Summary
Vi beskriver ett enkelt protokoll för mätning av antikropp beroende förbättring av infektion av Zika virus konvalescent serum använder denguefeber virus Reporter viruspartiklar.
Abstract
Antikropp beroende förbättring av infektion har visat sig spela en stor roll i denguefeber viral patogenes. Traditionella analyser som mäter antikroppar eller serum förmåga att förbättra infektion i otillåten cellinjer har förlitat sig på hjälp viral utdata i media följt av plack analyser för att kvantifiera infektion. Dessa analyser har nyligen undersökt Dengue-virusinfektion (DENV) i cell linjer med fluorescently märkta antikroppar. Båda dessa synsätt har begränsningar som begränsar den utbredda användningen av dessa tekniker. Här, beskriver vi en enkel in vitro- analys med hjälp av denguefeber virus reporter viruspartiklar (RVP) som uttrycker grönt fluorescerande protein och K562 celler att undersöka antikropp beroende enhancement (ADE) av DENV infektion med serum som erhölls från rhesus makaker 16 veckor efter infektion med zikaviruset (ZIKV). Denna teknik är tillförlitlig, innebär minimal manipulation av celler, innebär inte användning av levande replikering behöriga virus och kan utföras i en hög genomströmning-format för att få en kvantitativ avläsning med flödescytometri. Dessutom kan denna analys enkelt anpassas för att undersöka antikropp beroende förbättring (ADE) av andra flavivirus infektioner såsom gula febern-virus (YFV), Japansk Equine encefalit virus (Emilia), West Nile-virus (Moskitbett) etc. där det finns RVPer. Lätthet att inrätta analysen, analysera data, och tolka resultaten gör det mycket mottagliga för de flesta laboratoriemiljö.
Introduction
Antikropp beroende förbättring (ADE) infektion är en process varigenom delvis korsa-reactive antikroppssvar som induceras av en serotyp av virus förbättrar upptaget av en annan serotyp av virus, leder till ökad virusreplikation och viremi. ADE har dokumenterats i stor utsträckning i denguefeber virus (DENV) infektioner där fyra större serotyper är utbredda. I en undergrupp av patienter är ADE associerad med denguefeber hemorragisk feber (DHF). Vi har nyligen visat att Zika-virusinfektion (ZIKV) inducerade betydligt höga nivåer av DENV korsa-reactive antikroppssvar som orsakade ADE av DENV in vitro och sannolikt bidragit till förbättringen av DENV viremi i vivo1 , 2. antikropp beroende enhancement analyserna är ett värdefullt verktyg att utvärdera kapaciteten hos antikroppar att förbättra sekundär infektion med relaterade virus och ger värdefulla insikter i patogenesen av flavivirus infektioner och informera den utveckling av vacciner.
Analysen beskrivs använder här DENV RVPer tillsammans med K562 celler som är normalt otillåten till infektion. RVPer är strukturellt intakt replikering inkompetenta DENV viruspartiklar som kodar en sub-genomisk grönt fluorescerande protein (GFP) replicon som uttrycks efter en omgång av replikering3. Som sådan, celler som smittats med RVPer fluorescerar i grönt och kan upptäckas lätt med hjälp av flödescytometri eller mikroskopi. De RVPerna som används i denna analys erhölls från kommersiella källor. Det kan dock vara genereras mot andra virus och används i analysen beskrivs i detta manuskript. Under tiden är K562 celler en FcγIII-receptor-uttryckande, leukemi cellinje som binder till Fc-delen av antikroppar och smittas i närvaro av sub neutraliserande koncentrationer av antikropp4,5.
