Summary
Мы опишем простой и простой протокол для измерения антитела зависит повышение инфекции от Зика выздоравливающих сыворотки вирус с помощью вируса денге репортер вирусных частиц.
Abstract
Было показано, что антитела зависит от укрепления инфекции играют важную роль в патогенезе вирусной лихорадки денге. Традиционные анализы, которые измеряют антител или сыворотки способность повышения инфекции в недопустимых клеточных линий полагались на использование вирусных вывода в СМИ, следуют налета анализов для количественного определения инфекции. Совсем недавно эти анализы изучили денге вируса (DENV) в клеточных линий, с помощью дневно обозначенные антитела. Оба эти подхода имеют ограничения, которые ограничивают широкое использование этих методов. Здесь мы опишем простой в vitro пробирного с помощью денге репортер вирусные частицы вируса (РВП) которые выражают Зеленый флуоресцирующий белок и клетках K562 для изучения антитела зависит от повышения (ADE) DENV-инфекции с использованием сыворотки, которая была получена от резус макак 16 недель после инфицирования вирусом Зика (ZIKV). Эта техника является надежным, предполагает минимальный манипуляции клеток, не связаны с использованием живой репликации вируса и компетентных и может быть выполнена в формате высокой пропускной способности, чтобы получить количественные индикации с помощью проточной цитометрии. Кроме того этот assay может быть легко адаптирована для изучения антитела зависит от расширения (ADE) других flavivirus инфекций, таких как вирус желтой лихорадки (YFV), вирус японского энцефалита лошадей (ДЖИВ), вирус Западного Нила (ВЗН) и т.д., где имеются РВП. Простота настройки анализа, анализа данных и интерпретации результатов делает его очень поддаются большинство лабораторных параметров.
Introduction
Антитела зависит от расширения (ADE) инфекции — это процесс, согласно которому частично cross-reactive антитела реакций, вызванных серотипа вируса повышает усвоение другого серотипа вируса, приводит к увеличению вирусной репликации и виремии. Аде был хорошо документированы в инфекции вируса (DENV) денге, где распространены четыре основных серотипов. В подгруппе пациентов Аде связан с геморрагической лихорадки денге (ГЛД). Недавно мы показали, что инфекции вируса (ZIKV) Зика индуцированной значительно высокий уровень DENV cross-reactive антитела ответов, которые вызвали Аде DENV в пробирке и вероятно, способствовали укреплению DENV виремии в естественных условиях1 , 2. антитела зависит улучшение анализов являются ценным инструментом для оценки способности антител для повышения вторичной инфекции, связанной с вирусами и предоставлять ценную информацию в патогенезе flavivirus инфекций и информировать разработка вакцин.
Assay описанные здесь использует DENV РВП наряду с K562 клетки, которые обычно неприемлемы для инфекции. РВП являются структурно нетронутыми репликации некомпетентных DENV вирусных частиц которые кодируют репликоном суб геномных Зеленый флуоресцентный белок (КГВ), которая выражается после одного раунда репликации3. Таким образом клетки, которые инфицируются РВП флуоресцировать Грин и могут быть легко обнаружены с помощью проточной цитометрии или микроскопии. РВП, используемые в этот assay были получены из коммерческих источников. Они могут однако, быть против других вирусов и используется в assay, описанные в этой рукописи. Тем временем K562 клетки являются FcγIII рецепторов выражая лейкемии клеток линии, привязка к региону Fc антител и заразиться присутствии югу нейтрализации концентрации антител в4,5.
Аде анализы широко использовались в исследования, изучения факторов риска для тяжелой денге и определить механизмы в vitro Аде6,,78. Assay Аде, описанные здесь можно быстро и легко использоваться для определения способности сыворотки для повышения в vitro инфекции с помощью РВП и проточная цитометрия, по сравнению с другими анализов, используемых в настоящее время, которые требуют либо определения формирования зубного налета единицы (ОРП) в клетках Vero или антитело пятная из инфицированных клеток6,,78,9,10,11, оба из которых являются много времени и труда интенсивный.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Protocol
Образцы сыворотки, используемый для демонстрации протокол, описанные здесь были получены от макак резус, которые были размещены и заботились в соответствии с местных, государственных и федеральных политики в ассоциации оценки и аккредитации лабораторных животных уход Международный (АААЛЖ)-аккредитованных объекта. Все эксперименты на животных были рассмотрены и одобрены институциональный уход животных и использования Комитетом и образцы были приобретены через ткани, протокол обмена.
