Waiting
Login processing...

Trial ends in Request Full Access Tell Your Colleague About Jove
JoVE Journal Behavior
Click here for the English version

Behavior

הערכת רגישות התנהגות נגרמת קוק העדפות מקום אלפו עכברים

Published: February 18, 2016 doi: 10.3791/53107
Automatic Translation
*1, *1, 1, 1
1Department of Psychiatry, Harvard Medical School, McLean Hospital
* These authors contributed equally

Protocol

כל הפרוצדורות אושרו על ידי ועדת הטיפול בבעלי החיים המוסדית החולים מקלין ושימוש. הערה: הפרוטוקול הבא מתאר גישה יחידה CPP ולרגישות של תנועה, פרטים רבים אשר נבדלים פרוטוקולים מצליחים אחרים (למשל, האור לעומת בדיקות כהה שלב ורצופים לעומת המינון לסירוגין, וכו '). טירונים מומלצים להתחיל עם פרוטוקולים אלה, או פשוט להשתמש בם כמדריכים, התאמה שינויים מהספרות על בסיס שאלה הניסיון (ים) בהישג יד. שיטות מדידות אוטומטיות מתוארות; עם זאת, ניתן להשתמש באמצעים לא-אוטומטיים עבור כל assay (כלומר, הקלטת וידאו, יד-ניקוד).

