Summary
Vi beskriver en enkel og enkel protokoll for å måle antistoff avhengige forbedring av infeksjon av Zika virus rekonvalesent serum ved bruk av Dengue virus Reporter viruspartikler.
Abstract
Antistoff avhengige forbedring av infeksjon har vist seg å spille en viktig rolle i Dengue virus patogenesen. Tradisjonelle analyser som måler kapasiteten i antistoffer eller serum å forbedre infeksjon i utillatelig cellelinjer avhengig med viral produksjon i media etterfulgt av plakk analyser for å kvantifisere infeksjon. Disse analyser har nylig undersøkt Dengue virus (DENV) infeksjon i cellelinjer med fluorescently merket antistoffer. Begge disse metodene har begrensninger som begrenser den utbredte bruken av disse teknikkene. Her beskriver vi en enkel i vitro analysen ved hjelp av Dengue virus reporter virus partikler (RVP'ene) som uttrykker grønne fluorescerende protein og K562 celler å undersøke antistoff avhengige ekstrautstyr (ADE) DENV infeksjon bruker serum som ble Hentet fra rhesus aper 16 uker etter Zika viruset (ZIKV). Denne teknikken er pålitelig, innebærer minimal manipulering av celler, involverer ikke bruk av live replikering kompetent virus og kan utføres i en høy gjennomstrømning format å få en kvantitativ avlesning ved hjelp av flowcytometri. I tillegg kan denne analysen enkelt tilpasses for å undersøke antistoff avhengige forbedring (ADE) av andre flavivirus infeksjoner som gulfeber virus (YFV), japansk Equine Encefalitt virus (JEEV), West Nile virus (WNV) etc. hvor RVP'ene er tilgjengelig. Enkel å sette opp analysen, analysere data, og tolke resultatene gjør det svært mottakelig for de fleste laboratorium innstillinger.
Introduction
Antistoff avhengige ekstrautstyr (ADE) infeksjon er en prosess der delvis cross-reactive antistoff svar indusert av en serotype virus forbedrer opptaket av en annen serotype av viruset, fører til økt viral replikasjon og viremia. ADE har blitt grundig dokumentert i Dengue virus (DENV) infeksjoner der fire store serotyper er utbredt. Et delsett av pasienter er ADE forbundet med denguefeber hemoragisk (DHF). Vi har nylig vist at Zika-smitte (ZIKV) indusert betydelig høye nivåer av DENV cross-reactive antistoff svar som forårsaket ADE av DENV i vitro og trolig bidratt til styrking av DENV viremia i vivo1 , 2. antistoff avhengige ekstrautstyr analyser er et verdifullt verktøy å vurdere kapasitet av antistoffer til å forbedre sekundær infeksjon med i slekt viruser og gi verdifull innsikt i patogenesen av flavivirus infeksjoner og informere den utvikling av vaksiner.
Analysen beskrevet bruker her DENV RVP'ene sammen med K562 celler som er normalt utillatelig til infeksjon. RVP'ene er strukturelt intakt replikering inkompetente DENV virus partikler som kode en sub-genomisk grønne fluorescerende protein (GFP) replicon som uttrykkes etter én enkelt runde med replikering3. Som sådan, celler som blir smittet med RVP'ene fluoresce grønn og kan lett oppdaget flowcytometri eller mikroskopi. RVP'er brukes i denne analysen var oppnådd fra kommersielle kilder. De kan imidlertid være mot andre virus som brukes i analysen beskrevet i dette manuskriptet. I mellomtiden er K562 cellene en FcγIII-reseptor-uttrykke leukemi cellen linje som binder til Fc regionen antistoffer og bli smittet i nærvær av sub nøytralisere konsentrasjoner av antistoff4,5.