ADE analyser har flitigt använts i studier som undersöker riskfaktorerna för svår denguefeber och att avgränsa mekanismerna av in vitro- ADE6,7,8. ADE analysen beskrivs här kan användas snabbt och enkelt att fastställa kapaciteten i serum för att förbättra in vitro- infektion med RVPer och flödescytometri, jämfört med andra analyser som används för närvarande som kräver antingen bestämning av plack bildas enheter (pfu) i Vero-celler eller antikroppar färgning av infekterade celler6,7,8,9,10,11, vilka båda är tidskrävande och labor intensiv.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Protocol
De serumprov som används för att demonstrera det protokoll som beskrivs här erhölls från rhesus makaker som var inhysta och vårdas i enlighet med lokala, statliga och federala principer i en förening för bedömning och ackreditering av laboratorium djur hand International (AAALAC)-ackrediterade anläggning. Alla djurförsök har granskats och godkänts av institutionella djur vård och användning kommittén och prover förvärvades genom en vävnad dela protokoll.
1. dag 1
Obs: Utföra alla steg som beskrivs nedan i en steril laminär biosäkerhet skåp används för vävnadsodling i BSL-2 laboratorium.
- Tina serumprover i rumstemperatur och överföra 100 µL av varje serumprov till ett sterilt rör. Värme inaktivera för 30 min vid 56° C i ett vattenbad eller en temperatur-justerbar thermomixer. Gör 10-faldig seriespädningar av serumprovet alltifrån 1:1 till 1:1,000 med kall RPMI-10 (RPMI med 10% fetalt bovint serum).
- Över 10 µL av seriellt spädda serumprovet till varje brunn av en steril plattan med 96 brunnar V-botten. Omfatta två uppsättningar kontrollbrunnar, RPMI-10 med RVPer och utan serumprov och RPMI-10 endast utan RVPer och serumprov. Ställ in varje serumprov och RPMI-10 kontroller i exemplar.
- Ta bort Dengue-1, 2, 3 och 4 RVPer från-80 ° C frysen och Tina dem i 37 ° C vattenbad. Överföra de tinade RVPerna omedelbart till is. Få ungefär 170 µL RVPer för varje serumprov (10 µL RVPer x 3 brunnar för varje serumutspädning (1:1, 1:10, 1: 100, 1:1, 000) och 10 µL RVPer x 3 brunnar för var och en av RPMI-10 med RVP endast kontrollbrunnar).
- Pipettera 10 µL av RVPer in varje väl i V-botten plattan med 96 brunnar innehållande serumprovet och till RPMI-10 med RVPer (inget serum) kontrollbrunnarna. Lägg inte till RVPer till RPMI-10 endast (inget serumprov och ingen RVP) brunnar. Blanda grundligt genom att upp och ner med 5 – 10 gånger. Tillsätt 10 µL kallt RPMI-10 ersätter RVPer till varje kall RPMI-10 endast (inget serumprov och ingen RVP) kontrollbrunnar.
- Överföra plattan med 96 brunnar i V-botten till en inkubator och inkubera plattan i 1 timme vid 37 ° C i närvaro av 5% CO2. Medan plattan med 96 brunnar i V-botten ruvning, rengöra ytan på biosäkerhet skåp med 70% etanol och kör UV-ljuset i 15 min.
- Ta bort en fullt konfluenta T75 kolv med K562 celler ur ruvmaskinen, blanda väl med en steril 5 mL Pipettera cellerna och över 5 mL av celler till en steril 15 mL koniska rör.
Obs: De K562 cellerna upprätthålls i RPMI-10 och subkultiveras på6/1 x 10 ml. - Räkna antalet celler genom att ta bort 10 µL celler från steril 15 mL koniska röret och blanda med 10 µL tryphan blå. Räkna de celler som använder en hemocytometer för att bestämma det totala antalet celler i 15 mL koniska röret.
- Centrifugera 15 mL konisk med celler vid ~ 1200 x g i 10 minuter, Dekantera supernatanten och återsuspendera cellerna i varma RPMI-10 med en koncentration på 80 000 celler/30 µL av media (2,66 x 106 celler/ml).