1. день 1
Примечание: Выполните все шаги, описанные ниже в стерильных ламинарного потока биобезопасности кабинета для тканевой культуры в лаборатории BSL-2.
- Оттепель образцы сыворотки при комнатной температуре и передачи 100 мкл каждого образца сыворотки в стерильную пробирку. Тепла инактивирует 30 мин на 56° C в водяной бане или регулируемой температуры thermomixer. Сделайте десятикратного серийных разведений образца сыворотки: от 1:1 до 1:1,000, с использованием холодного RPMI-10 (RPMI с плода бычьим сывороточным 10%).
- Передача 10 мкл серийно разреженных сыворотки образца в каждой скважине стерильные 96-луночных V-днище. Включать два набора контроля скважин, RPMI-10 с РВП и без образца сыворотки и RPMI-10 только без РВП и образцов сыворотки. Настройка каждого образца сыворотки и RPMI-10 элементов в triplicates.
- Удаление денге-1, 2, 3 и 4 РВП от-80 ° C морозильника и оттепели их в ванну воды 37 ° C. Переноса размороженных РВП сразу на льду. Получения РВП примерно 170 мкл для каждого образца сыворотки (10 мкл РВП x 3 скважин для каждого разведения сыворотки (1:1, 1:10, 1: 100, 1:1, 000) и 10 мкл РВП x 3 скважин для каждого из RPMI-10 с RVP только контроля скважин).
- Пипетка 10 мкл РВП в каждый хорошо 96-луночных V-нижней плиты, содержащий образец сыворотки и RPMI-10 с РВП (сыворотка крови) контроля скважин. Не добавляйте РВП RPMI-10 только (не сыворотки образца и не RVP) скважин. Смесь тщательно, закупорить вверх и вниз 5 – 10 раз. Добавить 10 мкл холодной RPMI-10 вместо РВП для каждой холодной RPMI-10 только (не сыворотки образца и не RVP) контроля скважин.
- Передать инкубатор 96-луночных V-днище и инкубировать пластину за 1 часа при 37 ° C в присутствии 5% CO2. В то время как 96-луночных V-днище инкубации, очистить поверхность шкафа с 70% этанол биобезопасности и запустите УФ света за 15 мин.
- Удалить полностью вырожденная T75 колбу K562 клеток из инкубатора, сочетание клетки, также с помощью пипетки стерильный 5 мл и передать стерильные 15 мл Конические трубки 5 мл клеток.
Примечание: Клетках K562 поддерживаются в RPMI-10 и subcultured в 1 x 10-6/мл. - Подсчитать количество ячеек путем удаления 10 мкл клетки из стерильных 15 мл Конические трубки и смешать с 10 мкл tryphan синий. Подсчет количества ячеек, используя Горяева, чтобы определить общее количество клеток в 15 мл Конические трубки.
- Центрифуга 15 мл конические с клетки на ~ 1200 x g 10 минут, сцеживаться супернатант и Ресуспензируйте клетки в теплых RPMI-10 в концентрации 80 000 клеток/30 мкл СМИ (2,66 х 106 клеток/мл).
- Удаление 96-луночных V-Нижняя пластина из инкубатора (шаг 1.6), передачи 30 мкл K562 клеток в каждой скважине 96-луночных V-нижней плиты и тщательно перемешать, закупорить вверх и вниз 5 – 10 раз. Передать инкубатор 96-луночных V-днище и инкубировать пластину за 1 ч при 37 ° C в присутствии 5% CO2.
- После инкубации в течение 1 ч, удалите 96-луночных V-Нижняя пластина из инкубатора и центрифуги на ~ 1200 x g за 5 минут. После центрифугирования сцеживаться СМИ из скважин, превратив пластину вниз головой в контейнер, содержащие отбеливатель 10%.
- Мыть ячейки в каждой скважине, resuspending их в 125 мкл теплых RPMI-10, тщательно перемешать с пипетки и центрифуги пластину на ~ 1200 x g для 5 минут Decant СМИ, превратив пластину вниз головой в контейнер, содержащие отбеливатель 10%. Повторите этот шаг мыть два раза.
- После мытья, 100 мкл теплой RPMI-10 для каждого, смешать вверх и вниз с пипетки и инкубировать пластину для 48 ч при 37 ° C в присутствии 5% CO2.
