Summary
यहां, हम एक चूहे के फेफड़े के प्रत्यारोपण मॉडल के लिए अनुकूलन प्रस्तुत करते हैं जो परिणामों में सुधार करने के लिए काम करते हैं। हम शरीर के वजन के आधार पर कफ के लिए एक आकार मार्गदर्शिका प्रदान करते हैं, 4वें इंटरकोस्टल स्थान का पता लगाने के लिए एक माप रणनीति, और घाव बंद करने और बीएएल (ब्रोन्कोएल्वोलर लैवेज) द्रव और ऊतक संग्रह के तरीके।
Abstract
चूहे के फेफड़ों के प्रत्यारोपण के साथ हमारे अनुभव से, हमें सुधार के लिए कई क्षेत्र मिले हैं। फुफ्फुसीय नस (पीवी), फुफ्फुसीय धमनी (पीए), या ब्रोन्कस (बीआर) के लिए उपयुक्त कफ आकार चुनने के तरीकों के बारे में मौजूदा साहित्य में जानकारी विविध है, इस प्रकार चूहे के फेफड़ों के प्रत्यारोपण के दौरान उचित कफ आकार का निर्धारण परीक्षण और त्रुटि का अभ्यास है। पोत या ब्रोन्कस के आकार के लिए उपयुक्त सबसे छोटे प्रभावी कफ का उपयोग करने के लिए कफिंग तकनीक को मानकीकृत करके, कोई प्रत्यारोपण प्रक्रिया को सुरक्षित, तेज और अधिक सफल बना सकता है। चूंकि पीवी, पीए और बीआर के व्यास चूहे के शरीर के वजन से संबंधित हैं, इसलिए हम वजन-आधारित गाइड का उपयोग करके उचित आकार चुनने के लिए एक रणनीति प्रस्तुत करते हैं। चूंकि फेफड़ों की मात्रा शरीर के वजन से भी संबंधित है, इसलिए हम अनुशंसा करते हैं कि गर्म इस्किमिया के दौरान दाता फेफड़ों की मुद्रास्फीति के लिए हवा की उचित मात्रा चुनते समय और साथ ही ब्रोंकोएल्वोलर लैवेज (बीएएल) द्रव संग्रह के दौरान पीबीएस की उचित मात्रा का चयन करते समय इस संबंध पर भी विचार किया जाना चाहिए। हम देशी और प्रत्यारोपित दोनों लोब से 4वें इंटरकोस्टल स्पेस विच्छेदन, घाव बंद करने और नमूना संग्रह के तरीकों का भी वर्णन करते हैं।
Introduction
तीन दशकों से, शोधकर्ता चूहे के फेफड़ों के प्रत्यारोपण मॉडल को संशोधित और सुधार रहे हैं ताकि उत्पन्न डेटा अधिक सुसंगत और वास्तविक नैदानिक स्थिति के अधिक प्रतिबिंबित हों। इस मॉडल को करने वाली हमारी प्रयोगशाला के समय में, हमने सुधार के चार क्षेत्रों को निर्धारित किया है: एनास्टोमोस के लिए कफिंग तकनीक, प्राप्तकर्ता के 4वें इंटरकोस्टल स्पेस की पहचान, प्राप्तकर्ता की प्रक्रिया के दौरान फेफड़ों की मुद्रास्फीति और घाव बंद करना, और विश्लेषण के लिए नमूनों की कटाई।
एनास्टोमोस के लिए कफिंग तकनीक संशोधन दाता फेफड़ेके हैंडलिंग समय को कम करके और माइक्रोसर्जन के लिए एनास्टोमोसिस प्रक्रिया को तेज और तकनीकी रूप से आसान बनाकर पूरी प्रत्यारोपण प्रक्रिया में सुधार कर सकते हैं। जबकि प्रत्यारोपित फेफड़ों को आवश्यक रक्त और वायु प्रवाह की आपूर्ति के लिए उचित आकार के कफ का उपयोग करना महत्वपूर्ण है, इस बारे में सीमित मार्गदर्शन है कि फुफ्फुसीय नस (पीवी), फुफ्फुसीय धमनी (पीए), या ब्रोंकस (बीआर) 5,7,8,9 के लिए कफ का आकार कैसे चुनना चाहिए। चूंकि पीवी, पीए और बीआर के व्यास दाता और प्राप्तकर्ता चूहों के शरीर के वजन से संबंधित हैं, इसलिए हम प्रस्ताव करते हैं कि कफ का आकार शरीर के वजन पर आधारित होना चाहिए। यह रिपोर्ट चूहे के शरीर के वजन (180 ग्राम से 270 ग्राम से अधिक) के आधार पर कफ के लिए एक आकार मार्गदर्शिका प्रदान करती है जो प्रत्यारोपित फेफड़े को रक्त और हवा की आपूर्ति को अनुकूलित करने का कार्य करती है (तालिका 1)।