- Bort plattan med 96 brunnar i V-botten från inkubatorn (steg 1,6), över 30 µL av K562 celler till varje brunn plattan med 96 brunnar i V-botten och blanda väl genom att upp och ner med 5 – 10 gånger. Överföra plattan med 96 brunnar i V-botten till en inkubator och inkubera plattan i 1 timme vid 37 ° C i närvaro av 5% CO2.
- Efter inkubation för 1 h, ta bort plattan med 96 brunnar i V-botten från inkubator och centrifugera vid ~ 1200 x g i 5 minuter. Efter centrifugering, Dekantera media från brunnarna genom att vända plattan uppochner i en behållare som innehåller 10% blekmedel.
- Tvätta cellerna i varje brunn av omblandning dem i 125 µL varma RPMI-10, blanda väl med en pipett och centrifugera plattan vid ~ 1200 x g för 5 min. Dekantera media genom att vrida plattan uppochner i en behållare som innehåller 10% blekmedel. Upprepa detta tvätta två gånger.
- Tillsätt 100 µL av varm RPMI-10 till varje blanda väl, upp och ner med Pipettera efter tvätt och inkubera plattan för 48 h vid 37 ° C i närvaro av 5% CO2.
2. dag 3
- Ta bort den V-botten plattan med 96 brunnar innehållande 100 µL av celler och media/brunn ur ruvmaskinen och flytta den till en biosäkerhet skåp. Med hjälp av en flerkanalspipett, blanda innehållet i varje brunn och överföra cellerna och media till en 96 väl U-botten plattan eller till pre märkt 5 mL polypropylene rören.
- Skölj varje brunn i den V-botten plattan med 96 brunnar med 100 µL av 1% PARAFORMALDEHYD (PFA) 1 x fosfat buffrad saltlösning (PBS) och överför till respektive brunnarna i 96 väl U-bottenplatta eller märkt 5 mL polypropylene rören från steg 2.1 till en engångsinjektionsflaska koncentration av 0,5% PFA/brunn eller tub. Blanda noggrant med hjälp av en flerkanalspipett, täcka plattan med aluminiumfolie och låt det sitta i inkubatorn i 30 minuter för att fixa cellerna.
- Förbereda flödescytometer (se Tabell för material till exempel) genom att köra ofärgade K562 celler för att kalibrera den sidan och framåt scatter tillsammans med inställningarna för fluorescens. Enda fluorescens kanal krävs är FL1, som GFP är den enda fluorescens som avges från cellerna. Förvärva ~ 30 000 – 50 000 celler från varje prov.
Obs: Alla kan läsa en enda fluorescens flödescytometer kan användas för att förvärva data, som celler som smittats med RVPer avger endast grön fluorescens på grund av GFP, och ingen annan fluorescens kanal behövs.
3. dataanalys
-
Analysera data som förvärvats på den flödescytometer använda någon mjukvara Flödesanalys flödescytometri (se tabell för material).
- Ställ in den första porten baserat på FSC-A (framåt scatter-området) vs FSC-H (framåt scatter – höjd) vill inkludera enstaka celler auto-fluorescerande midjekort jacka från analys12. Sedan, gate singlet-gated celler baserat på SSC-A (side scatter-området) vs FSC-A att utesluta autofluorescent skräp.
- Analysera SSC-A vs FSC-A gated celler för uttrycket av GFP baserad på SSC-A vs GFP-A. Bestämma procentandelen av GFP + celler för varje utspädning av serumet och kontroll proverna genom att ange en grind runt GFP + celler.
- Bestämma den genomsnittliga procentandelen GFP + celler för varje serum provspädning och kontrollbrunnar genom att dividera den totala procentsatsen av GFP + celler i tre exemplar brunnarna med 3.
- Beräkna fold-förstärkning av infektion genom att dividera den genomsnittliga procentandelen GFP + celler i serumprover för varje utspädning dividerad med den genomsnittliga procentandelen GFP + celler i RPMI-10 med RVPer (inget serumprov) kontrollbrunnarna.