2. день 3
- Удалить 96-луночных V-нижней плиты, содержащей 100 мкл клеток и СМИ/из инкубатора и переместить его к биобезопасности кабинета. С помощью многоканальных дозаторов, смесь содержимое каждого Ну и передачи клетки и СМИ к 96 хорошо U-нижней пластины или предварительно пометил 5 мл полипропиленовые трубы.
- Промойте каждую лунку в 96-луночных V-днище с 100 мкл 1% параформальдегида (PFA) в 1 x фосфат буфер солевой (PBS) и передачи соответствующих скважин в 96 хорошо U-днище или помечены 5 мл полипропиленовые трубы из шага 2.1 выход в финал концентрация 0,5% PFA/ну или трубки. Смесь тщательно с использованием многоканальные пипетки, крышка с алюминиевой фольгой и пусть сидят в инкубаторе для 30 минут, чтобы исправить клетки.
- Подготовьте проточный цитометр (см. Таблицу материалов например), запустив неокрашенных K562 клетки для калибровки стороны и вперед разброс вместе с параметрами флуоресценции. Только флуоресценции канала требуется как значения параметров FL1, GFP является единственным флуоресценции, излучаемый из клеток. Приобрести ~ 30 000 – 50 000 клеток от каждого образца.
Примечание: Любые проточный цитометр способны читать один флюоресценции может использоваться для получения данных, как клетки, инфицированные РВП только выдают зеленой флуоресценцией благодаря наличию GFP, а другой канал флуоресценции не требуются.
3. анализ данных
-
Анализ данных, полученных на проточный цитометр, с помощью любого программного обеспечения cytometry анализ потока (см. таблицу материалы).
- Первые ворота основе FSC-A (вперед разброс – район) против FSC-H (вперед разброс – высота) включают отдельные ячейки и исключить из анализа12авто люминесцентные Дуплеты. Затем, ворота синглетно жилой ячейки, основанные на SSC-A (стороне разброс – район) против FSC-A, чтобы исключить любой autofluorescent мусора.
- Анализировать SSC-A против закрытых ячеек FSC-A для экспрессии гена GFP основе SSC-A против GFP-A. Определите процент GFP + клеток для каждого разведения образцов сыворотки и управления, установив ворот вокруг GFP + клеток.
- Определите средний процент GFP + клеток для каждого разбавления образца сыворотки и контроля скважин, разделив общий процент GFP + клеток в трех экземплярах лунки на 3.
- Вычислить фолд повышение инфекции путем деления средний процент GFP + клеток в образцах сыворотки для каждого разведения, деленное на средний процент GFP + клеток в RPMI-10 с РВП (не образца сыворотки) контроля скважин.
- Граф фолд повышение (ось y) против разрежения (ось x) и выполнять статистический анализ с использованием дисперсионного анализа, следуют Тьюки в пост hoc тест для нескольких сравнений.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Representative Results
Sera от 4 резус макак были собраны 16 недель после инфекции с ZIKV и проверяются на их потенциал для повышения DENV-1, 2, 3 и 4 инфекции в клетках K562. Животные имели пик виремии ~ 1 х 105 копий РНК/мл ZIKV плазмы на 3 день после заражения, что снизилась до уровней, которые были ниже предела обнаружения через 7 дней после инфицирования. Нет виремии был обнаружен в плазме в 16 недель после заражения. Затем RVP assay была выполнена, и были проанализированы собранные данные, как описано в протоколе выше.
Шлюзовые стратегия, используемая для идентификации GFP + клетки показаны на рисунке 1. Первоначальный ворот был установлен для исключения autofluorescent Дуплеты и включать только одной ячейки, основанные на FSC-A против FSC-H. Следующая диаграмма показывает только клетки от одноклеточного ворот; там, ворот было обращено на основе SSC-A против FSC-A, чтобы исключить любой autofluorescent мусора. Эти закрытого клетки были затем отображаются в третьей сюжет, основанный на SSC-A против значения параметров FL1-A для определения GFP + клеток. Клетки, инфицированные РВП Экспресс GFP, и был определен процент GFP + клеток, установив ворот вокруг этих клеток. Примерно 12,2% GFP + клетки обнаруживаются в образце зараженных сыворотки ZIKV, по сравнению с не GFP + клеток в образце элемента управления. Эта стратегия стробирования выполняется для каждого образца разрежения и управления сыворотки, включены в assay.