1. העדפות מקום אלפו

  1. ציוד חדר Set-Up:
    1. טפל עכברי הניסוי במשך 1-3 דקות כל יום, לפחות 3-5 ימים לפני הבדיקה.
      הערה: לעולם אל ידית עכברים עלולים למצוא סילוק מן stre הקאמריתssful, אשר יכול להפריע או לשנות מיזוג.
    2. השג ארבעה או יותר מנגנוני CPP תלת תאי, רצוי מצוידים photobeams עבור איסוף נתונים אוטומטיים 18. ודא כי כל תא יש שני, visually- גדולים במישוש-מובחנים תאי התחברות בתא קטן, ניטראלי דרך דלתות שניתן מגייסת / וריד כדי לשלוט בגישה. מכסים על כל תא צריך לפתוח להכנסה / הסרה של עכברים להיות מותקן עם קטן, בנפרד לשליטה אורות (dimmable) (אחד לכל תא).
      הערה: עיצובי תא CPP להשתנות וניתן לרכוש מסחריים או נבנה על ידי חוקרים. עבור העיצוב "המאוזן", תכנית מומלצת הוא תא אחד גדול עם קירות לבנים ורצפת רשת תיל ושני עם קירות שחורים וריצוף בר. התא באמצע צריך קירות אפורים ריצוף אפור פרספקס מוצק. לצורך הסבר, תאים אלה ייקראו בשם "לבן", "שחור" ו "באמצע".מכסים צריכים להיות ברורים פרספקס. תצורות תא חלופיות (אחת או שתי קאמרי) גם אפשריות ודנו במקום אחר (ראה דיון).
    3. הגדרה בחדר כפי שיהיה במהלך בדיקה: לכבות או להגדיר אור מעל שולחן כדי הגדרת dimmest ולסגור את הדלת. השתמש מד אור בתוך כל תא ולהגדיר את האורות המכסות כך תאי באמצע בהיר מעט (15-20 לוקס) מאשר תאי בשחור לבן (6-10 לוקס) כדי להרתיע עכברים מן לבלות שם.
      הערה: אם משך הזמן הממוצע באמצע הוא פחות או יותר מאשר בתאי שחור או לבן, להגביר עוד יותר את הניגוד תאורה המתואר בשלב 1.1.3. לחלופין, להשתמש ריצוף פחות מושך עבור באמצע. (למשל, ~ 220 0.5 סנטימטרים חורים בקוטר, מחולק באופן שווה ב 6 x 3.5 x ¼ "פרספקס), אך להימנע קאמרי זו מרתיעה. פיילוט ביצוע שינויים על מנת להבטיח כי ירידות הזמן בינוני אינם נובע פוחתים בחיפושי כולל (מעברים) .
    4. Program איסוף נתונים אוטומטי ( "נוהל," איור 1 א) או באופן ידני לאסוף נתונים על פי הפרמטרים הבאים. ניסויי סט להתחיל על הפסקת הקורה הראשונה בחדרו או מיזוג. "בדיקה" קבע הפעלות להיות 20 דקות אורך ו לעקוב אחר השקיע זמן קורה הפסקות בתא אחד. גדר פגישות "מיזוג" להיות 30 דקות ארוכות (אופציונאלי) כדי למדוד הפסקות קרן בתא אחד. כוון את כל האורות הקאמריות להאיר במהלך המשפט.
    5. כן נפח מלא של פתרון קוק הנדרש לצורך ניסוי בהישג יד. ממיסים קוקאין HCl ב 0.9% NaCl (מלח), מבסס את הריכוז הסופי על נפח הזרקה של משקל הגוף 0.1 מ"ל / 10 גרם (למשל, מנה של 5 מ"ג / ק"ג, ריכוז הפתרון הוא 0.5 מ"ג / מ"ל). תערובת וורטקס למשך 30-45 שניות, סינון סטרילי (0.2 מסננים מזרק מיקרומטר) ולאחסן ב RT.
  2. בדיקה:
    ההערה: ציר הזמן הכללי CPP הוא PRE-TEST, מיזוג, ואז POST-TEST. מבחן-מראש ניתן להפריד מיזוג ידי 1-3 ימים; עם זאת, מיזוג וביום שלאחר בדיקה צריך להתבצע על ימים רצופים (איור 2 א). התזמון הזה צריך להישמר זהה עבור כל הקבוצות באותה הניסוי.
    1. מבחן בשלב האור 'חיות באמצעות אותו מנגנון עבור כל חיה על פני ימים.
    2. כל יום ניסיון (כלומר, בדיקות וחוות ימים מיזוג), להעביר עכברים אל חדר ההמתנה התנהגותי ולאפשר להם לשבת באין מפריע בכלובים בביתם 1-1.5 שעות לפני המשפט. בחר את המיקום שבו עכברים ניתן להעביר במהירות מהכלוב שלהם למנגנון, עם הפרעה מזערית, כשהמשפט מתחיל. הפעל את כל הציוד כך שכל רעשים הקשורים הבדיקה (למשל, אוהדי ציוד) נוכחים.
    3. ניקיון יסודי בכל מנגנון (קירות פנימיים, ריצוף ומגשים) עם קלה, אלכוהול, גליקול-ether- או אמוניה מבוססת וחיטוי מגבונים לפני ואחרי כל עכבר (השתמש סםסוג דואר של מנקה לאורך הניסוי). האם לא תחתון ריצוף הזנחה.
    4. בדוק כי אורות בחדר מוגדרים כראוי (כבוי או מעומעם) בתחילת כל יום.
    5. להמשיך עם הבאות בהתאם אם זה יום "מבחן" או "מיזוג":
      1. לדין ימים 1 ו -6 (כלומר, לפני ואחרי בדיקות פוסט), הציבו את דלתות תא היתר במצב פתוח (איור 2 ב).
      2. טען את תוכנת מחשב "מבחן" וזן מזהי חי (איור 1 א), ולאחר מכן להנפיק הפקודה להתחיל (איור 1B), אם זה אפשרי.
      3. בעדינות נמוך כל עכבר לתא באמצע מנגנון שהוקצה לו, פניו אל הקיר האחורי, ואת ברכות לסגור את המכסה. לאחר שכל התאים נטענים, עזוב את חדר הבדיקות למזער את הרעש.
      4. השאירו עכברים בתוך כל המנגנון עד ניסויים עבור כל העכברים נסגרו / הסתיים (איור 1 ג). נתוני ניסויים ייצוא.
      6. <li> זמן קצר לפני או לאחר בדיקה מקדימה, לשקול את החיות. השתמש משקולות אלה לחישובי מינון במהלך מיזוג.
    6. על מנת להתכונן ניסויים מיזוג, לחשב כל "העדפה" לפני הבדיקה של העכבר לתאי בשחור לבן על ידי הפחתת הזמן המושקע בכל אלה מן האחר (כלומר, "לבן מינוס שחור" & "שחור מינוס לבן", ראה איור 3, עמודים 9 & 10).
    7. מאז עכברים עם העדפות ראשוניות חזקות לעשות איזון קשה, להקים גבול מקובל ציוני העדפה (למשל, <33% מזמן משפט בסך הכל) ואינם כולל עכברים חורגים ממנה מהחישובים. להשתמש בתקרת ליברלית (<66% מזמן משפט בסך הכל) על מנת למקסם את ההכללה כאשר התשה סבירה לאחר הבדיקה יושלם (למשל, עקב מניפולציות כירורגית מחוץ יעד).
      הערה: עכברים העולים על מגבלה יכול עדיין להיבדק, בניסיון לשמור ההעדפות מראש הבדיקה שלהם מאוזנים. מאוחר יותר, tעכברים hese ניתן לשלול מניתוח, במידת הצורך, כדי לאזן ציונים לפני הבדיקה. אם הטיות בדיקה מראש קיצוניות (כלומר,> 800 שניות) פרופורציונליות להשפיע קבוצה אחת, שקול לשנות את סביבות מיזוג ו / או באמצעות מבחני אחרים.
    8. בחר את התא השחור או לבן כמו תא תרופת הזיווג עבור כל עכבר, בינתיים סיכום ציוני העדפה מראש המבחן המתאים בתוך כל קבוצה עם סדר העדיפויות שלהלן:
      הערה: תשמור על עצמך כדי לאזן ציוני בין קבוצות בתוך כל קבוצה, כמו גם על פני כל מחזורים קודמים.
      1. הפוך את הסכומים עבור כל קבוצות כמקבילה ככל האפשר.
      2. הפוך את הסכומים קרובים לאפס ככל האפשר (כלומר, בוחר את הצד המועדף עבור כמה עכברים והצד שאינו מועדף עבור אחרים). אם הסכום אפסי הוא בלתי אפשרי עבור כל קבוצת נתונה, להתאים מחדש את כל לאחרים מתאימים במדויק את התוצאה הטובה ביותר שניתן להשיג עבור הקבוצה המגבילה, לטובת קבוצה שלילית במקצת מסכם מעלחִיוּבִי.
      3. ככל ריאלי, לשמור הקצאות של שחור נגד לבן והעדיף לעומת תאים שאינם מועדפים עבור זיווגי תרופה אפילו בתוך כל קבוצה.
      4. כמו כן, הוא לא תמיד אפשר לעמוד ביעדים הנ"ל, לתקן סטיות כל על ידי ביצוע שיקולי איזון מנוגדים בתוך מחזורים מאוחר יותר; עם זאת, מנסה להימנע לייצר קבוצות עם העדפות מראש מבחן ממוצע שונה לחלוטין.
    9. על מיזוג ימים 2-5, למקם דלתות תא היתר במצב סגור (איור 2 ג).
    10. כן מזרקי פרט עם קוק (ימים 2 ו -4) או מלוח (ימים 3 ו -5) פתרון, כמתואר שלב 1.1.5 ועל סמך משקולות גוף הנמדדים בדיקה מקדימה.
      הערה: מנה צריך להיבחר ביחס לציפיות ניסיוני, שיקולים שהוזכרו במבוא, ואפקטי רצפה ותקרה פוטנציאליים. זה בדרך כלל טוב ביותר לנהל ניסויים בלתי תלויים באמצעות לפחות שתי מנות שונות.
    11. טען "גonditioning "תוכנת מחשב וזן מזהי חי (איור 1 א), ולאחר מכן להנפיק להתחיל פקודה (איור 1B), אם זה אפשרי.
    12. בעורף ולהזריק כל עכבר (IP), מייד הוריד אותם לתוך תא שחור או לבן המתאים של מנגנון שהוקצה להם מול הקיר אחורי, אז בשקט לסגור את המכסה. לאחר שכל התאים נטענים, עזוב את חדר הבדיקות למזער את הרעש.
    13. סור עכברים מהחדר שלהם קרובים בדיוק 30 דקות ככל האפשר (כלומר, העכברים הראשונים יוסרו מלשכתו שלהם ואילו עכברים אחרים הם עדיין מתנה). סר חי בשקט ככל האפשר, ללא החדרת רעש.
  3. ניתוח סטטיסטי:
    1. בחר שיטת ניתוח. כך או לחסר משך הזמן בצד לזווג המלוח במהלך שלאחר בדיקת מעת בילה בצד לזווג הקוק במהלך שלאחר הבדיקה (הקוק - מלוח, שניות) או לנצל את הזמן בילה בתא הסמים לזווג שלאחר בדיקהפחות זמן מראש הבדיקה בילה על חדר הסמים לזווג.
      הערה: אם אתה משתמש בשיטה הראשונה, גם קו העלילה גרפים של משך הזמן הממוצע באמצע, saline- סמים לזווג תאי במהלך טרום ופוסט בדיקות לכל קבוצה. בהשוואת הבדיקה מראש, שלאחר הבדיקה צריך להראות זמן הגדיל את הצד לזווג התרופה וירידת זמן מושקע בצד לזווג המלוח (ראה איור 6, תחתון, ודיון להסבר).
    2. בהתאם לאופי ומספר הקבוצות מושווים, להשתמש מבחן t, חד-צדדי או דו סטרי ANOVA, לפי העניין, ואולי עם ניתוח פוסט הוק, לנתח או של ציוני חיסור הנ מוצג.
      הערה: עשרות העדפת קוק נוטים להיות משתנה, ויתר על כן, יכולים להיות שלילי (כלומר, מצביעים סלידה בצד לזווג סמים). עכברים להראות סלידה אין להסירו (אלא אם כן הם חריגים סטטיסטיים), מאז תוצאה זה נורמלי וחשוב סביר בקביעת הבדלים בין הגרoups. שאזדקק גודל מדגם של 12 עד 30 בעלי חיים לכל קבוצה, תלוי בגודל שפעת הטיפול.