जबकि एक नया माइक्रोसर्जन दाता प्रक्रिया के दौरान सफलतापूर्वक और आसानी से दाता फेफड़े की खरीद कर सकता है, प्राप्तकर्ता की प्रक्रिया के दौरान फेफड़े का प्रत्यारोपण अधिक जटिल है और माइक्रोसर्जन के अनुभव पर निर्भर है। प्राप्तकर्ता के बाएं फेफड़े तक पहुंचने के लिए 4वें इंटरकोस्टल स्थान को खोजने का प्रयास अधिक कठिन चरणों में से एक है जो कुछ व्यक्तिपरकता रखता है और प्रक्रिया के समय को बढ़ा सकता है। इसलिए, हम छाती माप और हृदय की धड़कन का उपयोग करके 4 वें इंटरकोस्टल स्पेस लोकेशन की पहचान में सहायता करने के लिए एक सरल और उद्देश्यपूर्ण विधि पेश करते हैं ताकि 4,5,6,10,11,12 को विच्छेदित करने के लिए सही क्षेत्र छाती की दीवार मिल सके।
हम दाता फेफड़ों की मुद्रास्फीति में सुधार का भी प्रस्ताव करते हैं, जो अंग को चोट का एक संभावित स्रोत है। दाता फेफड़े को तब तक फुलाया जाता है जब तक कि रीपरफ्यूजन शुरू न हो जाए। 4वें इंटरकोस्टल स्पेस को मोड़ते समय, दाता फेफड़े को आमतौर पर 2 सेमीएच 2 ओ से 6 सेमीएच2ओ तक पीआईपी बढ़ाकर फुलाया जाता है। अतिमुद्रास्फीति से फेफड़ों की चोट को कम करने के लिए, हम एक ऐसी तकनीक का प्रस्ताव करते हैं जहां सरल डबल समुद्री मील केसाथ 5 वीं पसली से 4वीं पसली के चारों ओर तीन 6-0 नायलॉन सीवन रखे जाते हैं। जब घाव बंद होने का समय होता है, तो तीन सीवन के सिरों को दोनों हाथों में हेमोस्टैट्स के साथ रखा जाता है, घाव को प्रत्येक तरफ खींचकर एक बार में बंद कर दिया जाता है, और पीआईपी को तुरंत 2 सेमीएच2ओ तक कम कर दिया जाता है। इस तरह, फेफड़े को कम से कम समय के लिए विस्तार करने की अनुमति है।
एक प्रयोग के समापन पर, शोधकर्ता अक्सर प्रत्येक प्रत्यारोपण से कई प्रकार के विश्लेषण के लिए कई प्रकार के नमूने एकत्र करना चाहता है। उदाहरण के लिए, स्नैप जमे हुए ऊतक, फॉर्मेलिन निश्चित ऊतक, फुफ्फुसीय एडिमा निर्धारित करने के लिए गीले-से-सूखे वजन अनुपात के लिए ऊतक, और ब्रोन्कोएल्वेलर लैवेज (बीएएल) द्रव सभी का उपयोग यह आकलन करने के लिए किया जा सकता है कि प्रत्यारोपण कितनी अच्छी तरह चला गया। बीएएल द्रव एकत्र करने की पारंपरिक विधि प्राप्तकर्ता के मूल लोब और दाता के प्रत्यारोपित लोब13,14,15 दोनों से मिश्रित पूल किए गए नमूने की अनुमति देती है। इसे दूर करने के लिए, हम हिलर क्षेत्रों को दबाने की एक विधि प्रस्तुत करते हैं जो प्रत्यारोपित और देशी फेफड़ों की स्थिति में अधिक सटीक अंतर्दृष्टि प्राप्त कर सकता है। इसके अतिरिक्त, फेफड़ों के प्रत्येक तरफ से बीएएल द्रव एकत्र करने के लिए उपयोग किए जाने वाले पीबीएस की मात्रा पर विचार करना महत्वपूर्ण है क्योंकि बीएएल द्रव में साइटोकिन्स और केमोकाइन जैसे कई घुलनशील