ADE analyser har vært mye brukt i studier undersøker risikofaktorer for alvorlig dengue og avgrense mekanismer for i vitro ADE6,7,8. ADE analysen beskrevet her kan raskt og enkelt brukes til å bestemme kapasiteten av serum å forbedre i vitro infeksjon med RVP'ene og flow cytometri, sammenlignet med andre analyser brukes i dag, som krever enten fastsettelse av plakk dannes enheter (pfu) i Vero celler og antistoff farging av infiserte celler6,7,8,9,10,11, begge er tidkrevende og Ap intensiv.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Protocol
Serumprøver brukes til å vise protokollen beskrevet her Hentet fra rhesus aper som ligger og stelt i samsvar med lokale, statlige og føderale politikk i en forening for vurdering og akkreditering av laboratoriet Animal Care International (AAALAC)-akkreditert anlegget. Alle dyreforsøk blir gjennomgått og godkjent av institusjonelle Animal Care og bruk komité og prøver ble kjøpt gjennom en vev deler protokollen.
1. dag 1
Merk: Utføre alle trinnene som beskrives nedenfor i et sterilt laminær strømning biosikkerhet CAB brukes for vev kultur i et BSL-2 laboratorium.
- Tine serumprøver ved romtemperatur og overføre 100 µL av hver serum prøve slik sterilt. Varme Deaktiver i 30 min ved 56° C i et vannbad eller en temperatur-justerbar thermomixer. Lage 10 ganger føljetong fortynninger av serum utvalget spenner fra 1:1 til 1:1,000 bruker kaldt RPMI-10 (RPMI med 10% fosterets bovin serum).
- Overfør 10 µL av serielt utvannet serum prøve hver brønn av et sterilt 96-brønns V-bunn plater. Inkluder to sett av kontroll, RPMI-10 med RVP'ene og uten serum prøve og RPMI-10 bare uten RVP'ene og uten serum prøven. Definere hver serum eksempel og RPMI-10 kontroller i triplicates.
- Fjerne Dengue-1, 2, 3 og 4 RVP'ene fra-80 ° C fryser og tine dem i et 37 ° C vannbad. Overføre tinte RVP'er umiddelbart til is. Få ca 170 µL RVP'ene for hver serum prøve (10 µL av RVP'ene x 3 for hver serum fortynning (1:1, 1:10, 1: 100, 1:1, 000) og 10 µL av RVP'ene x 3 for hver av de RPMI-10 med RVP bare kontrollere brønner).
- Pipetter 10 µL av RVP'ene i hver brønn av 96-brønns V Bunn platen inneholder serum prøven og til RPMI-10 med RVP'ene (ingen serum) kontroll brønner. Ikke Legg RVP'ene til RPMI-10 bare (ingen serum prøve og ingen RVP) brønner. Mix grundig av pipettering opp og ned 5-10 ganger. Legge til 10 µL kaldt RPMI-10 i stedet for RVP'ene til hver kaldt RPMI-10 bare (ingen serum prøve og ingen RVP) kontrollere brønner.
- Overføre 96-brønns V-bunnplaten til en inkubator og ruge platen i 1 time ved 37 ° C i nærvær av 5% CO2. Mens 96-brønns V-bunnplaten er incubating, rengjøre biosikkerhet kabinett med 70% etanol og kjøre UV-lyset i 15 min.
- Fjerne en fullt confluent MT75 kolbe K562 celler settefiskanlegg, bland cellene godt med et sterilt 5 mL Pipetter og overføre 5 mL celleområde til et sterilt 15 mL konisk rør.
Merk: K562 cellene er opprettholdt i RPMI-10 og subcultured på 1 x 106/mL. - Teller antall celler ved å fjerne 10 µL celler fra sterilt 15 mL konisk røret og bland med 10 µL tryphan blå. Telle celler ved hjelp av en hemocytometer til å bestemme antall celler i 15 mL konisk røret.
- Sentrifuge 15 mL konisk med celler ~ 1200 x g i 10 minutter, Dekanter nedbryting og resuspend cellene i varm RPMI-10 i en konsentrasjon av 80 000 celler/30 µL av media (2,66 x 106 celler /mL).