2. רגישות של תנועה

  1. ציוד חדר Set-Up
    1. השג מערך photobeam 4 x 8 (X x Y) (מידות מחוץ 11.5 "x 20"). לבנות תא עם גג פתוח עשוי פרספקס שחור (מידות פנימיות 22 1/6 "x 13 ¾" x 9 3/8 ") כדי לשכן את המערך (האיור 4 א).
    2. הכן לחדר הבדיקה, כך אור אדום (תקרה או קיר רכוב) יכול לשמש במהלך הבדיקה.
    3. כן הפעלות תכנית נפרדת לניסויי הרגלה ו זריקה יומית.
      1. ניסויי הרגלה מוגדרים להיות בין 30-60 ניסויי דקות הזרקה להיות בין 60-120 דקות (איור 5). האורך המומלץ עבור כל 60 דקות. שמור אורך משפט עקבי לאורך מחזורים מרובים באותו הניסוי.
      2. ניסויי סט להתחיל recording על הפסקת הקורה הראשונה המתרחשת לאחר אות ההתחלה כבר יזם (איור 5). לצורך הניסוי הזרקת, להגדיר את אות תחילת כך תיבות ניתן להתחיל בנפרד (לא ביחד), במידת האפשר.
      3. הפסקות קרן סט שתירשמנה ב המוגדרים על ידי המשתמש "פחים" רצוי 5 דקות כל אחד (איור 5).
    4. כן נפח מלא של פתרון קוק הנדרש לצורך ניסוי בהישג יד. ממיסים קוקאין HCl ב 0.9% NaCl (מלח), מבסס את הריכוז הסופי על נפח הזרקה של משקל הגוף 0.1 מ"ל / 10 גרם (למשל, מנה של 5 מ"ג / ק"ג, ריכוז הפתרון הוא 0.5 מ"ג / מ"ל). תערובת וורטקס למשך 30-45 שניות, סינון סטרילי (0.2 מסננים מזרק מיקרומטר) ולאחסן ב RT.
  2. בדיקה
    הערה: השלב הראשוני של בדיקות פועל במשך 10-11 ימים רצופים. עכברים לקבל שני ניסויים יומיים: הרגלה (הזרקה-חינם) והזרקה. נהל מלוחים במשך שלושת הראשונים fבימינו (ראה דיון על החשיבות של התרגלות מלוחים), וקוקאין בשבע הבא תוך שימוש באותו מינון (למשל., 15 מ"ג / ק"ג / יום).
    1. כל יום, להסתגל עכברים בכלובים בביתם אל חדר ההמתנה התנהגותיים למשך 30 דקות עד 1 שעה.
    2. הכן עכבר בגודל סטנדרטי נקי כלובים דיור אקרילי שקוף עם שכבה דקה מאוד של מצעים טריים (למשל, גזרי אורנים), כדי photobeams מעורפל לא, אם זה אפשרי (איור 4C & D).
    3. כלובי מקום נגד ציר Y של מערך photobeam ליד קצה אחד, כך חמש קורות מחולקות באופן שווה לכל אורכו. קורות ציר ה- X שאינם משמשים מבחן זה (איור 4C & D).
    4. קח העכברים לכלוב ביתם, בסדר אקראי, בעורפו ולשקול אותם. הסר כל עכבר מהסירה לשקול ידי בבסיס הזנב שלהם (עם תמיכה) ומניח ישירות לתוך הכלוב של התנועה שהוקצה להם. כיסוי כל כלוב עם מכסה המסנן העליון סטנדרטי.
    5. כן מזרקי פרט wמלוחים ה- i או פתרון קוקאין, כמתואר שלב 2.1.7, מבוסס על משקל הגוף של אותו היום. התחל עם מינון של 15 או 20 מ"ג / ק"ג, ולשקול בניסוי שני שימוש במינון גבוה או נמוך (ראה דיון על הגורמים הרלוונטיים).
    6. לאחר ניסויי הרגלה הסתיימו עבור כל כלובים, לטעון את תכנית ההזרקה.
    7. אחת בכל פעם, להסיר עכברים ממבחן הכלוב, בעורפו שלהם ולתת הזריקה שלהם (IP). לפני החזרת את העכבר לכלוב הבדיקה שלה, במהירות ליזום את אות ההתחלה בכלוב (איור 5 ג, למטה).
    8. אחרי כל ניסויי ההזרקה הסתיימו, לחזור עכברים בכלובים בביתם וחדר הדיור שלהם.
    9. אם תרצה, לאפשר עכברים לעבור סדרה של תקופות נסיגה ואתגרי תרופה, כגון הבא: באותו המינון כמו מקורית, חצי מנה, במינון כפול, אז מלוח, המאפשר שבעה ימים לפני האתגר אותו במינון ושלושה שבע ימים לפני כל אתגר נוסף. לא משנה מה הבחירה של אתגרים, maintain תקופות נסיגה דומה בקבוצות בעלות עניין משותף במסגרת ניסוי.
      הערה: אם את המינון המקורי הוא גבוה (למשל, 30 מ"ג / ק"ג ומעלה), הכפיל במינון צריך לדלג או חליף עם מינון נמוך יותר. האתגר המלוח מגלה כל הפעלה של תנועה מותנית בסביבה לזווג הקוק לבד, ותוך כדי כך, כמות תנועה רגישה כי הוא קוק תלוי (ראה דיון).
  3. ניתוח סטטיסטי
    1. בחר את החלק (ים) של כל ניסוי אשר ישמשו לצורך ניתוח. רוב התנועה נגרמת הקוק במכרסמים מתרחשת בתוך ההזרקה ~ 15-30 דקות לאחר התרופה הראשונה. בהתאם משתני המעורבים, לשקול ניתוח תנועה מצטברת עבור חלונות הזמן המרובה (למשל, 15, 30, 60 ו / או 120 הדקות הראשונות) או להתמקד מקטעים עצמאיים של המשפט.
    2. באמצעות המסגרת הזמן שנבחרה, סכם את הפסקות הקרן עבור כל חיה ליום לניסויי הרגלת הזרקה בנפרד ולאחר מכןverage הסכומים עבור כל קבוצה. מגרש אומר ושגיאות התקן של הממוצע (SEM) בגרף קו על כל הימים. כמו טיפולים עשויים לשנות איך עכברים להגיב לתרופה מוקדם ו / או מאוחר בכל ניסיון יומי, גם עלילת הפסקות קרן קבוצה ממוצעת של בן 5 דקות במשך כל הניסוי יומי.
      הערה: שרטוט ממוצעי פעילות יומית לניסויי הרגלה והזרקה (למשל, 15 דקות ראשונות) עושה את זה באופן מלאכותי להופיע התנועה שהוטבלה בזריקה מלוחה, אך יש לזכור פעילות שיש לו (ככל הנראה) ירד לרמה זו עד סוף ההרגלה בכל יום .
    3. לנתח טיפול מליחי תרופת ימים רצופים בנפרד באמצעות מדידות חוזרות (RM) ANOVAs שיש גורם בתוך-נושאים של יום / השעה ולרבות כל גורמים בין-נושאים בעיצוב, על פי צורך. השתמש מבחן t או One-Way ANOVA לחקור הבדלים בין הקבוצות ביום 1 של קוקאין (לחשיפה אקוטית), וכן ANOVA רב משתני לקראת האתגרים. במידת הצורך, בצע significancדואר עם בדיקות פוסט-הוק או Univariate ANOVAs.

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Representative Results

תוצאות נציג מן assay CPP מוצגים באיור 6 באמצעות עכברי-בר C57BL / 6N בכ תשעה שבועות של גיל. מערך המחקר היה העצרת מעורבת 2 x 3, עם משתנה בתוך-מושאי הבדיקה (לפני ואחרי) וכן בין-מכפיפה משתנה של טיפול (מלוחים וקוקאין 5 ו -10 מ"ג / ק"ג). RM ANOVA הראה אינטראקציה מובהקת בין המבחן והטיפול (F 2,20 = 3.68, p <0.05), מה שהתפרש במקום השפעות עיקריות משמעותיות נצפו הוא המבחן (F 1,20 = 9.86, p <0.01) טיפול (F 1,20 = 4.37, p <0.05). השוואות הוק הודעה הראו כי אף אחת מהקבוצות היו שונות זו מזו במהלך הבדיקה מקדימה. באותו שלאחר הבדיקה, 5 מ"ג / ק"ג ו -10 מ"ג / ק"ג לא היו שונים משמעותית זה מזה; קבוצות עם זאת, הן הראו באופן משמעותי העדפה גדולה יותר עבור החדר לזווג קוקאין מאשר קבוצת הביקורת מלוחים בלבד (של Tukey: 5 מ"ג / ק"ג, p <0.5; 10 מ"ג / ק"ג, p &# 60; 0.01). בנוסף, בדיקות פוסט הוק Bonferroni הראו כי הן 5 (p <0.05) ו -10 (p <0.05) מ"ג / קבוצות קילו הראו העדפה גדולה יותר עבור צד לזווג קוק שלאחר הבדיקה לעומת בדיקה מקדימה, ואילו המלוח קבוצת -saline הראתה ללא שינוי לעומת טרום כדי שלאחר הבדיקה.