कारक होते हैं जो एकाग्रता द्वारा मापा जाता है। फेफड़ों की क्षमता की अनुमानित मात्रा में डाले गए तरल पदार्थ की मात्रा को सामान्य करने से तुलना में मदद मिल सकती है। दाईं ओर चार लोब और बाईं ओर एक लोब के साथ, चूहे के पांच लोबों में से प्रत्येक में एक अलग मात्रा और सतह क्षेत्र16 होता है। बैकर एट अल द्वारा फेफड़ों के लोब की मात्रा माप पर पिछले अध्ययन के अनुसार, पूरे फेफड़े की कुल मात्रा में से दाएं लोब की मात्रा 63% (4400 मिमी3) और बाएं लोब की मात्रा 37% (2500 मिमी3) है। इसलिए, हम अनुशंसा करते हैं कि बीएएल द्रव एकत्र करने के लिए उपयोग किए जाने वाले पीबीएस की मात्रा की गणना ज्वारीय मात्रा (7.2 एमएल / किग्रा) के दोगुने के रूप में की जानी चाहिए, जो दाएं फेफड़े के लिए 63% और बाएं फेफड़े के लिए 37% से गुणा की जानी चाहिए। इस दृष्टिकोण का उपयोग करके, कोई भी शरीर के वजन और समय10,16 जैसे चर के लिए बेहतर नियंत्रण कर सकता है।
कुल मिलाकर, इस रिपोर्ट में हम चूहे के फेफड़ों के प्रत्यारोपण के मानक प्रयोगात्मक मॉडल में कुछ संशोधनों का प्रदर्शन करेंगे जो प्रक्रिया को अधिक कुशल बना सकते हैं और प्रत्येक प्रयोग से अधिक सटीक और भरपूर डेटा उत्पन्न करने की क्षमता बढ़ा सकते हैं।
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Protocol
नर स्प्राग-डॉवले चूहों (180-270 ग्राम शरीर का वजन) को व्यावसायिक रूप से खरीदा गया था (जैसे, एनविगो) और ओहियो स्टेट यूनिवर्सिटी एनिमल फैसिलिटी में रोगज़नक़-मुक्त परिस्थितियों में रखा गया था। सभी प्रक्रियाओं को एनआईएच और प्रयोगशाला जानवरों की मानवीय देखभाल और उपयोग के लिए राष्ट्रीय अनुसंधान परिषद की मार्गदर्शिका के अनुसार और ओहियो स्टेट यूनिवर्सिटी संस्थागत पशु देखभाल और उपयोग समिति (आईएसीयूसी प्रोटोकॉल # 2012 ए00000135-आर 2) के अनुमोदन के साथ मानवीय रूप से किया गया था।
1. प्रारंभिक सेटअप
- सर्जिकल उपकरण सेट करें।
नोट: यह एक गैर-जीवित सर्जरी है। यदि उत्तरजीविता सर्जरी की जानी है, तो बाँझ उपकरणों और बाधा सावधानियों को करने की आवश्यकता होगी।- ऑक्सीजन संतृप्ति निगरानी उपकरण और वार्मिंग बोर्ड को 42 डिग्री सेल्सियस पर चालू करें।
- आइसोफ्लुरेन बाष्पीकरणकर्ता को पूर्व-गर्म करने के लिए वेंटिलेशन और संज्ञाहरण मशीन चालू करें।
नोट: 7.2 एमएल / किग्रा की ज्वारीय मात्रा (टीडी), 2 सेमीएच2ओ का सकारात्मक-अंत समाप्ति दबाव (पीआईपी) और 80 बीपीएम की श्वसन दर का उपयोग करें। - एनेस्थीसिया सिरिंज को 10 एमएल तरल आइसोफ्लुरेन के साथ भरें और सिरिंज को वेंटिलेशन और संज्ञाहरण मशीन पर माउंट करें।
- ऊंचाई के साथ सर्जिकल माइक्रोस्कोप चालू करें और माइक्रोसर्जन की वरीयताओं पर ध्यान केंद्रित करें।
- इलेक्ट्रोकेटरी डिवाइस चालू करें।
- सर्जिकल उपकरण तैयार करें और बिछाएं (चित्रा 1)।
नोट: सभी सर्जिकल उपकरणों को 30 मिनट के लिए 121 डिग्री सेल्सियस पर आटोक्लेव किया गया था। - दाता और प्राप्तकर्ता चूहों के शरीर के वजन को इकट्ठा और रिकॉर्ड करें।
