do dia atual. Começar com uma dose de 15 ou 20 mg / kg, e considerar uma segunda experiência utilizando uma dose mais elevada ou mais baixa (ver a discussão para factores relevantes).
- Uma vez que os ensaios de habituação ter terminado para todas as gaiolas, carregar o programa de injeção.
- Um de cada vez, remover os ratos de sua gaiola teste, nuca e dar sua injeção (ip). Antes de devolver o mouse para sua gaiola teste, rapidamente iniciar o sinal de partida para essa gaiola (Figura 5C, em baixo).
- Depois de todos os ensaios de injecção ter terminado, retorne ratos para suas gaiolas e sua sala de habitação.
- Se desejado, permitir que os ratos a sofrer uma série de intervalos de segurança e os desafios de drogas, tais como as seguintes: a mesma dose, a metade da dose original, dose dupla, em seguida, solução salina, permitindo que sete dias antes do desafio mesma dose e 3-7 dias antes de cada desafio adicional. Seja qual for a escolha de desafios, manutenn períodos de abstinência semelhantes em coortes dentro de um experimento.
NOTA: Se a dose inicial é elevada (por exemplo, 30 mg / kg ou acima), o dobro da dose deve ser ignorado ou substituído com uma dose mais baixa. O desafio salina revela qualquer activação locomotora condicionada pelo ambiente emparelhado-cocaína sozinho, e no processo, a quantidade de locomoção sensibilizada que é dependente de cocaína (ver discussão).
- Análise estatística
- Escolha da porção (s) de cada ensaio que vai ser utilizado para a análise. A maioria locomoção induzida por cocaína em roedores ocorre dentro da primeira injeção de drogas ~ 15-30 min depois. Dependendo de variáveis envolvidas, considere a análise locomoção cumulativa para múltiplas janelas de tempo (por exemplo, os primeiros 15, 30, 60 e / ou 120 min) ou se concentrar em segmentos independentes do julgamento.
- Usando o tempo de estrutura escolhida, resumir as quebras de feixe para cada animal por dia, durante os ensaios de habituação e de injecção separadamente e depois umverage os montantes para cada grupo. Plot médias e erros padrão da média (SEM) em um gráfico de linha sobre todos os dias. Como tratamentos podem alterar a forma como os ratinhos responderam à droga no início e / ou no final de cada estudo diário, também traçar médios quebras feixe grupo de 5-min escaninho ao longo de cada ensaio diária.
NOTA: Traçando médias de atividade diária para ensaios de habituação e de injecção (por exemplo, em primeiro lugar 15 min) faz com que seja artificialmente parecer que a locomoção é atenuada pela injeção de solução salina, mas lembre-se que a atividade tem (mais provável) recusou-se a este nível até o final de habituação a cada dia . - Analisar salinas e tratamento da toxicodependência dias consecutivos separadamente usando medidas repetidas (RM) ANOVAs tendo o fator intra-sujeitos do dia / hora e incluindo todos os fatores entre-indivíduos no projeto, conforme o caso. Use um teste t ou One-Way ANOVA para investigar diferenças entre os grupos no dia 1 de cocaína (exposição aguda), e uma análise de variância multivariada para os desafios. Quando for o caso, siga significance com testes post-hoc ou univariada ANOVAs.
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Representative Results
Os resultados representativos do ensaio de CPP são mostrados na Figura 6 do tipo selvagem utilizando ratinhos C57BL / 6N a cerca de nove semanas de idade. O desenho do estudo foi um factorial mista 2 x 3, com uma variável dentro-sujeitos de teste (pré e pós) e um entre-sujeitos variável de tratamento (solução salina e cocaína 5 e 10 mg / kg). A RM ANOVA mostrou uma interação significativa entre o teste eo tratamento (F 2,20 = 3,68, p <0,05), o que foi interpretado no lugar de efeitos principais significativos observados tanto para Test (F 1,20 = 9,86, p <0,01) e O tratamento (F 1,20 = 4,37, P <0,05). comparações post hoc mostraram que nenhum dos grupos diferiam uns dos outros durante o pré-teste. No pós-teste, a 5 mg / kg e 10 mg / kg não diferiram significativamente um do outro; No entanto, ambos os grupos mostraram significativamente maior preferência para a câmara de emparelhamento de cocaína do que o grupo de controlo apenas com solução salina (de Tukey: 5 mg / kg, p <0,5; 10 mg / kg, p &# 60; 0,01). Além disso, os testes post hoc de Bonferroni mostraram que tanto a 5 (p <0,05) e 10 (p <0,05) mg / grupos kg mostrou maior preferência para o lado do emparelhado-cocaína no pós-teste em relação ao pré-teste, enquanto a solução salina grupo -saline não mostrou nenhuma mudança do pré ao pós-teste.