תוצאות נציג מן assay של התנועה מוצגות באיור 7 א & B באמצעות עכברים שליטים להמלטת wild-type C57BL / 6N מתוך סדרה של ניסויים נפרדים אשר פורסמה בעבר 18. לאחר הסתגלות לזריקות מלוחים במשך 3-4 ימים, עכברים שקיבלו זריקה קוקאין אחד (IP) בשעה 5, 10, 15 או 30 מ"ג / ק"ג ליום במשך שבעה ימים. לאחר תקופת נסיגה שבע או 14 יום, כל הקבוצה קבל אתגר קוק במינון המקורי, ואז אחרי עוד (משתנה) תקופות נסיגה, כמה קבלו אתגרי קוק נוספים במינונים אחרים, כפי שמוצג. לצורך הוכחת השפעת מינון קוק על locomotor סנסיטיזציה בפרסום הנוכחי, ארבע קבוצות המינון השונות שולבו בעיצוב מעורב-factorial 4 x 7, עם משתנה בתוך-נושאי היום (זריקות קוק 7 מוביל) גורמים בין-נושאים של מנה. RM ANOVA הראה אינטראקציה מובהקת בין המנה והיום (F 18,276 = 12.53, p <0.0001), מה שהתפרש במקום השפעות עיקריות משמעותיות כי נצפו גם הוא היום (F 6,276 = 18.25, p <0.0001) ומינון ( 3,46 F = 22.63, p <0.0001). Tukey של פוסט הוק ניתוחים הראו הבדלים משמעותי כולל בין 5 ל -15 מ"ג / ק"ג (p <0.0001), 5 ו -30 מ"ג / ק"ג (p <0.0001), ו -10 ו -15 מ"ג / ק"ג (p <0.01). מספר הבדלים משמעותיים נצפו כאשר הקבוצות הושוו בכל יום. ציין כאן הבדלים עבור קוקאין יום 1 (5 לעומת 30 מ"ג / ק"ג, p <0.01; 10 לעומת 30 מ"ג / ק"ג, p <0.05; 15 לעומת 30 מ"ג / ק"ג, p <0.01) יום אחד 7 קוקאין ( 5 לעומת 10 מ"ג / ק"ג, p <0.05; 5 לעומת 15 מ"ג / ק"ג, p <0.0001; 10 vs. 15 מ"ג / ק"ג, p <0.01; 15 לעומת 30 מ"ג / ק"ג, p <0.0001). איור 7C תערוכות דמויות מדומה הממחישות את ההיבטים העיקריים של סנסיטיזציה של תנועה אשר עשויים להיות שונים קבוצות הטיפול הסכום. למרות תכונות אלה מומחשים באופן עצמאי כאן, אפשר גם לצפות הבדלי הצירוף.

איור 1
איור 1. שליטת הפעלה בסיסית מד PC CPP. (א) תצוגת ברירת מחדל, סמל הפעלה פתוח (תיבה אדומה), תיבת הדו-שיח הפעלה פתוחה (הבלעה). בחר "שמות מותאמות אישית" ולהשתמש חלון תיקייה כדי לנווט לתיקיית נתונים ואת שם הפגישה. בחר תכנית מתאימה מרשימת "ההליך" נפתחת. עבור כל תיבה בשימוש, לבדוק מספר תיבה וזן מידע רלוונטי לתוך הנושא, ניסוי, ותיבות קבוצה. (ב) להציג תא טען, להתחיל סמל האות (הקופסה הכחולה), ולשלוח אותבתיבת הדו-שיח אל (הבלעה). לאחר שכל הנתונים הקאמריים הוזן, תאי בחר להיות טעון ולהנפיק להתחיל אות. צ'יימברס יופעל עכשיו על ידי פריצת קורה כדי להפעיל את הטיימר המושב ולאסוף נתונים. (ג) להציג הפגישה הסתיימה. כמו כל התא משלים את התכנית המיועדת, באזור איסוף הנתונים (קופסא הירוקה) יהפוך סטטי באזור המידע הקאמרי (התיבה כתומה) נראה תאי כמו "סגור." אנא לחץ כאן כדי לצפות בגרסה גדולה יותר של דמות זו.

איור 2
איור 2. תצורת תא CPP. (א) קו זמן מדגם הניסיון. בדיקה מקדימה ואחריו קוקאין לסירוגין יומי (אפור) הפעלות מיזוג מלוחים (לבן). מבחן פוסט מתנהל 24 שעות לאחר פגישת המיזוג האחרון. ( B) תצורת תא פתוח לשימוש בפגישות לפני ואחרי הבדיקה. שים לב דלתות בין תא נמצאות במצב מורם / הפתוח. (ג) תצורת תא סגורה לשימוש הפעלות מיזוג. שים לב דלתות ידניות הורדו, ללא גישה בין תאים. אנא לחץ כאן כדי לצפות בגרסה גדולה יותר של דמות זו.

איור 3
איור 3. חישובי עיצוב מאוזנים עבור CPP. הדוגמא מראה חישובים ומטרות כאשר איזון ציונים טרום בדיקת CPP. אנא לחץ כאן כדי לצפות בגרסה גדולה יותר של דמות זו.

ig4.jpg "/>
איור 4. של תנועת לשכת תצורה. (א) תא עליון מורכב תיבה אטומה השחורה שבתוכו מערך הקרן מתאימה בנוחות (B). תיבת ושיכון / נעל תאים בגודל צריכים להיות מלאים עם שכבה הדקה של מצעים (C) מכויל כך קורות מופצים באופן שווה לאורך ציר זמן (ד '). נא ללחוץ כאן כדי לצפות בגרסה גדולה יותר של דמות זו.

איור 5
איור 5. של תנועת לשכת המחשב מבצעת. (א) תכנית מחשב ברירת מחדל. התחל בבסיס נתוני הפעלה חדש (קופסא כחולה ו הבלעה). שנה את שם קובץ ואת הספרייה עבור כל ניסוי (תת-הבלעה כחולה). צור הפעלה חדשה (בקופסא אדומות הבלעה) עם מזהה ייחודי. מושב ערוך (הבלעה אדומה) enמידע חיה מזהה ter בלשונית הקאמרית (תיבת ירוק הבלעה) ולהקים התחל / עצור מלא עבור כל סוג הפעלה (תיבה כתומה). (ב) בחר הפסק שליטת התחילה מתאים לכל סוג פגישה. הגדר אורך מרווח 300 שניות (5 דקות bin) ו -12 מרווחים בכל שלב (1 מושב hr). הפעלות הרגלה (משמאל), תאים יופעלו להתחיל במקהלה (ידני אפשר שלב ... בסיכומו של אוניסון) וייחלו ניטור לפעילות מייד אחרי הפסקת הקורה הראשונה. הפעלות הזרקה (מימין), תאים יופעלו בנפרד (ידני אפשר שלב ... אינדיבידואלי לחצני מסך) וייחל ניטור לפעילות מייד אחרי הפסקת הקורה הראשונה. שני סוגי המפגש יסתיימו כשהזמן השלב הכולל פג לכל תא בנפרד. (ג) לאחר פגישה כבר נכתב, הפעלות הרגלה ניתנות נכתבו על ידי הלחיצה על כפתור "להתחיל הכל" (למעלה). שימו לב שלאחר Triggering, כל התאים יחכו הפסקת הקורה ראשונה שהחלה פגישה. הפעלות הזרקה, כל תא ניתן להתחיל באופן עצמאי (למטה). שים לב שלאחר מפעיל תאי פרט (בעוד חיה היא מתוך תא להזרקה), תאים יחכו להפסקת הקורה הראשונה שהחלה פגישה. אנא לחץ כאן כדי לצפות בגרסה גדולה יותר של דמות זו.