- कफ बनाने के लिए उपयोग करने के लिए एंजियो-कैथेटर (20, 18 , 16 14, या 12 जी) के सही गेज को निर्धारित करने के लिए तालिका 1 और चूहे के शरीर के वजन का उपयोग करें।
- शरीर के वजन के आधार पर आकार गाइड का उपयोग करके फुफ्फुसीय धमनी (पीए), ब्रोंकस (बीआर), और फुफ्फुसीय नस (पीवी) के लिए कफ तैयार करें (तालिका 1 और चित्रा 2)।
- एंजियो-कैथेटर आकार 20 जी, 18 जी, 16 जी, 14 जी, या 12 जी (चित्रा 2 ए-ई) को सर्जिकल माइक्रोस्कोप के तहत एक बाँझ सतह पर रखें।
- फिर एक पसली-बैक सर्जिकल ब्लेड # 11 (चित्रा 2 एफ) का उपयोग करके एंजियो-कैथेटर को 90 ° कोण पर काटने के लिए कफ बॉडी के शीर्ष पर 1 मिमी एक्स 1 मिमी टैब (चौड़ाई एक्स ऊंचाई) के साथ 2 मिमी लंबाई कफ बॉडी बनाई जा सके (चित्रा 2 जी)।
- उपयोग के लिए तैयार होने तक कफ को बाँझ खारा में स्टोर करें।
- समाधान तैयार करें।
- एक बाँझ इंजेक्शन शीशी में 1 एमएल ज़ाइलज़िन (100 मिलीग्राम / एमएल) को 10 मिलीलीटर केटामाइन (100 मिलीग्राम / एमएल) में जोड़कर केटामाइन और ज़ाइलाज़िन का मिश्रण तैयार करें।
नोट: इस कॉकटेल के लिए समाप्ति तिथि उपयोग किए गए घटकों की शुरुआती समाप्ति तिथि का उपयोग करके निर्धारित की जाती है। - चूहों के लिए उचित खुराक (चूहे के शरीर के वजन के प्रति 100 ग्राम केटामाइन / ज़ाइलज़िन मिश्रण का 0.1 एमएल; उदाहरण के लिए, 200 ग्राम चूहे के लिए, 0.2 एमएल केटामाइन / ज़ाइलज़िन मिश्रण वितरित किया जाएगा)।
नोट: यह खुराक चूहे को 91 मिलीग्राम / किग्रा केटामाइन और 9.1 मिलीग्राम / किलोग्राम ज़ाइलाज़िन वितरित करेगी और एक चूहे को 60-80 मिनट के लिए बेहोश रखना चाहिए। - हेपरिन तैयार करें जिसे 1,000 यू / किग्रा की खुराक पर वितरित किया जाएगा।
- बर्फ पर खारा, पीबीएस और संरक्षण समाधान स्टोर करें (सामग्री की तालिका)।
- एक बाँझ इंजेक्शन शीशी में 1 एमएल ज़ाइलज़िन (100 मिलीग्राम / एमएल) को 10 मिलीलीटर केटामाइन (100 मिलीग्राम / एमएल) में जोड़कर केटामाइन और ज़ाइलाज़िन का मिश्रण तैयार करें।
2. दाता चूहे की तैयारी
- केटामाइन और ज़ाइलाज़िन मिश्रण को इंट्रापरिटोनियल रूप से इंजेक्ट करके दाता चूहे में संज्ञाहरण को प्रेरित करें और संज्ञाहरण के सर्जिकल विमान को विकसित करने के लिए ~ 10 मिनट की प्रतीक्षा करें जिसे पैर की अंगुली की प्रतिक्रिया की कमी से मूल्यांकन किया जा सकता है।
- इलेक्ट्रॉनिक क्लिपर का उपयोग करके चीरा क्षेत्र को शेव करें।
- दाता चूहे को सर्जिकल वार्मिंग बोर्ड पर लापरवाह स्थिति में रखें और बीटाडीन से भिगोए गए बाँझ धुंध के साथ चीरा क्षेत्र को पोंछ दें। फिर 70% आइसोप्रोपिल अल्कोहल स्वैब के साथ क्षेत्र को पोंछें। 3 बार दोहराएं।
- कैंची का उपयोग करके गर्दन के बीच में 3 से 4 सेमी मध्यरेखा त्वचा चीरा लगाएं और बल का उपयोग करके चमड़े के नीचे के ऊतकों और मांसपेशियों को सावधानीपूर्वक विच्छेदित करें (रक्तस्राव से बचने के लिए कैंची के बजाय)।