Os resultados representativos do ensaio locomotor são mostrados na Figura 7A e B do tipo selvagem utilizando ratinhos C57BL / 6N de controlo da mesma ninhada de uma série de experiências separadas que foram previamente publicados 18. Após aclimatação a injecções de solução salina durante 3-4 dias, os ratinhos receberam uma injecção de cocaína (ip) aos 5, 10, 15 ou 30 mg / kg por dia durante sete dias. Na sequência de um período de espera de sete ou 14 dias, cada grupo recebeu um desafio de cocaína na dose original, em seguida, depois de mais (variável) períodos de espera, alguns receberam desafios cocaína adicionais em outras doses, como mostrado. Para a finalidade de demonstrar o efeito da dose de cocaína em LOCOMotor sensibilização na publicação atual, os quatro grupos com doses diferentes foram combinados em um 4 x 7 projeto mixed-factorial, com uma intra-sujeitos variável do Dia (7 primeiras injeções de cocaína) e um factor entre sujeitos de Dose. A RM ANOVA mostrou uma interação significativa entre a dose e Dia (F 18,276 = 12,53, p <0,0001), o que foi interpretado em vez de principais efeitos significativos que foram também observadas para ambos Day (F 6,276 = 18,25, p <0,0001) e Dose ( F 3,46 = 22,63, p <0,0001). Tukey post hoc de análise mostrou diferenças significativas em geral entre 5 e 15 mg / kg (p <0,0001), 5 e 30 mg / kg (p <0,0001), e 10 e 15 mg / kg (p <0,01). Uma série de diferenças significativas foram observadas quando os grupos foram comparados a cada dia. Notado aqui são diferenças para o dia 1 de cocaína (5 vs 30 mg / kg, p <0,01; 10 vs 30 mg / kg, p <0,05; 15 vs 30 mg / kg, p <0,01) e Dia 7 (cocaína 5 x 10 mg / kg, p <0,05; 5 x 15 mg / kg, p <0,0001; 10 vs. 15 mg / kg, p <0,01; 15 vs. 30 mg / kg, p <0,0001). Figura 7C mostra figuras simuladas que ilustram os principais aspectos da sensibilização locomotora que pode diferir grupos quantidade de tratamento. Embora estas características são ilustrados aqui de forma independente, é também possível observar diferenças nas suas combinações.
Figura 1. Med PC CPP controle de sessão de base. (A) A indicação Padrão, ícone sessão aberta (caixa vermelha), e caixa de diálogo de sessão aberta (no detalhe). Selecione "nome personalizado" e usar a janela de pastas para navegar até a pasta de dados e o nome da sessão. Selecionar o programa apropriado na lista drop-down "procedimento". Para cada caixa em uso, verifique o número da caixa e insira a informação pertinente em caixas assunto, experiência, e de grupo. (B) visor câmara de carga, começar ícone de sinal (caixa azul), e enviar sinalcaixa de diálogo al (inserção). Uma vez que todos os dados da câmara tem sido inseridos, selecione câmaras para ser carregado e emissão iniciar sinal. Chambers vai agora ser desencadeada por feixe-break para iniciar o temporizador da sessão e recolher dados. (C) visor sessão terminou. À medida que cada câmara concluir o programa designado, a área de coleta de dados (caixa verde) irá tornar-se estático e área de informação da câmara (caixa de laranja) vai mostrar câmaras como "fechada". Por favor clique aqui para ver uma versão maior desta figura.
Figura 2. Configuração câmara de CPP. (A) Sample linha do tempo experimental. Pré-teste é seguido por cocaína diária alternada (cinzento) e sessões de condicionamento salina (branco). Pós-teste é realizado 24 horas após a última sessão de condicionamento. ( B) de configuração câmara aberta para uso em sessões de pré e pós-teste. Note-se que as portas entre as câmaras estão em posição levantada / aberta. (C) de configuração câmara fechada para uso em sessões de condicionamento. Note-se que as portas manuais são reduzidos, sem acesso entre as câmaras. Por favor clique aqui para ver uma versão maior desta figura.
Figura 3. cálculos de projecto equilibrado para CPP. Exemplo mostrando cálculos e objetivos quando equilibrando escores do pré-teste no CPP. Por favor clique aqui para ver uma versão maior desta figura.
ig4.jpg "/>
Figura 4. Locomotor Câmara de configuração. (A) câmara exterior consiste na caixa preto opaco dentro do qual a matriz feixe se encaixa perfeitamente (B). Câmaras de tamanho Housing / caixa de sapato deve ser preenchido com uma fina camada de roupa de cama (C) e alinhados de forma que vigas estão uniformemente distribuídas ao longo do eixo (D). Por favor clique aqui para ver uma versão maior desta figura.