איור 6
איור 6. נציג התוצאות CPP. (למעלה) בשנת CPP, עכברים הראו העדפה משמעותית עבור תא לזווג בעבר עם קוקאין (או 5 או 10 מ"ג / ק"ג), ואילו עכברים שקיבלו זיווגים מלוחים בשני תאי לא לפתח שום העדפה. קיצורי טור מציינים הבדלים מובהקים בין קבוצות מהבר שכותרתו בהשוואה לקבוצה ציינה באותו ti הבדיקותלי להצביע. (למטה) על ידי התוויית הזמן המושקע קוקאין לעומת תאי-לזווג מלוחים במהלך טרום-בדיקות פוסט, עליות לצד לזווג קוקאין ניתן לראות בקבוצות 5 ו -10 מ"ג / ק"ג כי הם על חשבון זמן בילה בתאי שניהם המלוחים לזווג ובינוניים. לעומת זאת, לא היו הבדלים מדהימים זמן מושקע בכל תא בין בדיקות שלאחר טרום בקבוצת ביקורת המלוחה. מנתונים שהוצגו כמו ממוצע ± SEM. אנא לחץ כאן כדי לצפות בגרסה גדולה יותר של דמות זו.

איור 7
איור 7. תוצאות רגישות נציג של תנועה (א) הפסקות קרן מצטברות עבור 20 הדקות הראשונות של כל הניסוי יומי במשך ארבע מנות נפרדות:. 5, 10, 15 ו -30 מ"ג / קילו עכברי-בר ואחריו בני אותו, חצי , א-מנה כפולהאתגרים מלוחים ד, שונה מן (18). כל הקבוצות קיבלו אותה במינון אתגרים אחד מהם (10, 15, 30 מ"ג / ק"ג) או שניים (5 מ"ג / ק"ג) שבועות בעקבות חשיפת קוקאין האחרון. חלק מהקבוצות קבלו אתגרים נוספים, אשר בוצעו בתקופות נסיגה משתנות. (B) מגרש של נתונים של תנועה (הפסקות קרן) סיכם על ידי בן 5 דקות לניסויים מדי יום במהלך 15 מ"ג / ניסוי סנסיטיזציה קוקאין ק"ג. (C) איורי המראים הבדלים סנסיטיזציה של תנועה עבור שני קבוצות טיפול, כי הם מונעים בעיקר על ידי (משמאל) הבדלים בתגובת קוק חריף, (באמצע) הבדל רגיש שיעור או (מימין) הבדלי רגישות מירבית. מנתונים שהוצגו כמו ממוצע ± SEM. אנא לחץ כאן כדי לצפות בגרסה גדולה יותר של דמות זו.

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Discussion

פרוטוקול זה מדגים שיטות העדפת מקום מותנית ולרגישות של תנועה, שכל אחד מהם יכולים להיות בשימוש על ידי המעבדה הממוצעת להעריך היבטים של פלסטיות התנהגותית-סמים. כמו ברוב הבדיקות התנהגותיות, ישנם שיקולים ראויים נוספים מעבר הפרוטוקול הבסיסי. ראשית, כל הטכניקות האלה ניתן לתפוס כבעל שני שלבים, אינדוקציה והבעה. "גיוס" מכסה את הפיתוח של התנהגות-עבור CPP היא מתרחשת במהלך מיזוג, ועל רגישות זה בתקופה הראשונית של (בדרך כלל ברציפות) חשיפות התרופה. "ביטוי" עבור CPP הוא שלאחר הבדיקה, ואילו עבור סנסיטיזציה זה יכול להיות מוגדר כ אתגר תרופה אשר ניתן גם לאחר נסיגה או פשוט כחשיפת רצופים האחרונה.

כדאי לשקול מניפולציות הגבלה לאחד שלבים הללו מול שניים בצורה טובה יותר לנתח ההשפעות הפוטנציאליות שלהם. וירוסים עם יעילות מוגבלת זמני (למשל, HSV) או סמי ממשלי שיתוף / pretreatments (למשל, אגוניסטים / אנטגוניסטים) שימושית מאמצים כאלה. כאשר לוקחים גישה זו, הוא עשוי להיות רחוק יותר צורך להשתמש בפרוטוקולים דחוסים כך שלב מסוים יהיה בקנה אחד טוב יותר עם ביטוי ויראלי. לקבלת CPP, אפשר לנהל שיטת מיזוג יומית, כפי שתארו קודם לכן 37. במיוחד עבור סנסיטיזציה של תנועה, שינויים תקופת הנסיגה בין אינדוקציה ביטוי בשילוב עם שיטות אלה, עשויים לחשוף תהליכים המעורבים תחזוקה או יציבות של התנהגות. בנוסף, גישות כאלה יכולים לשמש כדי לחקור את התופעה-סנסיטיזציה הצלב, שבו התנהגות רגישה מושרה באמצעות תרופה אחת אבל יכולה לבוא לידי ביטוי על ידי חשיפה לתרופה אחרת. מאז-סנסיטיזציה הצלב אינה מתרחשת בין כל תרופות רגישותם של ההתעללות, עלול לעורר התנהגות רגישה שונות במקצת מהמקור, והוא לא בהכרח דו-כיווני עבורכל קבוצת נתונה של תרופות, הבדיקה שלה עשויה להציע הזדמנויות ייחודיות להבין היכן וכיצד שונה תרופות משפיע על מוח פלסטי ותפקוד.

פרשנות נכונה של CPP, בפרט, תלויה פוסלים הסברים חלופיים של ממצאים. נתונים שנוצרו במנגנון תלת תאיים יש לבחון בכובד ראש נוסף טרם הגדרתך חיסור של זמן מושקע בצד לזווג המלוח מהצד לזווג קוק שלאחר הבדיקה כהעדפה, מאז עליית העדפה בצד לזווג התרופה תוצאות אך ורק מירידת המשך הזמן בתא המלוח לזווג אינן כשירות סביר פרשנות כזו. התא באמצע מאפשר תוצאה זו מאז העכבר עשוי לשנות את משך זמן שם במקום של חדר הסמים לזווג. כמו כן ניתן לראות זמן גדל בילה בצד לזווג תרופה על חשבון התא למרכז דווקא של צד לזווג המלוח; ניתן לטעון, תוצאה זה עדיין עשויה להיות מקובל interpreטד כגידול העדפת תרופה. הכללת התא שלישי מספקת תא ניטראלי המאפשר מיקום משוחד של חיה במהלך פגישות לפני ואחרי בדיקה 41. למרות שימושי לטיפול הטיות מיקום ראשוניים תורמות ציוני במבחנים-יום, התא השלישי אינו נדרש עבור מיזוג. עיצובים אלטרנטיביים CPP כי תכונת שני תאים ברורים או תא בודד עם תצורות גירוי מגוונות הם דנו במקום אחר 41-42.