- एंडोट्राचेल इंटुबैशन के लिए, श्वासनली के चारों ओर 4-0 रेशम सीवन पिरोएं और श्वासनली में 16 जी एंजियो-कैथेटर डालें। श्वासनली के चारों ओर सीवन को एक डबल गाँठ के साथ कसकर बांधें, और फिर एंजियो-कैथेटर को पकड़ने के लिए एक गाँठ के साथ समाप्त करें।
- एंजियो-कैथेटर को वेंटिलेटर से कनेक्ट करें और 1-2% आइसोफ्लुरेन के साथ चूहे में संज्ञाहरण के सर्जिकल प्लेन को बनाए रखें।
- कैंची का उपयोग करके एक संयुक्त मध्य रेखा और अनुप्रस्थ चीरा के रूप में लैपरो-स्टर्नोटॉमी करें।
- हेपरिन (1,000 यू / किग्रा) को इंसुलिन सिरिंज के साथ अवर वेना कावा (आईवीसी) के माध्यम से इंजेक्ट करें और प्रणालीगत परिसंचरण के लिए 10 मिनट की अनुमति दें।
नोट: हेपरिन का यह प्रशासन दाता फेफड़ों में रक्त के थक्कों को रोकता है। - वक्ष मेहराब के साथ काटकर डायाफ्राम को सावधानीपूर्वक विच्छेदित करें, और फिर उरोस्थि को गर्दन तक खींचकर वक्ष गुहा को उजागर करें।
3. दाता फेफड़े गर्म इस्किमिया और खरीद
- आईवीसी को काटकर दाता चूहे को इच्छामृत्यु करें।
- जबकि फेफड़े अभी भी हवादार हैं, दाएं और बाएं दोनों ऑरिकल्स को माइक्रो विच्छेदन स्प्रिंग कैंची के साथ काटें और गुरुत्वाकर्षण ट्यूबिंग से जुड़े गुरुत्वाकर्षण द्वारा 28 सेमीएच 2 ओ पर लटकने वाली सिरिंज में20एमएल संरक्षण समाधान के साथ फेफड़ों को फ्लश करें और एक 18 जी एंजियो-कैथेटर जो सीधे फुफ्फुसीय धमनी के माध्यम से पेश किया जाता है।
- एंडोट्राचेल ट्यूब से वेंटिलेटर को डिस्कनेक्ट करें और इसे शरीर के वजन के आधार पर हवा की उचित मात्रा से भरे 5 एमएल सिरिंज से कनेक्ट करें।
नोट: फेफड़ों को फुलाने के लिए हवा की मात्रा की गणना ज्वारीय आयतन (टीडी = 7.2 एमएल / किग्रा) के दोगुने के साथ की जा सकती है, उदाहरण के लिए, 200 ग्राम चूहे में 1.44 एमएल का टीडी होगा और इसे 2 से गुणा करने से फेफड़ों को फुलाने के लिए आवश्यक 2.88 एमएल हवा के बराबर होगी। - दाता के फेफड़ों को फुलाएं।
- फेफड़ों को फुलाए रखने के लिए श्वासनली पर एक यासरगिल क्लैंप लगाएं, और फेफड़ों और हृदय को बाँझ कपास धुंध से कवर करें। धुंध को खारा के साथ मॉइस्चराइज करें, दाता चूहे को अंडर पैड के साथ लपेटें, और फेफड़ों में गर्म इस्किमिया को प्रेरित करने के लिए 1 घंटे के लिए वार्मिंग सर्जरी बोर्ड पर छोड़ दें (चित्रा 3)।
- गर्म इस्किमिया के 1 घंटे के बाद, दिल-फेफड़ों के ब्लॉक को माइक्रो विच्छेदन स्प्रिंग कैंची और फोर्सप्स के साथ एक्साइज किया जाता है और बर्फ पर बाँझ पेट्री डिश पर बर्फ-ठंडे पीबीएस के साथ बाँझ धुंध पर रखा जाता है।
नोट: निम्नलिखित सभी चरण होने चाहिए जब फेफड़े बर्फ पर पेट्री डिश पर हों। - बाएं फेफड़े को अन्नप्रणाली और पोस्ट-कैवल लोब से अलग करने के लिए सूक्ष्म विच्छेदन स्प्रिंग कैंची के साथ फुफ्फुसीय स्नायुबंधन को सावधानीपूर्वक इंजेक्ट करें।
- वन्नास-ट्यूबिंगन स्प्रिंग कैंची के साथ बाएं फेफड़े के हिलर क्षेत्र को सावधानीपूर्वक ट्रिम करें और बाएं पीवी, पीए और बीआर खरीदें।
- पीवी, पीए, या बीआर (चित्रा 4 ए-सी) पर कफ रखें।
- कफ टैब को पकड़ने के लिए मच्छर हेमोस्टैट का उपयोग करें।