Figura 5. Locomotor Operação. Programa de computador (A) padrão de computador Câmara. Inicie uma nova base de dados de sessão (caixa azul e inserção). Renomear arquivos e diretórios para cada experimento (azul sub-inserção). Criar uma nova sessão (caixa vermelha e inserção) com o identificador exclusivo. Editar Sessão (inserção vermelho) e enter informações identificador animal na guia câmara (caixa verde e inserção) e configurar start / stop de controle para cada tipo de sessão (caixa de laranja). (B) Selecione controle de parada de início apropriado para cada tipo de sessão. Definir duração do intervalo de 300 segundos (por 5 min bin) e 12 intervalos por fase (para 1 sessão hr). Para as sessões de habituação (à esquerda), câmaras será acionado para iniciar em uníssono (habilitar manualmente Fase ... Tudo em Unison) e começará o monitoramento para a atividade imediatamente após o primeiro intervalo de feixe. Para as sessões de injecção (à direita), câmaras serão acionados individualmente (habilitar manualmente fase ... Individualmente Botões tela) e começará o monitoramento para a atividade imediatamente após o primeiro intervalo de feixe. Ambos os tipos de sessão terminará quando o tempo total de fase expirou para cada câmara individualmente. (C) Uma vez que a sessão foi iniciada, sessões de habituação pode ser iniciado selecionando o botão "start all" (em cima). Note-se que após TriggEring, todas as câmaras estará esperando por primeira pausa feixe para começar a sessão. Para as sessões de injeção, cada câmara pode ser iniciado de forma independente (parte inferior). Note-se que após a activação câmaras individuais (enquanto que o animal está fora de câmara para injecção), câmaras estará esperando para o primeiro intervalo feixe para começar a sessão. Por favor clique aqui para ver uma versão maior desta figura.
Figura 6. Os resultados representativos CPP. (Top) Em CPP, ratos mostraram preferência significativa para uma câmara previamente emparelhado com cocaína (5 ou 10 mg / kg), enquanto os ratos que receberam pares salino em ambas as câmaras não desenvolveram qualquer preferência. Coluna abreviaturas denotam diferenças significativas entre os grupos a partir da barra marcado em comparação com o grupo observou no mesmo teste TIapontar-me. (Inferior) Representando graficamente o tempo gasto em cocaína contra câmaras emparelhado com solução salina durante o pré e pós-teste, os aumentos no lado do emparelhamento de cocaína pode ser visto nas 5 e 10 mg / kg grupos que são à custa do tempo de gasto em ambas as câmaras emparelhado com solução salina e médio. Em contraste, não houve diferenças marcantes no tempo gasto em qualquer câmara entre pré e pós-teste no grupo controle soro fisiológico. Dados apresentados como média ± SEM. Por favor clique aqui para ver uma versão maior desta figura.
Figura 7. Os resultados representativos locomotor de sensibilização (A) quebras de feixe acumulados durante os primeiros 20 min de cada ensaio por dia durante quatro doses separadas:. 5, 10, 15 e 30 mg / kg em camundongos selvagens seguidos por mesmo-, meia , o dobro da dose de umd desafios salinas, modificados a partir de (18). Todos os grupos receberam desafios mesma dose,-ona (10, 15, 30 mg / kg) ou duas semanas (5 mg / kg) após a última exposição a cocaína. Alguns grupos receberam novos desafios, que foram realizadas em intervalos de segurança variáveis. (B) Lote de dados do aparelho locomotor (quebras de feixe) somados por 5-min bin para ensaios diários durante o 15 mg kg experiência / cocaína sensibilização. (C) Ilustrações que apresentam diferenças de sensibilização locomotora para dois grupos de tratamento que são movidos principalmente por diferenças (esquerda) de resposta de cocaína aguda, (meio) a diferença da taxa de sensibilização ou (direita) As diferenças de sensibilização máxima. Dados apresentados como média ± SEM. Por favor clique aqui para ver uma versão maior desta figura.
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Discussion
Este protocolo demonstra métodos para a preferência local condicionado e sensibilização locomotora, cada um dos quais pode ser utilizado pelo laboratório de média para avaliar aspectos da plasticidade comportamental induzida por drogas. Tal como acontece com a maioria dos testes comportamentais, existem considerações dignos adicionais para além do protocolo básico. Em primeiro lugar, cada uma destas técnicas pode ser concebido como tendo duas fases, a indução e a expressão. "Indução" abrange o desenvolvimento do comportamento de CPP que ocorre durante o condicionamento, e para a sensibilização é o período inicial de exposição à droga (normalmente consecutivos). "Expressão" para CPP é o pós-teste, enquanto que para a sensibilização pode ser definida como um desafio dada droga, quer após a retirada ou simplesmente como a última exposição consecutiva.
