Her presenterer vi en protokoll for å indusere øye hypertensjon og glaucomatous neurodegeneration i muse øyne ved intracameral injeksjon av silikon olje og prosedyren for silikon olje fjerning fra fremre kammer for å returnere forhøyet intraokulært Trykk for å Normal.
Forhøyet intraokulært trykk (IOP) er en godt dokumentert risikofaktor for glaukom. Her beskriver vi en ny, effektiv metode for konsekvent å indusere stabil IOP-høyde i mus som etterligner postoperativ komplikasjon til bruk av silikon (SO) som en tamponade agent i humant vitreoretinal kirurgi. I denne protokollen, SO injiseres inn i fremre kammer av musen øyet å blokkere eleven og hindre tilsig av vandig humor. Den bakre kammer akkumuleres vandig humor og dette i sin tur øker IOP av bakre segmentet. En enkelt SO-injeksjon gir pålitelig, tilstrekkelig og stabil IOP-høyde, noe som medfører betydelige glaucomatous neurodegeneration. Denne modellen er en sann replikere av sekundær glaukom i øye klinikken. For ytterligere å etterligne den kliniske innstillingen, så kan fjernes fra fremre kammer for å gjenåpne drenerings veien og tillate tilsig av vandig humor, som er drenert gjennom trabekulær meshwork (TM) i vinkelen av fremre kammer. Fordi IOP går raskt tilbake til normal, kan modellen brukes til å teste effekten av å senke IOP på glaucomatous retinal Ganglion celler. Denne metoden er grei, krever ikke spesialutstyr eller gjenta prosedyrer, tett simulerer kliniske situasjoner, og kan være aktuelt for ulike dyrearter. Det kan imidlertid være nødvendig med mindre endringer.
Den progressive tap av retinal Ganglion celler (RGCs) og deres axons er kjennetegn på glaukom, en vanlig nevrodegenerative sykdom i Retina1. Det vil påvirke mer enn 100 000 000 individer 40 − 80 år gammel av 20402. IOP er fortsatt den eneste risikofaktoren som påvirkes i utviklingen og utviklingen av glaukom. For å utforske den patogenesen, progresjon, og potensielle behandlinger av glaukom, en pålitelig, reproduserbar, og induserbart eksperimentell øye hypertensjon/glaukom modell som replikerer viktige funksjoner av menneskelige pasienter er avgjørende.
IOP avhenger av vandig humor tilsig til fremre kammer fra ciliary kroppen i bakre kammer og utløp gjennom trabekulær meshwork (TM) i vinkelen av fremre kammer. Når en steady state er nådd, opprettholdes IOP. Når tilsig overstiger eller er mindre enn strøm, øker IOP eller faller hhv. Ved å redusere den vandige strømmen enten ved å okkluderer vinkelen til fremre kammer eller ved å skade TM, har flere glaukom-modeller blitt etablert3,4,5,6,7,8,9,10. Disse modellene er vanligvis forbundet med irreversible øye vevsskade, og den høye IOP i fremre kammeret fører også til uønskede komplikasjoner som hornhinnen ødem og intraokulært betennelse, som gjør Retinal Imaging og visuell funksjon analyser vanskelig å utføre og tolke.
Å utvikle en modell som overvinner disse svakhetene, fokuserte vi på den sudocumented sekundære glaukom forårsaket av silikon olje (så) som oppstår som en postoperativ komplikasjon av menneskelig vitreoretinal kirurgi11,12. SO brukes som en tamponade i Netthinne operasjoner på grunn av sin høye overflatespenning. Men så kan fysisk tette eleven fordi det er lettere enn den vandige og glasslegemet væsker, som hindrer vandig strømme inn i fremre kammeret. Hindringen forårsaker IOP-høyden i bakre kammer på grunn av den vandige humor akkumulering. Dette motiverte oss til å utvikle og karakterisere en roman øye hypertensjon mus modell basert på intracameral så injeksjon og Pupillary blokk13, med viktige funksjoner i sekundær glaukom: effektiv Pupillary blokk, betydelig IOP-høyde som kan gå tilbake til normal etter so fjerning, og glaucomatous neurodegeneration.
Her presenterer vi en detaljert protokoll for så-indusert øye hypertensjon i musen øyet, inkludert så injeksjon og fjerning og IOP-måling.
Her viser vi en enkel, men effektiv prosedyre for å indusere vedvarende IOP-høyde i musen øyet ved intracameral injeksjon av SO. Denne prosedyren kan læres raskt av alle som har erfaring i microdissection under et mikroskop. Den primære potensielle risikoen for svikt er lekkasje av SO fra hornhinnen snitt. Men en av fordelene med å bruke SO er at fordi olje dråpe er synlig og målbar, kan vi lett identifisere mus som fikk dråper for liten til å indusere stabilt øye hypertensjon kort tid etter injeksjon og utelu…
The authors have nothing to disclose.
Dette arbeidet er støttet av NIH tilskudd EY024932, EY023295, og EY028106 til YH.
0.5% proparacaine hydrochloride | Akorn, Somerset | ||
10mL syinge | BD | Luer-Lok Tip | |
18G needle | BD | with Regular Bevel, Needle Length:25.4 mm | |
2,2,2-Tribromoethanol (Avertin) | Fisher Scientific | CAS# 75-80-9 | 50g |
32G nano | BD | 320122 | BD Nano Ultra Fine Pen Needle-32G 4mm |
33G ophalmology needle | TSK/ VWR | TSK3313/ 10147-200 | |
5mL syinge | BD | Luer-Lok Tip | |
AnaSed Injection (xylazine) | Butler Schein | 100 mg/ml, 50 ml | |
artificial tears | Alcon Laboratories | 300651431414 | Systane Ultra Lubricant Eye Drops |
BSS PLUS Irrigating solution | Alcon Laboratories | 65080050 | |
Dual-Stage Glass Micropipette Puller | NARISHIGE | PC-10 | |
EZ-7000 Classic System | EZ system | ||
Isoflurane | VetOne | 502017 | isoflurane, USP, 250ml/bottle |
IV Administration sets | EXELint/ Fisher | 29081 | |
KETAMINE HYDROCHLORIDE INJECTION | VEDCO | 50989-996-06 | KETAVED 100mg/ml * 10ml |
microgrind bevelling machine | NARISHIGE | EG-401 | |
Miniature EVA Tubing | McMaster-Carr | 1883T4 | 0.05" ID, 0.09" OD, 10 ft. Length |
silicon oil (SILIKON) | Alcon Laboratories | 8065601185 | 1,000 mPa.s |
Standard Glass Capillaries | WPI/ Fisher | 1B150-4 | 4 in. (100mm) OD 1.5mm ID 0.84mm |
TonoLab tonometer | Colonial Medical Supply, Finland | ||
veterinary antibiotic ointment | Dechra Veterinary | 1223RX | BNP ophthalmic ointment, Vetropolycin |