- पीवी, पीए, या बीआर के बाहरी छोर को उचित कफ बॉडी के माध्यम से पकड़ने के लिए महीन बल का उपयोग करें, कफ के चारों ओर अतिरिक्त ऊतक को छानें, और 8-0 का उपयोग करके सुरक्षित करें नायलॉन सीवन। कफ शरीर के चारों ओर अतिरिक्त ऊतक और कफ को ट्रिम करने के लिए वन्नास-ट्यूबिंगन स्प्रिंग कैंची का उपयोग करें।
- दाता फेफड़े को बर्फ पर पेट्री डिश पर खारा के साथ धुंध से ढके रखें जब तक कि यह प्राप्तकर्ता चूहे में प्रत्यारोपित होने के लिए तैयार न हो जाए (चित्रा 4 डी)।
नोट: औसत कोल्ड इस्किमिया समय 84 मिनट ± 11 मिनट एसडी है।
4. प्राप्तकर्ता चूहे की तैयारी
- प्राप्तकर्ता चूहे में एनेस्थीसिया को उसी तरह से प्रेरित करें जैसे दाता चूहे को इंट्रापरिटोनियल रूप से केटामाइन और ज़ाइलज़िन मिश्रण (0.1 एमएल प्रति 100 ग्राम चूहा) को इंजेक्ट करके और संज्ञाहरण के सर्जिकल प्लेन को विकसित करने के लिए 10 मिनट इंतजार करना जिसे पैर की अंगुली की प्रतिक्रिया की कमी से मूल्यांकन किया जा सकता है।
- इलेक्ट्रॉनिक क्लिपर का उपयोग करके चीरा क्षेत्र को शेव करें।
- दाता चूहे को लापरवाह स्थिति में रखें और बीटाडीन से भिगोए गए बाँझ धुंध के साथ चीरा क्षेत्र को पोंछ दें। फिर 70% आइसोप्रोपिल अल्कोहल स्वैब के साथ क्षेत्र को पोंछें। 3 बार दोहराएं।
- इससे पहले कि चूहे को वेंटिलेशन मशीन से सुरक्षित किया जाए, 4वें इंटरकोस्टल स्पेस को खोजने की तैयारी में चूहे की छाती पर रेखाएं खींचें।
- छाती को सुपरस्टर्नल नॉच से जिफॉइड प्रक्रिया तक मापें और एक रेखा खींचें (चित्रा 5 ए)।
- इस रेखा के मध्य में, छाती के बाईं ओर एक रेखा खींचें जो सुप्रास्टर्नल नॉच से xiphoid प्रक्रिया (चित्रा 5 ए और बी) तक माप के आधे हिस्से को मापता है।
- एंडोट्राचेल इंट्यूबेशन किट से एलईडी लाइट से जुड़े फाइबर ऑप्टिक केबल का उपयोग करके विज़ुअलाइज़ेशन के माध्यम से 16 जी एंजियो-कैथेटर का उपयोग करके प्राप्तकर्ता को इंटुबेट करें।
- एंजियो-कैथेटर को वेंटिलेटर से कनेक्ट करें और 1-2% आइसोफ्लुरेन के साथ संज्ञाहरण के सर्जिकल प्लेन को बनाए रखें।
- 4वें इंटरकोस्टल स्पेस को खोजने के लिए, छाती की दीवार के क्षेत्र का पता लगाएं जहां एक मजबूत स्पष्ट हृदय आवेग महसूस किया जा सकता है (चित्रा 5 सी, लाल सर्कल)।
- इस स्थान पर, कैंची के साथ त्वचा और माइक्रो विच्छेदन स्प्रिंग कैंची के साथ मांसपेशियों को इंजेक्ट करें, और 4वें इंटरकोस्टल स्पेस को यथासंभव व्यापक रूप से खोलने के लिए रिट्रैक्टर का उपयोग करें (चित्रा 5 डी और ई)।
नोट: मांसपेशियों के विच्छेदन के दौरान रक्तस्राव से बचने या रोकने के लिए विद्युत काउट्री का उपयोग करें। - एक बार इंटरकोस्टल स्पेस को व्यापक रूप से खोल दिया जाता है, तो वेन्नास-ट्यूबिंगन स्प्रिंग कैंची का उपयोग करके प्राप्तकर्ता के बाएं फेफड़े के आसपास के स्नायुबंधन को सावधानीपूर्वक विच्छेदित करें और बाँझ कपास स्वैब और फोर्सप्स का उपयोग करके फेफड़े को छाती क्षेत्र से बाहर खींचें।