Vale a pena considerar as manipulações que limitam a uma destas fases contra as outras para melhor analisar os efeitos potenciais. Vírus com eficácia temporal limitada (por exemplo, de HSV) ou drogas co-administrações / pré-tratamentos (por exemplo, agonistas / antagonistas) são úteis em tais esforços. Quando esta abordagem, pode ainda ser necessário o uso de protocolos de comprimidos de modo que uma fase particular irá coincidir com melhor expressão virai. Para CPP, é possível levar a cabo um método de condicionamento de dois dias, como já anteriormente descrito 37. Especialmente para a sensibilização locomotora, mudanças no intervalo de segurança entre a indução e expressão combinada com estes métodos, pode descobrir processos envolvidos na manutenção ou a estabilidade do comportamento. Além disso, tais métodos podem ser utilizados para estudar o fenómeno da sensibilização cruzada, em que o comportamento sensibilizados é induzida utilizando um medicamento, mas pode ser expressa pela exposição a uma droga diferente. Desde sensibilização cruzada não ocorre entre todas as drogas de sensibilização de abuso, pode provocar um comportamento de sensibilizados que difere um pouco do original, e não é necessariamente bidirecional paraqualquer dado conjunto de medicamentos, a análise pode oferecer oportunidades únicas para entender onde e como diferentes drogas afetam a plasticidade do cérebro e função.
interpretação correcta do CPP, em particular, depende de descartar explicações alternativas para as descobertas. Os dados gerados num aparelho de três compartimentos deve ser uma análise mais exaustiva antes de definir subtracção do tempo gasto no lado emparelhado com solução salina a partir do lado do emparelhamento de cocaína no pós-teste, conforme preferência, uma vez que um aumento em uma preferência para o lado de emparelhado-droga que resulta exclusivamente a partir de uma diminuição do tempo gasto no compartimento emparelhado com solução salina é provável impróprios para uma tal interpretação. A câmara do meio permite a este resultado uma vez que o rato pode alterar o tempo gasto lá em vez da câmara emparelhado com a droga. Também é possível observar o aumento do tempo gasto no lado a emparelhado-droga à custa da câmara secundária, em vez de o lado emparelhado com solução salina; sem dúvida, este resultado ainda pode ser aceitável interpreTed como um aumento na preferência de drogas. A inclusão do terceiro compartimento fornece uma câmara neutra que permite a colocação imparcial do animal durante as sessões de pré e pós-teste 41. Embora útil para abordar preconceitos colocação iniciais que contribuem para os resultados dos testes-dia, a terceira câmara não é necessária para o condicionamento. Projetos alternativos CPP que possuem dois compartimentos distintos ou um único compartimento com configurações de estímulos variados são discutidos em outros lugares 41-42.
Qualquer déficit no lugar preferência por uma droga também devem ser acompanhadas de avaliações de ambos capacidade de aprender associações contextuais e função geral recompensa. Há um número de ajustes que podem ser feitos para o paradigma CPP que pode auxiliar na interpretação de preferência alterada, incluindo a modificação da saliência do UCS (droga), aumentando (ou diminuindo) o número de emparelhamentos ou utilizando mais elevada ou mais baixa de droga dose. CPP pode ser realizada utilizando fo palatávelOD (por exemplo, alto teor de gordura, sacarose) ou interacções sociais para avaliar se a alteração observada é específica para a droga ou é relevante para recompensas naturais; não-CPP abordagens úteis para este fim incluem a auto-estimulação intracraniana, de preferência sacarose, e / ou funções de abordagem apetitivas. No entanto, todas estas opções variam em sua capacidade de tratar adequadamente a questão desejado. CPP-base alimentar pode ser particularmente benéfico, já que respostas normais demonstrar a capacidade de aprender e formar associações contextuais apropriadas com uma recompensa natural. controles adicionais para avaliar a capacidade de aprendizagem incluem tarefas que dependem de aprendizagem contextual / memória (medo contextual condicionado e CPA). CPA tem a vantagem de poder ser executado de forma semelhante à CPP, muitas vezes na mesma câmaras, substituindo a droga apetitivos com uma experiência aversivo (por exemplo, injecção de cloreto de lítio). Animais que apresentam déficits no CPP, mas CPA normal, demonstrar a capacidade de formar associações contextuais apropriadass, o que indica que as deficiências no CPP droga mais provável relacionar para recompensar (ou de outra forma específica de drogas). Um cuidado para CPA usando cloreto de lítio a considerar é se esta droga é um tratamento conhecido para qualquer condição que pode ser modelada pelos animais experimentais. Por exemplo, o tratamento de lítio foi mostrado para neutralizar os défices de aprendizagem no modelo de ratinho de 43 X frágil, que este método de controlo confundir.