- Fjerne 96-brønns V-bunnplaten settefiskanlegg (trinn 1.6) overføre 30 µL av K562 celler i hver brønn i 96-brønnen V-bunnplaten og bland godt av pipettering opp og ned 5-10 ganger. Overføre 96-brønns V-bunnplaten til en inkubator og ruge platen for 1 hr på 37 ° C i nærvær av 5% CO2.
- Etter rugende 1t, fjerne 96-brønns V-bunnplaten fra inkubator og sentrifuger ~ 1200 x g i 5 minutter. Etter sentrifugering, Dekanter media fra brønnene ved å snu platen opp ned i en beholder som inneholder 10% blekemiddel.
- Vask cellene i hver brønn ved resuspending dem i 125 µL av varm RPMI-10, bland godt med en pipette, og sentrifuge plate ~ 1200 x g for 5 min. Decant media ved å snu platen opp ned i en beholder som inneholder 10% blekemiddel. Gjenta dette trinnet for vask to ganger.
- Etter vasking, legger 100 µL varmt RPMI-10 hver Vel, blande opp og ned med Pipetter og ruge platen i 48 timer på 37 ° C i nærvær av 5% CO2.
2. dag 3
- Fjern 96-brønns V Bunn platen inneholder 100 µL av celler og media/vel settefiskanlegg og flytte den til en biosafety kabinett. Bruke en flerkanals pipette, blanding innholdet for hver vel og overføre cellene og til en 96 vel U-bunn plate eller å pre merket 5 mL polypropylen rør.
- Skyll hver brønn i 96-brønnen V Bunn platen med 100 µL av 1% Paraformaldehyde (PFA) i 1 x fosfat bufret saltvann (PBS) og overføring til de respektive brønnene i 96 vel U-bunnplaten eller merket 5 mL polypropylen rør fra trinn 2.1 å gi en endelig konsentrasjon på 0,5% PFA/godt eller rør. Blander grundig med en flerkanals pipette, dekke platen med aluminiumsfolie og la det sitte i inkubator for 30 minutter å fikse cellene.
- Klargjøre flyt cytometer (se Tabell for materiale for eksempel) ved å kjøre unstained kvinne K562 celler for å kalibrere siden og frem punktdiagram med fluorescens innstillingene. Bare fluorescens kanalen kreves er FL1, som GFP er den eneste fluorescensen slippes ut fra cellene. Erverve ~ 30, 000-50.000 celler fra hver prøve.
Merk: Noen flyt cytometer kan lese en enkelt fluorescens kan brukes for å skaffe data, som cellene infisert med RVP'ene vil bare avgir grønne fluorescens av GFP, og ingen andre fluorescens kanal er nødvendig.
3. dataanalyse
-
Analysere data ble anskaffet flyt cytometer bruk av flyt cytometri analyseprogramvare (se tabell for materiale).
- Sett den første porten basert på FSC-A (fremover XY-området) vs FSC-H (fremover XY-høyde) inkludere enkeltceller og ekskludere auto-fluorescerende doublets analyse12. Deretter gate singlet-gated cellene basert på SSC-A (siden XY-området) vs FSC-A for å utelate alle autofluorescent partikler.
- Analysere SSC-A vs FSC-en gated celler for uttrykket av GFP basert på SSC-A vs GFP-A. Bestemme andelen GFP + celler for hver fortynning av prøvene serum og kontroll ved å angi en port rundt GFP + celler.
- Bestemme den gjennomsnittlige prosentandelen av GFP + celler for hver serum eksempel fortynning og kontroll brønner ved å dele den totale prosenten av GFP + celler i tre eksemplarer brønnene 3.
- Beregne fold forbedring av smitte ved å dele den gjennomsnittlige prosentandelen av GFP + celler i serumprøver for hver fortynning delt den gjennomsnittlige prosentandelen av GFP + celler i RPMI-10 med RVP'ene (ingen serum utvalget) kontroll brønner.