- बाएं फेफड़े के चारों ओर बाँझ धुंध रखें और इसे एक डिफेनबैक बुलडॉग क्लैंप के साथ पकड़ें।
- बाएं फेफड़े के हिलर क्षेत्र पर यथासंभव समीपस्थ रूप से यासरगिल क्लैंप लागू करें।
5. एनास्टोमोस
- फुफ्फुसीय नस (पीवी) एनास्टोमोसिस
- प्राप्तकर्ता के पीवी के चारों ओर 7-0 नायलॉन सीवन रखें।
- वान्नास-ट्यूबिंगन स्प्रिंग कैंची का उपयोग करके प्राप्तकर्ता के पीवी को ऊपरी और निचले खंड यी नसों को यथासंभव दूर से काटकर इंजेक्ट करें और इंसुलिन सिरिंज का उपयोग करके 0.2 एमएल हेपरिनाइज्ड सेलाइन (1 यू / एमएल) के साथ रक्त को बाहर निकालें।
- दाता फेफड़े को अभी भी बर्फ-ठंडे गीले बाँझ धुंध के साथ लपेटकर वक्ष गुहा में रखें।
- प्राप्तकर्ता के पीवी में दाता के कफ पीवी डालें, और फिर पूर्वस्थित 7-0 नायलॉन सीवन (चित्रा 6) के साथ सुरक्षित करें।
- ब्रोन्कियल (बीआर) एनास्टोमोसिस
- प्राप्तकर्ता के बीआर के चारों ओर 7-0 नायलॉन सीवन रखें।
- वान्नास-ट्यूबिंगन स्प्रिंग कैंची के साथ ऊपरी और निचले खंड के वायुमार्ग को जितना संभव हो उतना दूर से काटकर प्राप्तकर्ता के बीआर को संक्रमित करें।
- दाता के कफ वाले बीआर को प्राप्तकर्ता के बीआर में डालें और पूर्वस्थिति 7-0 नायलॉन सीवन (चित्रा 6) के साथ सुरक्षित करें।
- फुफ्फुसीय धमनी (पीए) एनास्टोमोसिस:
- प्राप्तकर्ता के पीए के चारों ओर 7-0 नायलॉन सीवन रखें।
- प्राप्तकर्ता के पीए को उसके एडवेंटियल शीथ से इंजेक्ट करें, वाहिका की परिधि के आधे हिस्से को वेन्नास-ट्यूबिंगन स्प्रिंग कैंची के साथ इंजेक्ट करें, और फिर इंसुलिन सिरिंज का उपयोग करके पीए में 0.2 एमएल हेपरिनाइज्ड सेलाइन (1 यू / एमएल) के साथ रक्त को बाहर निकालें।
- दाता के कफ पीए को प्राप्तकर्ता के पीए में डालें और पूर्वस्थिति 7-0 नायलॉन सीवन (चित्रा 6) के साथ सुरक्षित करें।
6. रीपरफ्यूजन
- प्रत्यारोपित दाता फेफड़े के पुन: छिड़काव और वेंटिलेशन की अनुमति देने के लिए हिलम पर यासरगिल क्लैंप को हटा दें (चित्रा 7)।
- माइक्रो विच्छेदन स्प्रिंग कैंची और फोर्सप्स का उपयोग करके प्राप्तकर्ता के मूल बाएं फेफड़े को विच्छेदित करें।
- प्राप्तकर्ता के वक्ष में प्रत्यारोपित बाएं फेफड़े को सावधानीपूर्वक पुनर्स्थापित करें।
- 6-0 नायलॉन सीवन का उपयोग करके थोराकोटॉमी चीरा बंद करें।
- पसलियों के चारों ओर सरल डबल गांठों के साथ तीन 6-0 नायलॉन सीवन रखें जो 4वीं पसली से बेहतर और 5वीं पसली से नीचे हैं (चित्र 8 ए)।
- तीन सीवन को एक साथ इकट्ठा करने के लिए हेमोस्टैट्स का उपयोग करें (चित्रा 8 बी)।
- वेंटिलेशन सेटिंग्स में पीआईपी को 6 सेमीएच2ओ तक बढ़ाएं।
- घाव को बंद करने के लिए खींचकर एक ही समय में सभी तीन समुद्री मील को एक साथ बांधें (चित्रा 8 सी)।
- पीआईपी को तुरंत 2 सेमीएच2ओ तक कम करें।
- 6-0 नायलॉन सीवन के साथ त्वचा को बंद करें।
नोट: हमारी प्रयोगशाला प्रत्यारोपण के बाद तीव्र चरण का अध्ययन करती है, इसलिए इस मॉडल में प्राप्तकर्ता चूहा वेंटिलेशन और संज्ञाहरण के तहत प्रत्यारोपण के बाद 3 घंटे तक जीवित रहता है और फिर नमूने एकत्र किए जाते हैं।