Além do paradigma clássico CPP, existem potenciais extensões de usuários podem ser úteis, tais como testes de extinção da associação de drogas ao contexto aprendeu e sua reintegração após CPP. Respostas condicionadas (CRS), uma vez estabelecido, pode ser mantida por longos períodos 19,20 quando os animais são deixados sem perturbações. Apesar de a persistência relativa do CR, ela pode ser eficazmente utilizadas extinta por apresentações do CS (contexto) na ausência do UCS (droga). Dois métodos de extinção CPP aparecem no litratura: exposição do ensaio repetido sem injeção de 21 ou re-pares de lado anteriormente emparelhado com a droga com o veículo 22. processos de extinção refletir a nova aprendizagem, em oposição a "desaprender" do condicionamento original, uma ideia efetivamente demonstrada através de "reintegração". Reposição é classicamente desencadeada por re-exposição ao UCS, que produz a recuperação da CR. No contexto do CPP, uma única injecção da droga irá provocar a formação animais para mostrar preferência lugar. Curiosamente muitas pistas de drogas não-treinamento também pode produzir reintegração do CPP, incluindo priming com medicamentos alternativos 22 e uma variedade de estressores 23-26. Extinção e reintegração experimentos são de particular interesse para o campo da toxicodependência como modelos de tratamento de drogas e recaída. As intervenções que melhoram a taxa de desaparecimento e / ou reduzir a magnitude de restabelecimento pode ser alvos valiosos para farmacoterapias humanos.
(por exemplo, 27-29). Nomeadamente no entanto, sensibilização independente de contexto foi claramente demonstrado em outros estudos (por exemplo, 30-32). Os detalhes experimentais que se podem contribuir para um aumento dependente do contexto em sensibilização é observável incluem dose de fármaco, a duração da exposição, se qualquer grupo deve ser transportada para o ensaio óf sensibilização e certos aspectos da pré-exposição para a câmara de testes; no entanto, estes detalhes permanecem pouco claras. Um método para determinar a contribuição de sensibilização contextual é dar um desafio salina seguinte sensibilização de drogas 33. A utilização do paradigma descrito minimiza a contribuição de sensibilização dependente do contexto como evidenciado por muito pouco activação locomotora em estudos anteriores após desafio com solução salina. A contribuição contextual à sensibilização foi revisto em uma série de documentos, muitas vezes incluindo discussões sobre outros do que a atividade locomotora 34 comportamentos.
Para limitar a contaminação da activação induzida por droga e sensibilização com o locomotora efeitos induzidos por um ambiente novo estímulo, os ratos são aclimatados às injecções de soro fisiológico durante três a quatro dias no início de cada experiência. Como pode ser visto na Figura 7, os ratos mostram tipicamente locomoção reduzida entre a primeira eaúltimo dia de aclimatação de solução salina. Além disso, os ratinhos são visivelmente mais calmos e mais fácil de manusear e injectar por a última exposição salina. Trabalhos anteriores testaram várias estirpes e genótipos de ratos usando este paradigma e não vê grande variação na actividade de aclimatação solução salina através deles; No entanto, é possível observar ocasionalmente hiperactividade fenótipos muito fortes associadas com os genótipos particulares que não são superados utilizando este método. Nestes casos, pode ser desejável para realizar vários dias de aclimatação de solução salina (até planaltos locomoção no grupo hiperactiva), e, em seguida, normalizar o grupo hiperactivo para o grupo de controlo utilizando os dados do dia da injecção de solução salina última. Embora não seja ideal, ele permite uma comparação mais razoável dos efeitos de um fármaco na locomoção entre estes grupos. Outras opções que podem diminuir hiperactividade extremo são para estender o comprimento de teste de habituação antes da injecção todos os dias por um a cinco horas, e / ou usar ensaios de injecção mais longos (2-4 h) edia ach.