- Graf fold forbedring (y-aksen) versus fortynning (x-aksen), og utføre statistisk analyse bruker ANOVA etterfulgt av Tukey's post-hoc test for flere sammenligninger.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Representative Results
Sera fra 4 rhesus aper var samlet 16 uker etter smitte med ZIKV og testet for deres potensial til å øke DENV-1, 2, 3 og 4 infeksjon i K562 celler. Dyrene hadde topp viremia ~ 1 x 105 eksemplarer av ZIKV RNA/mL plasma dag 3 etter infeksjon som falt til nivåer som var under grensen for påvisning av 7 dager etter smitte. Ingen viremia ble oppdaget i plasma på 16 uker etter smitte. Deretter RVP analysen ble utført og de innsamlede dataene ble analysert, som beskrevet i over protokollen.
Gating strategien som brukes til å identifisere GFP + celler vises i figur 1. Den første porten ble satt til å utelukke autofluorescent doublets og bare inkludere enkeltceller basert på FSC-A vs FSC-H. Neste handlingen viser bare celler fra enkelt celle gate; der en gate var trukket basert på SSC-A vs FSC-A for å utelate alle autofluorescent partikler. Disse gated celler ble deretter vist i en tredje tomt basert på SSC-A vs FL1-A for å identifisere GFP + celler. Celler som er infisert med RVP'ene express GFP, og andelen GFP + celler ble bestemt ved å sette en gate rundt disse cellene. Ca 12,2% av GFP + celler er synlig i ZIKV infiserte serum utvalget, sammenlignet med ingen GFP + celler i kontroll prøven. Denne gating strategien følges for hver serum fortynning og kontroll prøve inkludert i analysen.
Andelen GFP + celler var bestemt for hver eksempel fortynning og kontroll prøven som beskrevet ovenfor (figur 1). Data fra en representant dyr med DENV-1 RVP'ene er vist i figur 2. Sammenlignet med ingen serum kontroll prøven som hadde 0.253% GFP + celler, var andelen GFP + celler 2,58% i ufortynnet utvalg, 12,8% 1:10, 0.735% 1: 100, og 0.022% på 1:1,000 fortynning. Andelen GFP + celler vil endre serum er utvannet på grunn av minkende konsentrasjonen av antistoff i utvalget.
Forbedring av infeksjon er assosiert med antistoff konsentrasjonen som er ideell for å øke opptaket av virus, observerte vi en dramatisk økning i andelen GFP + celler på 1:10 fortynning sammenlignet med enten ufortynnet eksempel eller andre fortynninger, antyder at ufortynnet utvalget hadde høyere konsentrasjoner av antistoff mens de 1: 100 og 1:1,000 fortynninger hadde lavere nivåer av antistoff som ikke var tilstrekkelig til å indusere ADE infeksjon. Hvis antistoff konsentrasjoner er betydelig høy, burde så flere fortynninger av serum være inkludert å bestemme fortynning som ADE blir tydelig. I serumprøver vi undersøkte, observerte vi ADE på en fortynning av 1:10. På den annen side, observeres ADE på lavere fortynninger hvis antistoff konsentrasjonen i serum er ganske høy.
Neste, vi beregnet fold-styrking av infeksjon ved å dele den gjennomsnittlige prosentandelen av GFP + celler i tre eksemplarer brønnene for hver fortynning med den gjennomsnittlige prosentandelen av GFP + celler i tre eksemplarer brønnene for ingen serum kontroll. The kinetics av ADE mot DENV-1, 2, 3 og 4 serotyper ble fastsatt av grafiske fold forbedring på y-aksen og serum fortynning på x-aksen (Figur 3). Dataene viser at serum samlet på 16 ukens innlegget infeksjon betydelig forbedret infeksjon av K562 celler av DENV-1, 2, 3 og 4 serotyper på en fortynning av 1:10.