Для каждого образца разрежения и образец элемента управления, как описано выше (рис. 1) был определен процент GFP + клеток. Данные от представителя животного, с помощью DENV-1 РВП показаны на рисунке 2. По сравнению с не сыворотки управления образец что 0.253% GFP + клеток процент GFP + клеток были 2,58% в неразбавленном образца, 12,8% в 1:10, 0.735% при 1: 100 и 0,022% в 1:1,000 разрежения. Процент GFP + клеток будет меняться как сыворотка разводится из-за снижения концентрации антител в пробе.
Как повышение инфекции связаны с концентрации антитела, которая идеально подходит для увеличения поглощения вируса, мы наблюдали резкое увеличение доли GFP + клеток в 1:10 разрежения по сравнению с либо неразбавленный образец или других растворов, Предполагая, что неразбавленном образцы имели более высокие концентрации антитела, тогда как разведения 1: 100 и 1:1,000 имели более низкие уровни антител, что не было достаточно, чтобы побудить Аде инфекции. Если значительно высокой концентрации антитела, дополнительного разведения сыворотки следует определить разбавления, при котором Аде становится очевидной. В пробах сыворотки, которые мы рассмотрели мы наблюдали Аде в разведении 1:10. С другой стороны Аде может наблюдаться на нижней разведений, если концентрация антител в сыворотке крови является довольно высоким.
Далее мы рассчитали фолд повышение инфекции путем деления средний процент GFP + клеток в трех экземплярах скважин для каждого разведения с средний процент GFP + клеток в трех экземплярах скважин для управления не сыворотки. Кинетика в Аде против DENV-1, 2, 3 и 4 серотипов были определены графиков фолд повышение на оси y и сыворотки разрежения на горизонтальной оси (рис. 3). Данные показывают, что сыворотка собранных на 16 недель пост инфекции значительно улучшено инфекции K562 клеток DENV-1, 2, 3 и 4 серотипов в разведении 1:10.
Рисунок 1: стробирования стратегии для получения и анализа подачей cytometry. K562 клетки, инфицированные с DENV РВП Экспресс GFP, который был проанализирован с помощью проточный цитометр. (A) не сыворотки управления и (B) 16 неделе пост ZIKV инфицированных сыворотки. Клетки были впервые воротами, основанный на области вперед точечной (FSC-A) vs вперед разброс высота (ФСГ-H), чтобы исключить Дуплеты после стороны точечной (SSC-A) против FSC-A исключить мусора. SSC-A vs FSC-A закрытом клетки были затем закрытом на основании SSC-A против GFP-A (зеленый флуоресценции белков район). Черных прямоугольников и овалов представляют ворот, и цифры выше ворот являются процент клеток, входящих в этом ворота. Черная стрелка между СУИМ участков показывает последовательность ворот используется. Пожалуйста, нажмите здесь, чтобы посмотреть большую версию этой фигуры.
Рисунок 2: представитель точка участки показаны частоты DENV RVP + клетки. Процент K562 клеток, которые были заражены DENV-1 РВП определяется проточной цитометрии. Сыворотки, собранных от представителя макак резус в 16 недель пост инфекции был инкубировали с DENV-1 РВП неразбавленным или в 1:10, 1: 100 и 1:1,000 разведений и по сравнению с не контрольных образцов сыворотки. Отображается процент GFP + клеток в каждом концентрации сыворотки. Пожалуйста, нажмите здесь, чтобы посмотреть большую версию этой фигуры.
Рисунок 3: значительное повышение денге-1, 2, 3 и 4 инфекции наблюдается в 1:10 разведения сыворотки. Антитела зависит от укрепления инфекции денге была рассмотрена для 4 DENV серотипов построения разведения сыворотки на оси x и фолд расширение (относительно управления образца не сыворотки) на оси y. Sera собраны из 4 макак резус иммунной ZIKV на 16 недель после инфицирования был использован в этот assay. Представляют баров ошибка стандартная ошибка и * представляет p < 0,05. Пожалуйста, нажмите здесь, чтобы посмотреть большую версию этой фигуры.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Discussion
Flaviviruses как DENV и ZIKV поделиться существенные доказательства гомологию в обоих их структурных и неструктурных белки, которые генерируют антитела, которые cross-react друг с другом13,14. Было показано, что эти ответы cross-reactive антитела расширения инфекции как в естественных условиях , так и в пробирке с гетерологичных серотип или других связанных с flaviviruses1,2. Потенциал активизировать Крест инфекции имеет существенные последствия для управления этой болезни, а также для разработки вакцины.