כל גירעון העדפת מקום עבור תרופה צריך להיות מלווה גם ערכות של שתי היכולת ללמוד עמותות קשר ותפקוד גמול כללי. ישנן מספר ההתאמות שניתן לעשות כדי הפרדיגמה CPP שיכול עוזרו בפירוש העדפה שינתה, כולל שינוי בבולטות של UCS (סמים) על ידי הגדלה (או להקטין) את מספר הזוגות או באמצעות תרופה גבוהה או נמוכה מָנָה. CPP יכול להתבצע באמצעות FO טעיםod (למשל, שומן גבוה, סוכרוז) או אינטראקציות חברתיות להעריך אם השינוי שנצפה הוא ספציפי לתרופה או רלוונטי תגמולים טבעיים; הלא CPP גישות שימושיות למטרה זו כוללת גירוי עצמי תוך גולגולתי, העדפת סוכרוז, ו / או משימות גישת תיאבון. עם זאת, כל האפשרויות האלה להשתנות ביכולתם מספקת כדי לענות על השאלה הרצויה. מזון מבוסס CPP עשוי להיות מועיל במיוחד מאז תגובות נורמליות להפגין יכולת ללמוד להקים אגודות קשר מתאימים עם גמול טבעי. פקדים נוספים להערכת יכולת למידה כוללים משימות המסתמכות על למידה / זיכרון קשר (מיזוג פחד קשר ואת הרו"ח). יש רו"ח היתרון של מתנהל בדומה CPP, לעתים קרובות באותו החדר, החלפת תרופת התיאבון עם חוויה מרתיעה (למשל, הזרקת ליתיום כלוריד). בעלי חיים המראים גירעונות CPP, אבל נורמלי רו"ח, להפגין יכולת ליצירת עמותת קשר מתאימהים, אשר מציין כי ליקויי CPP התרופה מתייחסים ככל הנראה לתגמל (תרופה ספציפית או אחרת). זהירות אחת עבור רו"ח באמצעות ליתיום כלוריד שיש לשקול הוא האם התרופה זו היא טיפול ידוע לכל מצב שעלול להיות מודל על ידי חיות הניסוי. לדוגמה, טיפול ליתיום הוכח לנטרל גירעונות למידה במודל עכבר של ה- X השביר 43, אשר היה לבלבל שיטת שליטה זו.

בנוסף הפרדיגמה CPP הקלסית, יש רחבות פוטנציאל משתמשים עשויים למצוא בם, כגון הכחדת בדיקות של עמותת סמים בהקשר למדה כינון שלהם לאחר CPP. תגובות אוויר (CRS), שהוקמה פעם, יכולות להישמר במשך תקופות ממושכות 19,20 כשבעלי החיים נותרים באין מפריע. למרות ההתמדה היחסית של CR, זה אפשר לכבות באופן יעיל על ידי מצגות חוזרות ונשנות של CS (בהקשר) בהעדר של UCS (סמים). שתי שיטות הכחדת CPP מופיעים ליט erature: חשיפת בדיקה חזרה ללא הזרקה 21 או מחדש זיווגים של צד הסמים לזווג בעבר עם רכב 22. תהליכי הכחדה לשקף למידה חדשה, בניגוד "במחיקת" של מיזוג המקורי, רעיון הפגינו בצורה יעילה באמצעות "השבת המצב לקדמותו." החזרה מופעלת באופן קלאסי על ידי מחדש חשיפה UCS, המייצר ההתאוששות של CR. בהקשר של CPP, זריקה אחת של תרופת האימון תגרום חיות להראות העדפת מקום. מעניין רמזים סמים רבים שאינם אימון יכול גם לייצר השבה של CPP, כולל תחול עם תרופות חלופיות 22 וכן מגוון של לחצים 23-26. ניסויי הכחדה שבים הם בעלי העניין מיוחדים בתחום ההתמכרות לסמים כמודלים של טיפול תרופתי ו להרע. התערבויות המשפרות את קצב ההכחדה ו / או להפחית את עוצמת הכינון יכולות להיות מטרות ערך עבור pharmacotherapies אדם.

s = "jove_content"> לעומת CPP, רגישות תנועה נחשבת הרבה פחות תלוי למידה, ולכן, יכולה להיות שיטה מועדפת להערכת פלסטיות-סמים במודלים של מכרסמים עם קשיים הקוגניטיביים ידועים. עם זאת, בהחלט יש עדויות שלפחות בחלק פרדיגמות רגישות, עמותת סמים בהקשר למדה מפתחת ותורמת בתגובה הרגישה. ראיות תומכות כולל רגישות גדולה יותר נצפתה כאשר התרופה ניתנת בסביבת בדיקות מחוץ כלוב הביתה, ולפעמים, חוסר רגישות לגמרי כאשר מינון מתרחשת כלוב בבית (למשל, 27-29). יש לציין עם זאת, רגישות-עצמאי בהקשר הודגמה בבירור במחקרים אחרים (למשל, 30-32). פרטים ניסיוניים שעשוי לתרום אם עלייה תלוית ההקשר רגיש ניתן לצפות כוללים מינון תרופה, משך חשיפה, אם כל קבוצה חייב להיות מועברים על o המבחןסנסיטיזציה f והיבטים מסוימים של חשיפה טרום לתא הבדיקה; עם זאת, הפרטים האישיים יישארו במקומות ברור. שיטה אחת לקבוע את התרומה של סנסיטיזציה קשר היא לתת אתגר מלוח הבאות תרופה סנסיטיזציה 33. השימוש של הפרדיגמה תאר ממזער את התרומה של סנסיטיזציה תלוי קשר כפי שמעיד הפעלה של תנועה מעט מאוד מחקרים קודמים על אתגר מלוח. תרומת הקשר לרגישות נבדקה בכמה ניירות, לעיתים קרובות, כולל דיונים של התנהגויות למעט פעילות של תנועה 34.

כדי להגביל זיהום של הפעלה-סמים ולרגישות עם התנועה מגרה השפעות מושרות על ידי סביבת רומן, עכברים והתאקלמו זריקות מלוחות במשך שלושה עד ארבעה ימים בתחילה כל ניסוי. כפי שניתן לראות בתרשים 7, עכברים בדרך כלל להראות תנועה מופחתת בין ראשוןיום הסתגלות מלוח אחרון. בנוסף, העכברים הם רגועים יותר במידה ניכרות, קלים יותר לטפל ולהזריק ידי החשיפה המלוחה האחרונה. עבודות קודמות בחנו זנים מרובים גנוטיפים של עכברים באמצעות הפרדיגמה הזו ולא רואה שונה רבה בפעילות הסתגלות מלוחה לרוחבם; עם זאת, אפשר לצפות מדי פעם מאוד פנוטיפים היפראקטיביות חזקים הקשורים גנוטיפים מסוימים שאינם להתגבר באמצעות שיטה זו. במקרים אלה, זה עשוי להיות רצוי לבצע בימי הסתגלות מלוחים כמה (עד מישורי תנועה בקבוצה היפראקטיבי), ולאחר מכן לנרמל את הקבוצה היפראקטיבי לקבוצת ביקורת תוך שימוש בנתוני יום ההזרקה המלוחה האחרון. אמנם לא אידיאלי, זה מאפשר בחינה השוואתית סביר יותר של השפעות התרופות על תנועה בין הקבוצות הללו. אפשרויות אחרות שעשויות להרגיע היפראקטיביות קיצונית בטווח הארוך היא להרחיב את אורך המשפט התרגלות לפני הזריקה כל יום על ידי אחד עד 5 שעות, ו / או להשתמש ניסויים הזרקת יותר (2 - 4 שעות) דואריום אח.