Figur 1: Gating strategi for å anskaffe og analyse av flowcytometri. K562 celler infisert med DENV RVP'ene uttrykke GFP som ble analysert ved hjelp av en flow cytometer. (A) ingen serum kontroll og (B) 16 uken innlegget-ZIKV infisert serum. Cellene ble først gated basert på fremover scatter området (FSC-A) vs frem scatter høyde (FSH-H) å utelukke doublets etterfulgt av en side xy (SSC-A) vs FSC-A utelate rusk. Den SSC-A vs FSC-en gated celler ble deretter gated basert på SSC-A vs GFP-A (grønn fluorescens Protein-området). Svart rektangler og ellipser representerer portene tallene ovenfor portene er prosentandelen av celler innenfor gate. Den svarte pilen mellom FACS tomter viser rekkefølgen av portene brukes. Klikk her for å se en større versjon av dette tallet.
Figur 2: representant dot tomter viser frekvensen av DENV RVP + celler. Prosentandelen av K562 celler som var infisert med DENV-1 RVP'ene ble bestemt av flowcytometri. Serum fra en representant Rhesus macaque på 16 ukens innlegget infeksjon ble inkubert med DENV-1 RVP'ene enten ufortynnet eller på en 1:10 og 1: 100 1:1,000 fortynninger og forhold til ingen kontroll serumprøver. Andelen GFP + celler på hver konsentrasjon av serum vises. Klikk her for å se en større versjon av dette tallet.
Figur 3: betydelig forbedring av Dengue-1, 2, 3 og 4 er observert på 1:10 fortynning av serum. Antistoff avhengige forbedring av Dengue infeksjon ble undersøkt for 4 DENV serotyper av inntegningsrekkefølgen serum fortynninger på x-aksen og fold forbedring (i forhold til noen serum utvalg kontroller) på y-aksen. Sera samlet fra 4 ZIKV immune rhesus aper på 16 uker etter smitte ble brukt i denne analysen. Feilfelt representerer standardfeil og * representerer p < 0,05. Klikk her for å se en større versjon av dette tallet.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Discussion
Flaviviruses som DENV og ZIKV dele betydelige bevis for homologi i begge deres strukturelle og ikke-strukturell proteiner som genererer antistoffer som cross-react med hverandre13,14. Disse cross-reactive antistoff svar har vist seg å forbedre infeksjon både i vivo og i vitro en heterologous serotype eller andre relaterte flaviviruses1,2. Potensial til å krysse forbedre infeksjon har viktige implikasjoner for behandling av sykdommen og også for vaksineutvikling.
Tradisjonelle kultur basert analyser bruk uten tillatelse celler som er infisert med smittsomme live DENV i nærvær av serum. Forbedring av infeksjon er målt ved kvantifisere mengden av virus i nedbryting ved hjelp av standard plakk analyser11. Denne analysen krever kultur av viruset i to linjer og krever betydelig lengre tid å utføre. I tillegg ikke alle DENV serotyper plakk på samme måte, å legge en annen grad av kompleksitet til disse analyser.
Andre analyser har endret plakk basert analysen protokollen for å måle infeksjon av linjer ved å kombinere intracellulær flekker for DENV bruker fluorescently merket antistoffer og flow cytometri9,10,14. Selv om dette reduserer tiden det tar å bestemme nivået av infeksjon i forhold til plakk basert er analyser det en rekke optimalisering trinn kreves for disse analyser å jobbe konsekvent. Intracellulær flekker protokoller er tidkrevende, de krever fikse og permeabilizing celler etterfulgt av intracellulær flekker og kreve godt titrerte DENV spesifikke antistoffer som kan tydelig skille hver serotype. I tillegg disse analyser er ikke lett mottakelig for en høy gjennomstrømning format og lider av høye nivåer av intra-analysen variasjon.