Традиционной культуры на основе анализов использовать не разрешительной клетки, которые заражены с инфекционными живой DENV присутствии сыворотки. Повышение инфекции измеряется количественной количество вируса в надосадке, используя стандартные налета анализов11. Этот assay требует культуры вируса в двух клеточных линий и требует значительно длительных периодов времени для выполнения. Кроме того не все DENV серотипов доска так же, добавляя еще один уровень сложности для этих анализов.
Другие анализы изменили протокол assay налета на основе измерения инфекции клеточных линий, объединяя внутриклеточных пятная для DENV с помощью дневно обозначенные антитела и поток цитометрии9,10,14. Хотя это уменьшает время, необходимое для определения уровня инфекции по сравнению с налета на основе анализов есть, количество шагов оптимизации, необходимые для этих анализов согласованно. Внутриклеточные пятная протоколы отнимают много времени, как они требуют фиксации и permeabilizing клеток следуют внутриклеточных окрашивание и требуют хорошо титруемая DENV специфических антител, можно явно дискриминационные каждый серотипа. Кроме того эти анализы не легко поддаются формате высокой пропускной способности и страдает от высокого уровня интра анализа изменчивости.
В отличие от выше описанных анализов DENV РВП на основе легко установить, не используйте инфекционных вирусов и поддается очень высокой пропускной способности, который может легко использоваться для измерения потенциал сыворотки повышения инфекции. Кроме того этот assay не является трудоемким как другие анализы и может быть завершена в течение 2-3 дней, который предлагает значительное преимущество над текущей протоколов assay Аде. Хотя assay, описанные в рукописи изучил ZIKV инфицированных сыворотки способность повысить инфекции DENV-1, 2, 3 и 4 серотипов, assay может быть легко адаптированы для изучения сыворотки от обеих экспериментальных и клинических образцов, полученных из других Flavivirus инфекции вируса желтой лихорадки (YFV), вирус японского энцефалита лошадей (ДЖИВ) и вирус Западного Нила (ВЗН), наличии РВП и с других клеточных линий. Однако, важно, чтобы оптимизировать assay титрования объем RVP, количество клеток/хорошо и Длительность инкубации позволяют оптимальное окрашивания клеток без окрашивания фона.
Титрования должны выполняться путем инкубации определенное количество клеток-мишеней (например, 80000 K562 клетки или клетки линии проходит проверку) с переменным объемом РВП (например, 2,5 мкл, 5 мкл, 7,5 мкл, 10 мкл, 20 мкл и т.д.). Получив правильный титр для каждого РВП, Длительность инкубации может определяться с помощью полученных титр наряду с определенное количество клеток и инкубации их, как описано в протоколе для переменной периодов времени (например, 24 h, 48 ч 72 h и т.д.).
Мы наблюдали Аде инфекции на всех 4 серотипы DENV в разведении 1:10, предполагая, что уровни антител в сыворотке крови необходимо развести в 10 раз обнаружить повышение инфекции. С другой стороны другие исследования сообщили повышение на нижней разведений, которые будет означать, что концентрации антител в сыворотке образца, вероятно, слишком высоко, нуждающихся в нижней разведениях для выявления Аде в пробирке. Как Аде зависит право концентрация антител в сыворотке образца, большинство образцов, вероятно Показать Аде в разведениях ниже чем неразбавленном сыворотки.
В заключение, протокол, описанный в этой рукописи, простой и легко принять и позволяет для масштабирования для высокой пропускной способности скрининг большого числа проб в короткий период сроки произвести высокое качество данных, которые легко могут быть проанализированы и интерпретировать.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Disclosures
Авторы не имеют ничего сообщать.
Acknowledgments
Описан проект был поддержан средств от Uniformed услуги университета медицинских наук JJM. Мнения или утверждения, содержащиеся в настоящем документе являются частные авторов и не быть истолковано как официальный или отражающих мнения Министерства обороны, Uniformed услуги университета медицинских наук или любым другим учреждением, США Правительство.
WGV все эксперименты и анализ данных; JJM разработал и руководил исследования; РГК и JJM написал бумагу.