- Diagram fold-enhancement (y-axeln) kontra utspädning (x-axeln) och utföra statistisk analys med ANOVA följt av Tukey's post hoc-test för multipla jämförelser.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Representative Results
Sera från 4 rhesus makaker var insamlade 16 veckor efter infektion med ZIKV och testade för sin potential att förbättra DENV-1, 2, 3 och 4 infektion i K562 celler. Djuren hade peak viremi ~ 1 x 105 exemplar av ZIKV RNA/mL plasma vid dag 3 efter infektion att minskat till nivåer som låg under detektionsgränsen av 7 dagar efter infektion. Ingen viremi upptäcktes i plasma på 16 veckor efter infektion. Sedan RVP analysen utfördes och insamlade data analyserades, som beskrivs i ovanstående protokoll.
Den portande strategi som används för att identifiera GFP + celler visas i figur 1. Den ursprungliga porten sattes att utesluta autofluorescent dubletter och inkluderar bara enstaka celler baserat på FSC-A vs FSC-H. Nästa tomten visar endast celler från den enda cell porten. där en grind var dragna utifrån SSC-A vs FSC-A att utesluta autofluorescent skräp. Dessa gated cellerna var sedan visas i en tredje tomt baserat på SSC-A vs FL1-A att identifiera GFP + celler. Celler som smittats med RVPer uttrycker GFP och procentandelen av GFP + celler bestämdes genom att ange en grind runt dessa celler. Cirka 12,2% av GFP + celler kan påvisas i det infekterade serumprovet för ZIKV, jämfört med ingen GFP + celler i referensprovet. Usenets strategin följs för varje utspädning och kontroll serumprov ingår i analysen.
Procentandelen av GFP + celler fastställdes för varje provspädning och kontrollprov som beskrivs ovan (figur 1). Data från ett representativt djur använder DENV-1 RVPer visas i figur 2. Jämfört med ingen kontroll serumprovet som hade 0.253% GFP + celler, var andelen GFP + celler 2,58% i outspädd prov, 12,8% 1:10, 0.735% på 1: 100 och 0,022% vid 1:1,000 utspädning. Procentandelen av GFP + celler ändras när serumet späds på grund av de minskande halterna av antikroppar i provet.
Förbättring av infektion är associerade med den antikroppskoncentration som är idealisk för att öka upptaget av virus, observerade vi en dramatisk ökning av andelen GFP +-celler vid 1:10 utspädning jämfört med antingen outspädd prov eller andra spädningar, tyder på att outspädd provet hade högre koncentrationer av antikropp 1: 100 och 1:1,000 spädningarna hade lägre nivåer av antikroppar som inte var tillräcklig för att framkalla ADE av infektion. Om antikroppar koncentrationer betydligt hög, bör sedan ytterligare utspädningar av serum inkluderas att avgöra den utspädning som ADE blir uppenbart. I de serumprov som vi granskat, observerat vi ADE vid en spädningsgrad av 1:10. Däremot, kan ADE observeras på lägre utspädningar om antikroppkoncentrationen av i serum är ganska hög.
Nästa, vi beräknat fold-förbättrande av infektion genom att dividera den genomsnittliga procentandelen GFP + celler i tre exemplar brunnarna för varje spädning med den genomsnittliga procentandelen GFP + celler i tre exemplar brunnarna för ingen serumkontroll. Kinetiken av ADE mot DENV-1, 2, 3 och 4 serotyper bestämdes av grafritande fold-enhancement på y-axeln och serum utspädning på x-axeln (figur 3). Data visar att serumet ut till 16 veckor efter infektion avsevärt förbättrad infektion av K562 celler av DENV-1, 2, 3 och 4 serotyper vid en spädningsgrad av 1:10.