I motsetning til de ovenfor beskrevne analyser, DENV RVP'ene basert analysen er enkel å konfigurere, bruker ikke smittsom virus og er svært mottakelig for høy gjennomstrømning som lett kan brukes til å måle potensialet av serum å forbedre infeksjon. I tillegg denne analysen er ikke arbeidsintensiv som andre analyser, og kan være ferdig innen 2-3 dager, som tilbyr en stor fordel over gjeldende ADE analysen protokoller. Selv om analysen beskrevet i manuskriptet undersøkt kapasiteten til ZIKV infisert serum å forbedre infeksjon av DENV-1, 2, 3 og 4 serotyper, analysen kan tilpasses lett å undersøke serum fra både eksperimentelle og klinisk prøver innhentet fra andre Flavivirus infeksjoner som gulfeber virus (YFV), japansk Equine Encefalitt virus (JEEV) og West Nile virus (WNV) hvis RVP'ene er tilgjengelige, og med andre linjer. Det er imidlertid viktig å optimalisere analysen ved titrating volumet av RVP, antall celler/godt og varigheten av inkubasjon tillater optimal farging av celler uten bakgrunn flekker.
Titrations må utføres av rugende et definert antall målcellene (for eksempel 80.000 K562 celler eller en celle linje blir testet) med varierende mengder RVP'ene (for eksempel 2,5 µL 5 µL 7,5 µL, 10 µL, 20 µL, etc.). Når de riktige titer for hver RVP'ene er oppnådd, kan varigheten av inkubasjon bestemmes bruker innhentet titer sammen med definerte antallet celler og rugende dem som beskrevet i protokollen for variabel tidsrom (for eksempel 24 timer, 48 timer 72 h, etc.).
Vi observerte ADE infeksjon av alle 4 serotyper av DENV på en fortynning av 1:10, antyder at en antistoff nivåer i serum måtte bli utvannet 10-fold for å merker av infeksjon. På den annen side, har andre studier rapportert ved lavere fortynninger, som indikerer at konsentrasjonen av antistoff serum prøven var sannsynlig for høy trenger lavere fortynninger å oppdage ADE i vitro. Som ADE avhenger av høyre konsentrasjonen av antistoff serum prøven, er mest prøvene sannsynlig å vise ADE på fortynninger lavere enn ufortynnet serum.
Avslutningsvis protokollen beskrevet i dette manuskriptet er enkel og lett å adoptere, og gir mulighet for skalering aktivere høy gjennomstrømning screening av et stort antall prøver i en kort periode tidsramme å gi høy kvalitetsdata som kan lett bli analysert og tolkes.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Disclosures
Forfatterne ikke avsløre.
Acknowledgments
Beskrevet prosjektet ble støttet av midler fra Uniformed tjenester Universitetet i helsevitenskap til JJM. Meninger eller påstander heri er privat de av forfatterne, og er ikke skal tolkes som offisielle eller reflekterende synspunktene til Department of Defense, Uniformed tjenester Universitetet i helsevitenskap eller andre byrå i USA Regjeringen.
WGV utført alle eksperimenter og analysert dataene; JJM designet og overvåket studien; WGW og JJM skrev papiret.