Materials
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| DENV 1-4 RVP | Integral Molecular | RVP-501 | |
| K562 cells | ATCC | CCL-243 | |
| RPMI | Corning | 10-040-CV | |
| FBS | GE lifesceinces | SH 30910.03 | 10% FBS in RPMI-10 |
| Penicillin-Streptomycin | MP biomedicals | 1670049 | 100 IU Pen/mL, 100 ug Strep/mL in RPMI-10 |
| HEPES | Cellegro | 25-060-Cl | 0.025M in RPMI-10 |
| MEM Non-essential Amino Acid Solution (100×) | Sigma | M7145 | 1x in RPMI-10 |
| Sodium Pyruvate | Cellegro | 25-000-Cl | 1mM in RPMI-10 |
| L-glutamine | Fisher Scientific | MT25005CI | |
| Sterile V-bottom plates | Thomas Scientific | 333-8001-01V | |
| BD Falcon Polypropylene 5 ml FACS tubes | VWR | 60819-728 | |
| Non-sterile U-bottom plates | Falcon | Ref 353910 | A high throughput alternative to FACS tubes |
| 5mL, sterile, serological pipette | Denville | P7127 | |
| 200uL sterile pipette tips | Denville | P3020 CPS | |
| 20uL sterile pipette tips | Denville | P1121 | |
| 50-200uL multichannel pipette | Denville | P3975-8-B | |
| 5-50uL multichannel pipette | Denville | P3975-9-B | |
| 20% formadehyde | Tousimis | #1008B | |
| Water Bath | ThermoFisher | TSCOL35 | |
| thermomixer | Eppendorf | 2231000387 | An alternative to a waterbath for heat inactivation |
| CO2 Incubator | ThermoFisher | 13-998-213 | |
| Ethanol | Sigma Aldrich | E7023 | |
| Liquid Bleach | Fisher Scientific | NC9724348 | |
| Flowjo 9.8 | TreeStar, Inc. | Flow cytometry analysis software | |
| BD FACSDiva 6.1.2 | Becton Dikinson | ||
| BD LSR II flow cytometer | Becton Dikinson | ||
| Liquid Bleach | Fisher Scientific | NC9724348 |
References
- George, J., et al. Prior exposure to zika virus significantly enhances peak dengue-2 viremia in rhesus macaques. Sci Rep. 7 (1), 10498 (2017).
- Stettler, K., et al. Specificity, cross-reactivity, and function of antibodies elicited by Zika virus infection. Science. 353 (6301), 823-826 (2016).
- Mattia, K., et al. Dengue reporter virus particles for measuring neutralizing antibodies against each of the four dengue serotypes. PLoS One. 6 (11), e27252 (2011).
- Chiofalo, M. S., Teti, G., Goust, J. M., Trifiletti, R., La Via,, F, M. Subclass specificity of the Fc receptor for human IgG on K562. Cell Immunol. 114 (2), 272-281 (1988).
- Klein, E., et al. Properties of the K562 cell line, derived from a patient with chronic myeloid leukemia. Int J Cancer. 18 (4), 421-431 (1976).
- Kliks, S. C., Nisalak, A., Brandt, W. E., Wahl, L., Burke, D. S. Antibody-dependent enhancement of dengue virus growth in human monocytes as a risk factor for dengue hemorrhagic fever. Am J Trop Med Hyg. 40 (4), 444-451 (1989).
- Littaua, R., Kurane, I., Ennis, F. A. Human IgG Fc receptor II mediates antibody-dependent enhancement of dengue virus infection. J Immunol. 144 (8), 3183-3186 (1990).
- Wang, T. T., et al. IgG antibodies to dengue enhanced for FcgammaRIIIA binding determine disease severity. Science. 355 (6323), 395-398 (2017).
- Dejnirattisai, W., et al. Cross-reacting antibodies enhance dengue virus infection in humans. Science. 328 (5979), 745-748 (2010).
- Kawiecki, A. B., Christofferson, R. C. Zika virus-induced antibody response enhances dengue virus serotype 2 replication in vitro. J Infect Dis. 214 (9), 1357-1360 (2016).
- Morens, D. M., Halstead, S. B. Measurement of antibody-dependent infection enhancement of four dengue virus serotypes by monoclonal and polyclonal antibodies. J Gen Virol. 71 (Pt 12), 2909-2914 (1990).
- Perfetto, S. P., et al. Amine reactive dyes: an effective tool to discriminate live and dead cells in polychromatic flow cytometry. J Immunol Methods. 313 (1-2), 199-208 (2006).
- Priyamvada, L., et al. B Cell responses during secondary dengue virus infection are dominated by highly cross-reactive, memory-derived plasmablasts. J Virol. 90 (12), 5574-5585 (2016).
- Priyamvada, L., et al. Human antibody responses after dengue virus infection are highly cross-reactive to Zika virus. Proc Natl Acad Sci U S A. 113 (28), 7852-7857 (2016).