ישנם שיקולים נוספים שחשובים הפרשנות של התנהגות של תנועה. כמו באיור 7C, הבדלים בין קבוצות נצפו עשויות להיות מונעות בעיקר על ידי הבדלים בתגובת התנועה החריפה, שיעור רגישות על פני ימים, מגבלה המקסימלי של רגישות, או שילוב כלשהו של גורמים אלה. ניתוח התרומות של גורמים אלה בנפרד יכול להיות מועיל. לשם כך, תגובה של התנועה החריפה ניתן לנתח סטטיסטי בלבד. ואז שיעור סנסיטיזציה ניתן להעריך באמצעות תוכנה שיודעת עקומה ראוי ולא תהליך נורמליזצית שיעור מנכת הבדלי תנועה חריפים. רגישות מקסימלי Altered בדרך כלל מתגלה בתוך RM ANOVA במהלך ימי חשיפה לסמים ברציפות, שבו ומעקב יום אחר יום השוואות פוסט הוק הן משמעותיות על ימים לאחר תגובות קבוצה יש plateaued. אחד צריך להיות מודע כי רגישות מקסימלית לא ניתן לקבועעבור כל קבוצה מקיימת תגובה של תנועה ליניארית על פני ימי חשיפה לסמים, כגון מצטייר באיור 7C (באמצע; הקו כחול). במקרה כזה, חשיפה לסמים ניתן להארכה כדי לנסות לקבוע רגישות מירבית.

לבסוף, זה בדרך כלל טוב ביותר להשוות רגישות בין קבוצות באמצעות לפחות שני מנות סמים המבוצעים בארגון קבוצות נפרדות של בעלי החיים. הבדלים בכל ההיבטים הנ"ל של הפעלה של תנועה, ב מנה אחת או שניהם, יש להשתמש כדי להנחות בדיקות נוספות כדי לשלול הסברים אחרים, כוללים שינויים בהתפתחות ונדושה. חשיפה חוזרת לתרופות מסוימות, כגון קוק אמפטמין, לא רק מייצרת תנועה רגישה באופן תלוי מינון, אלא גם מגרה מתחרה התנהגויות סטריאוטיפיות. stereotypies אלה הופכים גלוי במיוחד במינונים גבוהים, כך רגיש תנועה הוא לעתים קרובות באופן חלקי או מטושטש לחלוטין, אבל גילה שוב על ממשל שלמינון נמוך יותר. מסיבה זו, "גירעון" ב סנסיטיזציה של תנועה בקבוצה אחת ניסיוני בפועל עשוי לשקף רגישות מוגברת להתפתחות-הסמים של stereotypies. ההערכה ונדושה יכולה להיות מאתגרת, אבל יש מספר הסולמות פרסמו 35 וגישות אחרות 36. שימוש בקנה מידה היא בכלל ונדוש והערכת התנהגויות מסוימות מומלץ, כפי שפורסם בעבר 18.

לסיכום, מספר בדיקות התנהגותיות פותחו במודלים של בעלי חיים בניסיון לנתח את המורכבות של התמכרות אדם. העדפה ולרגישות של תנועה במקום אלפה שתי בדיקות בסיסיות בשימוש נרחב מכרסמים, בהתאמה, הם עלולים להיות שימושיים במיוחד בהערכת תגמול סמים הקשורים מוקדם הפלסטיות המתמשכת הנגרמת על ידי שימוש חוזר. ישנם מספר שיקולים לתכנון והפרשנות של כל סוג הלימוד, מה שהופך אותו worthwhile לשקול את מטרות ניסוי וספרות קודמת בזהירות בעת תכנון הערכות אלה.

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Disclosures

החוקרים מצהירים כי אין להם אינטרסים כלכליים מתחרים.

Acknowledgments

המחברים מודים קארן דיאץ ושרי בירנבאום עבור קלט קודם על שיקולי תכנון התנהגותי ולורן Peca לעזרה עם בדיקות התנהגותיות. המחברים גם מכירים את התמיכה הנדיבה של קרן סימונס (מענק יוזמת לחקר האוטיזם סימונס קרן כדי CWC), NIDA (DA008277, DA027664, ו DA030590 כדי CWC, F32DA027265 כדי LNS ו F32DA036319 כדי RDP), קרן המחקר FRAXA ואלינור ומיילס תכנית מלגות שור (תמיכת המילגה LNS), ואת תכנית מלגות ג'ון Kaneb (תמיכת המילגה MT).

Materials

Name Company Catalog Number Comments
Cocaine Hydrochloride USP Mallinckrodt Pharmaceuticals 0406-1520 Purchase and use (Schedule II controlled substance) for research purposes requires compliance and licensure according to state and federal law. 
Conditioned Place Preference,  Three Compartment Apparatus with Manual Doors and Lights for Mouse Med-Associates Inc. MED-CPP-MS & MED-CPP-3013 Our laboratory has used these boxes; however, many alternative boxes are available & acceptable.
PAS-Home Cage Activity Monitoring Photobeam Arrays San Diego Instruments 2325-0223 & 7500-0221 Our lab houses these arrays inside of custom built chambers, as described in the text.  There are alternatives available.
Disposable Sani-Cloth disenfecting wipes PDI 13872