Figur 1: Gating strategi för att förvärva och analys av flödescytometri. K562 celler infekterade med DENV RVPer uttrycker GFP som analyserades med hjälp av en flödescytometer. (A) ingen serumkontroll och (B) 16-veckors post-ZIKV infekterade serum. Cellerna var först gated baserat på framåt scatter område (FSC-A) vs framåt scatter höjd (FSH-H) för att utesluta midjekort jacka följt av en side scatter (SSC-A) vs FSC-A att utesluta skräp. SSC-A vs FSC-A gated cellerna var sedan gated baserat på SSC-A vs GFP-A (grönt fluorescerande Protein-område). Den svarta rektanglar och ovaler representerar grindarna och siffrorna ovanför grindarna är andelen celler som faller inom det utfärda utegångsförbud för. Den svarta pilen mellan FACS tomterna visar sekvensen av grindar används. Klicka här för att se en större version av denna siffra.
Figur 2: representativa dot tomter visar frekvensen av DENV RVP + celler. Procentandelen av K562 celler som var infekterade med DENV-1 RVPer bestämdes av flödescytometri. Serum som samlats in från en representativ Rhesus makaker på 16 veckor post infektion var inkuberas med DENV-1 RVPer antingen outspädda eller på en 1:10, 1: 100 och 1:1,000 utspädningar och jämfört ingen serum kontrollprover. Procentandelen av GFP +-celler vid varje koncentration av serum visas. Klicka här för att se en större version av denna siffra.
Figur 3: betydande förbättring av denguefeber-1, 2, 3 och 4 infektion observeras vid 1:10 utspädning av serumet. Antikropp beroende förbättring av denguefeber infektion undersöktes för de 4 DENV serotyperna av plottning serumspädningar på x-axeln och vik-enhancement (i förhållande till ingen serum prov kontroller) på y-axeln. Sera ut från 4 ZIKV immun rhesus makaker 16 veckor efter infektion användes i denna analys. Felstaplar representera standardfel och * representerar p < 0,05. Klicka här för att se en större version av denna siffra.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Discussion
Flavivirus som DENV och ZIKV dela betydande bevis för homologi i båda sina strukturella och icke-strukturella proteiner som genererar antikroppar som korsreagerar med varandra13,14. Dessa korsa-reactive antikroppssvar har visats öka av infektion både i vivo och in vitro- med ett heterologt serotyp eller andra relaterade flavivirus1,2. Potential att korsa förbättra infektion har betydande konsekvenser för hantering av sjukdomen och även för utvecklingen av vaccin.
Traditionell kultur baserat analyser använda icke-tillåtande celler som är smittade med smittsam levande DENV i närvaro av serum. Förbättring av infektion mäts genom att kvantifiera mängden virus i supernatanten med standard plack analyser11. Denna analys kräver kultur av virus i två cellinjer och kräver betydligt längre tid att utföra. Dessutom inte alla DENV serotyp plack på samma sätt, att lägga till en annan nivå av komplexitet i dessa analyser.
Andra analyser har ändrat protokollet plakett baserat test för att mäta infektion i cellinjer genom att kombinera intracellulära färgning för DENV med fluorescently märkta antikroppar och flow flödescytometri9,10,14. Även om detta minskar den tid som krävs för att fastställa nivån på infektion jämfört med plakett baserat finns analyser det ett antal optimering steg som krävs för dessa analyser att arbeta konsekvent. Intracellulära färgprotokollen är tidskrävande, eftersom de kräver fastställande och permeabilizing av celler följt av intracellulära färgning och kräver väl titrerad DENV specifika antikroppar som tydligt kan diskriminera varje serotyp. Dessutom, dessa analyser är inte enkelt kan bli föremål för en hög genomströmning format och lider av höga nivåer av inom analysen variabilitet.