Existem considerações adicionais que são importantes para a interpretação do comportamento locomotor. Tal como ilustrado na Figura 7C, as diferenças observadas grupo pode ser conduzido principalmente por disparidades na resposta locomotora aguda, a taxa de sensibilização ao longo de dias, o limite máximo de sensibilidade, ou alguma combinação destes factores. Analisar as contribuições desses fatores individualmente pode ser útil. Para este efeito, a resposta locomotora aguda podem ser analisados estatisticamente sozinho. Em seguida, a taxa de sensibilização pode ser avaliada utilizando um programa capaz de ajuste de curva e um processo de normalização taxa que desconta quaisquer diferenças locomotoras agudas. sensibilização máxima alterada normalmente é revelado em um RM ANOVA ao longo dos dias de exposição de drogas consecutivos, onde as comparações post-hoc de acompanhamento do dia-a-dia são significativas em dias após a respostas do grupo ter estabilizado. Um deve estar ciente que a sensibilização máxima não pode ser determinadapara qualquer grupo que mantém uma resposta locomotora linear ao longo de dias de exposição à droga, como mostrado na Figura 7C (média; linha azul). Em tal caso, a exposição ao fármaco pode ser estendido para tentar e determinar sensibilização máxima.
Por último, é tipicamente melhor comparar sensibilização entre os grupos, utilizando pelo menos duas doses de droga primária realizada em coortes separados de animais. Diferenças em qualquer dos aspectos acima de activação locomotora, em uma dose de, ou ambos, deve ser utilizada para orientar o teste para excluir outras explicações, incluindo alterações no desenvolvimento de estereotipia. A exposição repetida a algumas drogas, como a cocaína e anfetamina, não só produz a locomoção sensibilizada de uma maneira dependente da dose, mas também sensibiliza comportamentos estereotipados concorrentes. Estes estereótipos tornam-se particularmente evidente em doses elevadas, de tal forma que locomotor sensibilização é muitas vezes obscurecida parcialmente ou completamente, mas revelou novamente com a administração deuma dose mais baixa. Por esta razão, um "déficit" na sensibilização locomotora em um grupo experimental, na verdade, pode reflectir a elevada sensibilidade do desenvolvimento induzido por drogas de estereotipias. A avaliação da estereotipia pode ser um desafio, mas há uma série de tabelas publicadas 35 e 36 outras abordagens. Usando tanto uma escala estereotipia geral e uma avaliação dos comportamentos específicos é recomendado, conforme publicado anteriormente 18.
Em conclusão, uma série de testes comportamentais foram desenvolvidos em modelos animais, numa tentativa para analisar a complexidade da dependência humana. preferência local condicionado e sensibilização locomotora são dois testes básicos amplamente utilizado em roedores e, respectivamente, que pode ser particularmente útil na avaliação de recompensa associado com a droga e o início de plasticidade persistente induzida pelo uso repetido. Há uma série de considerações para a concepção e interpretação de cada tipo de estudo, tornando-worthwhile considerar cuidadosamente os objetivos experimentais e da literatura anterior ao planejar essas avaliações.
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Disclosures
Os autores declaram que não têm interesses financeiros concorrentes.
Acknowledgments
Os autores agradecem a Karen Dietz e Shari Birnbaum para a entrada anterior sobre considerações de design comportamentais e Lauren Peca para ajudar com testes de comportamento. Os autores também agradecer o apoio generoso da Simons Foundation (Simons Fundação Iniciativa Autism Research subvenção para CWC), NIDA (DA008277, DA027664 e DA030590 a CWC, F32DA027265 para LNS e F32DA036319 a RDP), a Fundação FRAXA Pesquisa e Eleanor e Miles Programa Shore Fellowship (suporte bolsa para LNS) e do Programa de Bolsas Kaneb John (suporte bolsa para MT).
Materials
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| Cocaine Hydrochloride USP | Mallinckrodt Pharmaceuticals | 0406-1520 | Purchase and use (Schedule II controlled substance) for research purposes requires compliance and licensure according to state and federal law. |
| Conditioned Place Preference, Three Compartment Apparatus with Manual Doors and Lights for Mouse | Med-Associates Inc. | MED-CPP-MS & MED-CPP-3013 | Our laboratory has used these boxes; however, many alternative boxes are available & acceptable. |
| PAS-Home Cage Activity Monitoring Photobeam Arrays | San Diego Instruments | 2325-0223 & 7500-0221 | Our lab houses these arrays inside of custom built chambers, as described in the text. There are alternatives available. |
| Disposable Sani-Cloth disenfecting wipes | PDI | 13872 |
References
- National Institute on Drug Abuse. Drug Facts: Understanding Drug Abuse and Addiction. www.drugabuse.gov. , Available from: http://www.drugabuse.gov/publications/drugfacts/understanding-drug-abuse-addiction (2012).
- Kasanetz, F., et al. Transition to addiction is associated with a persistent impairment in synaptic plasticity. Science. 328 (5986), 1709-1712 (2010).
- Beach, H. D.