Materials
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| DENV 1-4 RVP | Integral Molecular | RVP-501 | |
| K562 cells | ATCC | CCL-243 | |
| RPMI | Corning | 10-040-CV | |
| FBS | GE lifesceinces | SH 30910.03 | 10% FBS in RPMI-10 |
| Penicillin-Streptomycin | MP biomedicals | 1670049 | 100 IU Pen/mL, 100 ug Strep/mL in RPMI-10 |
| HEPES | Cellegro | 25-060-Cl | 0.025M in RPMI-10 |
| MEM Non-essential Amino Acid Solution (100×) | Sigma | M7145 | 1x in RPMI-10 |
| Sodium Pyruvate | Cellegro | 25-000-Cl | 1mM in RPMI-10 |
| L-glutamine | Fisher Scientific | MT25005CI | |
| Sterile V-bottom plates | Thomas Scientific | 333-8001-01V | |
| BD Falcon Polypropylene 5 ml FACS tubes | VWR | 60819-728 | |
| Non-sterile U-bottom plates | Falcon | Ref 353910 | A high throughput alternative to FACS tubes |
| 5mL, sterile, serological pipette | Denville | P7127 | |
| 200uL sterile pipette tips | Denville | P3020 CPS | |
| 20uL sterile pipette tips | Denville | P1121 | |
| 50-200uL multichannel pipette | Denville | P3975-8-B | |
| 5-50uL multichannel pipette | Denville | P3975-9-B | |
| 20% formadehyde | Tousimis | #1008B | |
| Water Bath | ThermoFisher | TSCOL35 | |
| thermomixer | Eppendorf | 2231000387 | An alternative to a waterbath for heat inactivation |
| CO2 Incubator | ThermoFisher | 13-998-213 | |
| Ethanol | Sigma Aldrich | E7023 | |
| Liquid Bleach | Fisher Scientific | NC9724348 | |
| Flowjo 9.8 | TreeStar, Inc. | Flow cytometry analysis software | |
| BD FACSDiva 6.1.2 | Becton Dikinson | ||
| BD LSR II flow cytometer | Becton Dikinson | ||
| Liquid Bleach | Fisher Scientific | NC9724348 |
References
- George, J., et al. Prior exposure to zika virus significantly enhances peak dengue-2 viremia in rhesus macaques. Sci Rep. 7 (1), 10498 (2017).
- Stettler, K., et al. Specificity, cross-reactivity, and function of antibodies elicited by Zika virus infection. Science. 353 (6301), 823-826 (2016).
- Mattia, K., et al. Dengue reporter virus particles for measuring neutralizing antibodies against each of the four dengue serotypes. PLoS One. 6 (11), e27252 (2011).
- Chiofalo, M. S., Teti, G., Goust, J. M., Trifiletti, R., La Via,, F, M. Subclass specificity of the Fc receptor for human IgG on K562. Cell Immunol. 114 (2), 272-281 (1988).
- Klein, E., et al. Properties of the K562 cell line, derived from a patient with chronic myeloid leukemia. Int J Cancer. 18 (4), 421-431 (1976).
- Kliks, S. C., Nisalak, A., Brandt, W. E., Wahl, L., Burke, D. S. Antibody-dependent enhancement of dengue virus growth in human monocytes as a risk factor for dengue hemorrhagic fever. Am J Trop Med Hyg. 40 (4), 444-451 (1989).
- Littaua, R., Kurane, I., Ennis, F. A. Human IgG Fc receptor II mediates antibody-dependent enhancement of dengue virus infection. J Immunol. 144 (8), 3183-3186 (1990).
- Wang, T. T., et al. IgG antibodies to dengue enhanced for FcgammaRIIIA binding determine disease severity. Science. 355 (6323), 395-398 (2017).
- Dejnirattisai, W., et al. Cross-reacting antibodies enhance dengue virus infection in humans. Science. 328 (5979), 745-748 (2010).
- Kawiecki, A. B., Christofferson, R. C. Zika virus-induced antibody response enhances dengue virus serotype 2 replication in vitro. J Infect Dis. 214 (9), 1357-1360 (2016).
- Morens, D. M., Halstead, S. B. Measurement of antibody-dependent infection enhancement of four dengue virus serotypes by monoclonal and polyclonal antibodies. J Gen Virol. 71 (Pt 12), 2909-2914 (1990).
- Perfetto, S. P., et al. Amine reactive dyes: an effective tool to discriminate live and dead cells in polychromatic flow cytometry. J Immunol Methods. 313 (1-2), 199-208 (2006).
- Priyamvada, L., et al. B Cell responses during secondary dengue virus infection are dominated by highly cross-reactive, memory-derived plasmablasts. J Virol. 90 (12), 5574-5585 (2016).
- Priyamvada, L., et al. Human antibody responses after dengue virus infection are highly cross-reactive to Zika virus. Proc Natl Acad Sci U S A. 113 (28), 7852-7857 (2016).