I motsats till de ovan beskrivna analyserna, DENV RVPer baserat analysen är lätt att ställa, använder inte smittsamma virus och är mycket mottagliga för hög genomströmning som lätt kan användas att mäta serum potential att förbättra infektion. Dessutom denna analys är inte lika arbetskrävande som som andra analyser och kan slutföras inom 2-3 dagar, som erbjuder en stor fördel jämfört med nuvarande ADE assay protokoll. Även om analysen beskrivs i manuskriptet undersökte ZIKV smittade serum förmåga att förbättra infektion DENV-1, 2, 3 och 4 serotyper, analysen kan lätt anpassas till undersöka serum från både experimentella och kliniska prover som erhållits från andra flavivirus infektioner såsom gula febern-virus (YFV), Japansk Equine encefalit virus (Emilia) och West Nile-virus (Moskitbett) om RVPer finns tillgängliga, och med andra cellinjer. Det är dock viktigt att optimera analysen genom titrering volymen av RVP, antalet celler per brunn och varaktigheten av inkubering att tillåta optimal färgning av celler utan bakgrundsfärgning.
Titreringar behöver utföras av ruva ett definierat antal målceller (exempelvis 80.000 K562 celler eller en cell fodrar testas) med varierande volymer av RVPer (exempelvis 2,5 µL, 5 µL, 7,5 µL, 10 µL, 20 µL, etc.). När rätt titern för varje RVPer erhålls, kan varaktigheten av inkubering bestämmas med hjälp av den erhållna titern tillsammans med det angivna antalet celler och ruvning dem som beskrivs i protokollet under varierande tidsperioder (till exempel 24 h, 48 h 72 h, etc.).
Vi observerade ADE av infektion av alla 4 serotyper av DENV vid en spädningsgrad av 1:10, vilket tyder på att en nivåer av antikroppar i serum behövs spädas 10 gånger för att upptäcka förbättring av infektion. Däremot, har andra studier rapporterat förbättring på lägre utspädningar, vilket visar att koncentrationerna av antikropp i serumprovet var sannolikt alltför hög, behöver lägre utspädningar att upptäcka ADE i vitro. ADE beror på rätt koncentration av antikroppar i serumprovet, sannolikt de flesta prover Visa ADE på spädningar lägre än den outspätt serumen.
Sammanfattningsvis, det protokoll som beskrivs i detta manuskript är enkel och lätt att anta, och möjliggör skalning till aktivera high throughput screening av ett stort antal prover i en kort period tid att ge data av hög kvalitet som enkelt kan analyseras och tolkat.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Disclosures
Författarna har något att avslöja.
Acknowledgments
Beskrivs projektet stöddes av medel från Uniformed tjänster universitet vårdvetenskap till JJM. Åsikter eller påståenden som häri är de privata som av författarna och inte att tolkas som officiella eller reflekterande vyerna av Department of Defense, Uniformed tjänster universitet vårdvetenskap eller någon annan myndighet i USA Regeringen.
WGV utfört alla experiment och analyserade data; JJM utformade och övervakade studien; WGW och JJM skrev på papper.