DOWNLOAD MATERIALS LIST

References

  1. National Institute on Drug Abuse. Drug Facts: Understanding Drug Abuse and Addiction. www.drugabuse.gov. , Available from: http://www.drugabuse.gov/publications/drugfacts/understanding-drug-abuse-addiction (2012).
  2. Kasanetz, F., et al. Transition to addiction is associated with a persistent impairment in synaptic plasticity. Science. 328 (5986), 1709-1712 (2010).
  3. Beach, H. D. Morphine addiction in rats. Can J Psychol. 11 (2), 104-112 (1957).
  4. van der Kooy, D. Chapter 13, Place Conditioning: A simple and effective method for assessing the motivational properties of drugs. Methods of Assessing the Reinforcing Properties of Abused Drugs. Bozarth, M. A. , 229-240 (2012).
  5. Carlezon, W. A. Place conditioning to study drug reward and aversion. Methods Mol Med. 84, 243-249 (2003).
  6. Prus, A. J., James, J. R., Rosecrans, J. A. Chapter 4, Conditioned Place Preference. Methods of Behavior Analysis in Neuroscience. Buccafusco, J. J. , (2009).
  7. Tzschentke, T. M. Measuring reward with the conditioned place preference (CPP) paradigm: update of the last decade. Addict Biol. 12 (3-4), 227-462 (2007).
  8. Aguilar, M. A., Rodrìguez-Arias, M., Miñarro, J. Neurobiological mechanisms of the reinstatement of drug-conditioned place preference. Brain Res Rev. 59 (2), 253-277 (2009).
  9. Feduccia, A. A., Duvauchelle, C. L. Novel apparatus and method for drug reinforcement. JoVE. (42), (2010).
  10. Brabant, C., Quertemont, E., Tirelli, E. Influence of the dose and the number of drug-context pairings on the magnitude and the long-lasting retention of cocaine-induced conditioned place preference in C57BL/6J mice. Psychopharmacology. 180 (1), 33-40 (2005).
  11. Pliakas, A. M., Carlson, R. R., Neve, R. L., Konradi, C., Nestler, E. J., Carlezon, W. A. Altered responsiveness to cocaine and increased immobility in the forced swim test associated with elevated cAMP response element-binding protein expression in nucleus accumbens. J Neurosci. 21 (18), 7397-7403 (2001).
  12. Knackstedt, L. A., Samimi, M. M., Ettenberg, A. Evidence for opponent-process actions of intravenous cocaine and cocaethylene. Pharmacol Biochem Behav. 72 (4), 931-936 (2002).
  13. Post, R. M., Rose, H. Increasing effects of repetitive cocaine administration in the rat. Nature. 260 (5553), 731-732 (1976).
  14. Marin, M. T., Cruz, F. C., Planeta, C. S. Cocaine-induced behavioral sensitization in adolescent rats endures until adulthood: lack of association with GluR1 and NR1 glutamate receptor subunits and tyrosine hydroxylase. Pharmacol Biochem Behav. 91 (1), 109-114 (2008).
  15. Henry, D. J., White, F. J. The persistence of behavioral sensitization to cocaine parallels enhanced inhibition of nucleus accumbens neurons. J Neurosci. 15 (9), 6287-6299 (1995).
  16. Hope, B. T., Simmons, D. E., Mitchell, T. B., Kreuter, J. D., Mattson, B. J. Cocaine-induced locomotor activity and Fos expression in nucleus accumbens are sensitized for 6 after repeated cocaine administration outside the home cage. Eur J Neurosci. 24 (3), 867-875 (2006).
  17. Shuster, L., Yu, G., Bates, A. Sensitization to cocaine stimulation in mice. Psychopharmacology. 52 (2), 185-190 (1977).
  18. Smith, L. N., Jedynak, J. P., Fontenot, M. R., Hale, C. R., Dietz, K. C., Taniguchi, M., Thomas, F. S., Zirlin, B. C., Birnbaum, S. G., Huber, K. M., Thomas, M. J., Cowan, C. W. Fragile X mental retardation protein regulates synaptic and behavioral plasticity to repeated cocaine administration. Neuron. 82 (3), 645-658 (2014).
  19. Mueller, D., Stewart, J. Cocaine-induced conditioned place preference: reinstatement by priming injections of cocaine after extinction. Behav Brain Res. 115 (1), 39-47 (2000).
  20. Sakoori, K., Murphy, N. P. Maintenance of conditioned place preferences and aversion in C57BL6 mice: effects of repeated and drug state testing. Behav Brain Res. 160 (1), 34-43 (2005).
  21. Bardo, M. T., Neisewander, J. L., Miller, J. S. Repeated testing attenuates conditioned place preference with cocaine. Psychopharmacologia. 89 (2), 239-243 (1986).
  22. Itzhak, Y., Martin, J. L. Cocaine-induced conditioned place preference in mice: induction, extinction and reinstatement by related psychostimulants. Neuropsychopharmacology. 26 (1), 130-134 (2002).
  23. Kreibich, A. S., Blendy, J. A. cAMP response element-binding protein is required for stress but not cocaine-induced reinstatement. J Neurosci. 24 (30), 6686-6692 (2004).
  24. Briand, L. A., Blendy, J. A. Not all stress is equal: CREB is not necessary for restraint stress reinstatement of cocaine-conditioned reward. Behav Brain Res. 246, 63-68 (2013).
  25. Redila, V. A., Chavkin, C. Stress-induced reinstatement of cocaine seeking is mediated by the kappa opioid system. Psychopharmacology. 200 (1), 59-70 (2008).
  26. Do Couto, R. ibeiro, Aguilar, B., A, M., Manzanedo, C., Rodriguez-Arias, M., Armario, A., Minarro, J. Social stress is as effective as physical stress in reinstating morphine-induced place preference in mice. Psychopharmacology. 185 (4), 459-470 (2006).
  27. Post, R. M., Lockfeld, A., Squillace, K. M., Contel, N. R. Drug-environment interaction: context dependency of cocaine-induced behavioral sensitization. Life sciences. 28 (7), 755-760 (1981).
  28. Badiani, A., Browman, K. E., Robinson, T. E. Influence of novel versus home environments on sensitization to the psychomotor stimulant effects of cocaine and amphetamine. Brain Res. 674 (2), 291-298 (1995).
  29. Li, Y., Acerbo, M. J., Robinson, T. E. The induction of behavioural sensitization is associated with cocaine-induced structural plasticity in the core (but not shell) of the nucleus accumbens. Eur J Neurosci. 20 (6), 1647-1654 (2004).
  30. Partridge, B., Schenk, S. Context-independent sensitization to the locomotor-activating effects of cocaine. Pharmacol Biochem Behav. 63 (4), 543-548 (1999).
  31. Le Foll, B., Diaz, J., Sokoloff, P. Increased dopamine D3 receptor expression accompanying behavioral sensitization to nicotine in rats. Synapse. 47 (3), 176-183 (2003).
  32. Heidbreder, C. A., Babovic-Vuksanovic, D., Shoaib, M., Shippenberg, T. S. Development of behavioral sensitization to cocaine: influence of kappa opioid receptor agonists. J Pharmacol Exp Ther. 275 (1), 150-163 (1995).
  33. Tirelli, E., Michel, A., Brabant, C. Cocaine-conditioned activity persists for a longer time than cocaine-sensitized activity in mice: implications for the theories using Pavlovian excitatory conditioning to explain the context-specificity of sensitization. Behav Brain Res. 165 (1), 18-25 (2005).
  34. Anagnostaras, S. G., Schallert, T., Robinson, T. E. Memory processes governing amphetamine-induced psychomotor sensitization. Neuropsychopharmacology. 26 (6), 703-715 (2002).
  35. Spangler, R., Zhou, Y., Schlussman, S. D., Ho, A., Kreek, M. J. Behavioral stereotypies induced by 'binge' cocaine administration are independent of drug-induced increases in corticosterone levels. Behav Brain Res. 86 (2), 201-204 (1997).
  36. Kelley, A. E. Measurement of rodent stereotyped behavior. Curr Protoc Neurosci. Chapter 8, Unit 8.8 (2001).
  37. Taniguchi, M., Carreira, M. B., Smith, L. N., Zirlin, B. C., Neve, R. L., Cowan, C. W. Histone deacetylase 5 limits cocaine reward through cAMP-induced nuclear import. Neuron. 73 (1), 108-120 (2012).
  38. Zangen, A., Solinas, M., Ikemoto, S., Goldberg, S. R., Wise, R. A. Two brain sites for cannabinoid reward. J Neurosci. 26 (18), 4901-4907 (2006).
  39. Huston, J. P., de Souza Silva, M. A., Topic, B., Müller, C. P. What's conditioned in conditioned place preference. Trends Pharmacol Sci. 34 (3), 162-166 (2013).
  40. Schechter, M. D., Calcagnetti, D. J. Trends in place preference conditioning with a cross-indexed bibliography; 1957-1991. Neurosci Biobehav Rev. 17, 21-41 (1993).
  41. Bevins, R. A., Cunningham, C. L. Chapter 9, Place Conditioning: A Methodological Analysis. Tasks and Techiniques: A sampling of methodologies for the investigation of animal learning, behavior, and cognition. Anderson, M. , 99-110 (2006).
  42. Hitchcock, L. N., Cunningham, C. L., Lattal, K. M. Cue configuration effects in the acquisition of a cocaine-induced place preference. Behav Neurosci. 128 (2), 217-227 (2014).
  43. Liu, Z. -H., Chuang, D. M., Smith, C. B. Lithium amerliorates phenotypic deficits in a mouse model of fragile X syndrome. Int J Neuropscyhopharmacol. 14 (5), 618-630 (2011).
  44. Bardo, M. T., Rowlett, J. K., Harris, M. J. Conditioned place preference using opiate and stimulant drugs: A meta-analysis. Neurosci Biobehav Rev. 19 (1), 39-51 (1995).

Tags

התנהגות גיליון 108 קוק רגישות של תנועה העדפת מקום מותנית עכברים psychostimulant
הערכת רגישות התנהגות נגרמת קוק העדפות מקום אלפו עכברים
Play Video
PDF DOI DOWNLOAD MATERIALS LIST

Cite this Article

Smith, L. N., Penrod, R. D.,… More

Smith, L. N., Penrod, R. D., Taniguchi, M., Cowan, C. W. Assessment of Cocaine-induced Behavioral Sensitization and Conditioned Place Preference in Mice. J. Vis. Exp. (108), e53107, doi:10.3791/53107 (2016).

Less
Copy Citation Download Citation Reprints and Permissions
View Video

Get cutting-edge science videos from JoVE sent straight to your inbox every month.

Waiting X
Simple Hit Counter