- van der Kooy, D. Chapter 13, Place Conditioning: A simple and effective method for assessing the motivational properties of drugs. Methods of Assessing the Reinforcing Properties of Abused Drugs. Bozarth, M. A. , 229-240 (2012).
- Carlezon, W. A. Place conditioning to study drug reward and aversion. Methods Mol Med. 84, 243-249 (2003).
- Prus, A. J., James, J. R., Rosecrans, J. A. Chapter 4, Conditioned Place Preference. Methods of Behavior Analysis in Neuroscience. Buccafusco, J. J. , (2009).
- Tzschentke, T. M. Measuring reward with the conditioned place preference (CPP) paradigm: update of the last decade. Addict Biol. 12 (3-4), 227-462 (2007).
- Aguilar, M. A., Rodrìguez-Arias, M., Miñarro, J. Neurobiological mechanisms of the reinstatement of drug-conditioned place preference. Brain Res Rev. 59 (2), 253-277 (2009).
- Feduccia, A. A., Duvauchelle, C. L. Novel apparatus and method for drug reinforcement. JoVE. (42), (2010).
- Brabant, C., Quertemont, E., Tirelli, E. Influence of the dose and the number of drug-context pairings on the magnitude and the long-lasting retention of cocaine-induced conditioned place preference in C57BL/6J mice. Psychopharmacology. 180 (1), 33-40 (2005).
- Pliakas, A. M., Carlson, R. R., Neve, R. L., Konradi, C., Nestler, E. J., Carlezon, W. A. Altered responsiveness to cocaine and increased immobility in the forced swim test associated with elevated cAMP response element-binding protein expression in nucleus accumbens. J Neurosci. 21 (18), 7397-7403 (2001).
- Knackstedt, L. A., Samimi, M. M., Ettenberg, A. Evidence for opponent-process actions of intravenous cocaine and cocaethylene. Pharmacol Biochem Behav. 72 (4), 931-936 (2002).
- Post, R. M., Rose, H. Increasing effects of repetitive cocaine administration in the rat. Nature. 260 (5553), 731-732 (1976).
- Marin, M. T., Cruz, F. C., Planeta, C. S. Cocaine-induced behavioral sensitization in adolescent rats endures until adulthood: lack of association with GluR1 and NR1 glutamate receptor subunits and tyrosine hydroxylase. Pharmacol Biochem Behav. 91 (1), 109-114 (2008).
- Henry, D. J., White, F. J. The persistence of behavioral sensitization to cocaine parallels enhanced inhibition of nucleus accumbens neurons. J Neurosci. 15 (9), 6287-6299 (1995).
- Hope, B. T., Simmons, D. E., Mitchell, T. B., Kreuter, J. D., Mattson, B. J. Cocaine-induced locomotor activity and Fos expression in nucleus accumbens are sensitized for 6 after repeated cocaine administration outside the home cage. Eur J Neurosci. 24 (3), 867-875 (2006).
- Shuster, L., Yu, G., Bates, A. Sensitization to cocaine stimulation in mice. Psychopharmacology. 52 (2), 185-190 (1977).
- Smith, L. N., Jedynak, J. P., Fontenot, M. R., Hale, C. R., Dietz, K. C., Taniguchi, M., Thomas, F. S., Zirlin, B. C., Birnbaum, S. G., Huber, K. M., Thomas, M. J., Cowan, C. W. Fragile X mental retardation protein regulates synaptic and behavioral plasticity to repeated cocaine administration. Neuron. 82 (3), 645-658 (2014).
- Mueller, D., Stewart, J. Cocaine-induced conditioned place preference: reinstatement by priming injections of cocaine after extinction. Behav Brain Res. 115 (1), 39-47 (2000).
- Sakoori, K., Murphy, N. P. Maintenance of conditioned place preferences and aversion in C57BL6 mice: effects of repeated and drug state testing. Behav Brain Res. 160 (1), 34-43 (2005).
- Bardo, M. T., Neisewander, J. L., Miller, J. S. Repeated testing attenuates conditioned place preference with cocaine. Psychopharmacologia. 89 (2), 239-243 (1986).
- Itzhak, Y., Martin, J. L. Cocaine-induced conditioned place preference in mice: induction, extinction and reinstatement by related psychostimulants. Neuropsychopharmacology. 26 (1), 130-134 (2002).
- Kreibich, A. S., Blendy, J. A. cAMP response element-binding protein is required for stress but not cocaine-induced reinstatement. J Neurosci. 24 (30), 6686-6692 (2004).
- Briand, L. A., Blendy, J. A. Not all stress is equal: CREB is not necessary for restraint stress reinstatement of cocaine-conditioned reward. Behav Brain Res. 246, 63-68 (2013).