Materials
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| DENV 1-4 RVP | Integral Molecular | RVP-501 | |
| K562 cells | ATCC | CCL-243 | |
| RPMI | Corning | 10-040-CV | |
| FBS | GE lifesceinces | SH 30910.03 | 10% FBS in RPMI-10 |
| Penicillin-Streptomycin | MP biomedicals | 1670049 | 100 IU Pen/mL, 100 ug Strep/mL in RPMI-10 |
| HEPES | Cellegro | 25-060-Cl | 0.025M in RPMI-10 |
| MEM Non-essential Amino Acid Solution (100×) | Sigma | M7145 | 1x in RPMI-10 |
| Sodium Pyruvate | Cellegro | 25-000-Cl | 1mM in RPMI-10 |
| L-glutamine | Fisher Scientific | MT25005CI | |
| Sterile V-bottom plates | Thomas Scientific | 333-8001-01V | |
| BD Falcon Polypropylene 5 ml FACS tubes | VWR | 60819-728 | |
| Non-sterile U-bottom plates | Falcon | Ref 353910 | A high throughput alternative to FACS tubes |
| 5mL, sterile, serological pipette | Denville | P7127 | |
| 200uL sterile pipette tips | Denville | P3020 CPS | |
| 20uL sterile pipette tips | Denville | P1121 | |
| 50-200uL multichannel pipette | Denville | P3975-8-B | |
| 5-50uL multichannel pipette | Denville | P3975-9-B | |
| 20% formadehyde | Tousimis | #1008B | |
| Water Bath | ThermoFisher | TSCOL35 | |
| thermomixer | Eppendorf | 2231000387 | An alternative to a waterbath for heat inactivation |
| CO2 Incubator | ThermoFisher | 13-998-213 | |
| Ethanol | Sigma Aldrich | E7023 | |
| Liquid Bleach | Fisher Scientific | NC9724348 | |
| Flowjo 9.8 | TreeStar, Inc. | Flow cytometry analysis software | |
| BD FACSDiva 6.1.2 | Becton Dikinson | ||
| BD LSR II flow cytometer | Becton Dikinson | ||
| Liquid Bleach | Fisher Scientific | NC9724348 |
References
- George, J., et al. Prior exposure to zika virus significantly enhances peak dengue-2 viremia in rhesus macaques. Sci Rep. 7 (1), 10498 (2017).
- Stettler, K., et al. Specificity, cross-reactivity, and function of antibodies elicited by Zika virus infection. Science. 353 (6301), 823-826 (2016).
- Mattia, K., et al. Dengue reporter virus particles for measuring neutralizing antibodies against each of the four dengue serotypes. PLoS One. 6 (11), e27252 (2011).
- Chiofalo, M. S., Teti, G., Goust, J. M., Trifiletti, R., La Via,, F, M. Subclass specificity of the Fc receptor for human IgG on K562. Cell Immunol. 114 (2), 272-281 (1988).
- Klein, E., et al. Properties of the K562 cell line, derived from a patient with chronic myeloid leukemia. Int J Cancer. 18 (4), 421-431 (1976).
- Kliks, S. C., Nisalak, A., Brandt, W. E., Wahl, L., Burke, D. S. Antibody-dependent enhancement of dengue virus growth in human monocytes as a risk factor for dengue hemorrhagic fever. Am J Trop Med Hyg. 40 (4), 444-451 (1989).
- Littaua, R., Kurane, I., Ennis, F. A. Human IgG Fc receptor II mediates antibody-dependent enhancement of dengue virus infection. J Immunol. 144 (8), 3183-3186 (1990).
- Wang, T. T., et al. IgG antibodies to dengue enhanced for FcgammaRIIIA binding determine disease severity. Science. 355 (6323), 395-398 (2017).
- Dejnirattisai, W., et al. Cross-reacting antibodies enhance dengue virus infection in humans. Science. 328 (5979), 745-748 (2010).
- Kawiecki, A. B., Christofferson, R. C. Zika virus-induced antibody response enhances dengue virus serotype 2 replication in vitro. J Infect Dis. 214 (9), 1357-1360 (2016).
- Morens, D. M., Halstead, S. B. Measurement of antibody-dependent infection enhancement of four dengue virus serotypes by monoclonal and polyclonal antibodies. J Gen Virol. 71 (Pt 12), 2909-2914 (1990).
- Perfetto, S. P., et al. Amine reactive dyes: an effective tool to discriminate live and dead cells in polychromatic flow cytometry. J Immunol Methods. 313 (1-2), 199-208 (2006).
- Priyamvada, L., et al. B Cell responses during secondary dengue virus infection are dominated by highly cross-reactive, memory-derived plasmablasts. J Virol. 90 (12), 5574-5585 (2016).
- Priyamvada, L., et al. Human antibody responses after dengue virus infection are highly cross-reactive to Zika virus. Proc Natl Acad Sci U S A. 113 (28), 7852-7857 (2016).