- Redila, V. A., Chavkin, C. Stress-induced reinstatement of cocaine seeking is mediated by the kappa opioid system. Psychopharmacology. 200 (1), 59-70 (2008).
- Do Couto, R. ibeiro, Aguilar, B., A, M., Manzanedo, C., Rodriguez-Arias, M., Armario, A., Minarro, J. Social stress is as effective as physical stress in reinstating morphine-induced place preference in mice. Psychopharmacology. 185 (4), 459-470 (2006).
- Post, R. M., Lockfeld, A., Squillace, K. M., Contel, N. R. Drug-environment interaction: context dependency of cocaine-induced behavioral sensitization. Life sciences. 28 (7), 755-760 (1981).
- Badiani, A., Browman, K. E., Robinson, T. E. Influence of novel versus home environments on sensitization to the psychomotor stimulant effects of cocaine and amphetamine. Brain Res. 674 (2), 291-298 (1995).
- Li, Y., Acerbo, M. J., Robinson, T. E. The induction of behavioural sensitization is associated with cocaine-induced structural plasticity in the core (but not shell) of the nucleus accumbens. Eur J Neurosci. 20 (6), 1647-1654 (2004).
- Partridge, B., Schenk, S. Context-independent sensitization to the locomotor-activating effects of cocaine. Pharmacol Biochem Behav. 63 (4), 543-548 (1999).
- Le Foll, B., Diaz, J., Sokoloff, P. Increased dopamine D3 receptor expression accompanying behavioral sensitization to nicotine in rats. Synapse. 47 (3), 176-183 (2003).
- Heidbreder, C. A., Babovic-Vuksanovic, D., Shoaib, M., Shippenberg, T. S. Development of behavioral sensitization to cocaine: influence of kappa opioid receptor agonists. J Pharmacol Exp Ther. 275 (1), 150-163 (1995).
- Tirelli, E., Michel, A., Brabant, C. Cocaine-conditioned activity persists for a longer time than cocaine-sensitized activity in mice: implications for the theories using Pavlovian excitatory conditioning to explain the context-specificity of sensitization. Behav Brain Res. 165 (1), 18-25 (2005).
- Anagnostaras, S. G., Schallert, T., Robinson, T. E. Memory processes governing amphetamine-induced psychomotor sensitization. Neuropsychopharmacology. 26 (6), 703-715 (2002).
- Spangler, R., Zhou, Y., Schlussman, S. D., Ho, A., Kreek, M. J. Behavioral stereotypies induced by 'binge' cocaine administration are independent of drug-induced increases in corticosterone levels. Behav Brain Res. 86 (2), 201-204 (1997).
- Kelley, A. E. Measurement of rodent stereotyped behavior. Curr Protoc Neurosci. Chapter 8, Unit 8.8 (2001).
- Taniguchi, M., Carreira, M. B., Smith, L. N., Zirlin, B. C., Neve, R. L., Cowan, C. W. Histone deacetylase 5 limits cocaine reward through cAMP-induced nuclear import. Neuron. 73 (1), 108-120 (2012).
- Zangen, A., Solinas, M., Ikemoto, S., Goldberg, S. R., Wise, R. A. Two brain sites for cannabinoid reward. J Neurosci. 26 (18), 4901-4907 (2006).
- Huston, J. P., de Souza Silva, M. A., Topic, B., Müller, C. P. What's conditioned in conditioned place preference. Trends Pharmacol Sci. 34 (3), 162-166 (2013).
- Schechter, M. D., Calcagnetti, D. J. Trends in place preference conditioning with a cross-indexed bibliography; 1957-1991. Neurosci Biobehav Rev. 17, 21-41 (1993).
- Bevins, R. A., Cunningham, C. L. Chapter 9, Place Conditioning: A Methodological Analysis. Tasks and Techiniques: A sampling of methodologies for the investigation of animal learning, behavior, and cognition. Anderson, M. , 99-110 (2006).
- Hitchcock, L. N., Cunningham, C. L., Lattal, K. M. Cue configuration effects in the acquisition of a cocaine-induced place preference. Behav Neurosci. 128 (2), 217-227 (2014).
- Liu, Z. -H., Chuang, D. M., Smith, C. B. Lithium amerliorates phenotypic deficits in a mouse model of fragile X syndrome. Int J Neuropscyhopharmacol. 14 (5), 618-630 (2011).
- Bardo, M. T., Rowlett, J. K., Harris, M. J. Conditioned place preference using opiate and stimulant drugs: A meta-analysis. Neurosci Biobehav Rev. 19 (1), 39-51 (1995).