7. प्रयोगात्मक नमूनों का संग्रह (प्लाज्मा, फेफड़े के ऊतक)
- नियंत्रण नमूनों के लिए, 3 घंटे की अवधि शुरू होने के बाद दाता के दाहिने लोब एकत्र करें।
- प्रोटीन या आरएनए अभिव्यक्ति विश्लेषण के लिए बेहतर लोब और पोस्ट-कैवल लोब को स्नैप-फ्रीज करें, हिस्टोलॉजी के लिए मध्य लोब को संरक्षित करें, और गीले-से-सूखे वजन अनुपात के लिए अवर लोब का उपयोग करें (चित्रा 9 ए)।
- 3 घंटे के समय के अंत से 10 मिनट पहले, जुगुलर नस में इंसुलिन सिरिंज के साथ हेपरिन (1,000 यू / किग्रा) इंजेक्ट करके प्राप्तकर्ता के नमूने काटने के लिए तैयार रहें।
नोट: हेपरिन का यह प्रशासन फेफड़ों में रक्त के थक्कों को रोकता है और खरीद के समय अधिक गहन फ्लशिंग की अनुमति देता है। - प्लाज्मा संग्रह
- 3 घंटे की अवधि के अंत में, आईवीसी के माध्यम से एक सिरिंज के साथ 1 एमएल रक्त एकत्र करें।
- प्लाज्मा की कटाई के लिए बर्फ पर स्टोर करें और फिर 10 मिनट के लिए 2,000 x g पर सेंट्रीफ्यूज करें।
- प्राप्तकर्ता चूहे को आईवीसी को काटकर इच्छामृत्यु करें ताकि उत्सर्जन की अनुमति मिल सके।
- वक्ष मेहराब के साथ डायाफ्राम को विच्छेदित करें और पसली के पिंजरे को विच्छेदित करके वक्ष गुहा को उजागर करें।
- यदि वांछित (वैकल्पिक) तो देशी या प्रत्यारोपित फेफड़ों से बीएएल तरल पदार्थ एकत्र करें।
नोट: यदि फेफड़ों पर गीला-से-सूखा वजन अनुपात या हिस्टोलॉजी किया जा रहा है, तो बीएएल द्रव संग्रह नहीं किया जाना चाहिए क्योंकि यह परिणामों को प्रभावित कर सकता है।- श्वासनली के चारों ओर 4-0 रेशम सीवन पिरोएं और द्रव रिसाव को रोकने के लिए श्वासनली और इंटुबैशन ट्यूब के चारों ओर एक तंग दोहरी गाँठ बांधें।
- दाएं लोब और बाएं लोब से बीएएल द्रव संग्रह के लिए बर्फ-ठंडे पीबीएस की मात्रा की गणना करें।
नोट: दाएं फेफड़े के लिए आयतन अनुपात 63% है जबकि बाएं फेफड़े के लिए आयतन अनुपात 37% 16 है। इसलिए, प्रत्येक पक्ष में डालने के लिए पीबीएस की मात्रा निर्धारित करने के लिए, मात्रा की गणना ज्वारीय आयतन (टीडी = 7.2 एमएल / किग्रा) के दोगुने के रूप में की जानी चाहिए, जो दाएं फेफड़े के लिए 63% और बाएं फेफड़े के लिए 37% से गुणा होती है। - बाएं फेफड़े के हिलर क्षेत्र (चित्रा 10 ए) पर एक यासरगिल क्लैंप रखें, और, एंजियो-कैथेटर से जुड़े सिरिंज के साथ, दाएं फेफड़े (प्राप्तकर्ता के मूल लोब) में बर्फ-ठंडे पीबीएस की गणना की गई मात्रा डालें और सिरिंज प्लंजर पर धीरे से खींचकर बीएएल द्रव एकत्र करें। दो बार प्रदर्शन करें।
नोट: किसी को स्थापित तरल पदार्थ की 70-80% वसूली की उम्मीद करनी चाहिए। - बाएं फेफड़े पर यासरगिल क्लैंप को हटा दें और क्लैंप को दाएं फेफड़े के हिलर क्षेत्र पर रखें (चित्रा 10 बी)।
- प्रत्यारोपित बाएं लोब से बीएएल तरल पदार्थ को उसी तरह इकट्ठा करें जैसे इसे दाएं लोब के लिए एकत्र किया गया था, और फिर दाएं फेफड़े के हिलर क्षेत्र पर क्लैंप को हटा दें।
- दाएं और बाएं ऑरिकल्स को माइक्रो विच्छेदन स्प्रिंग कैंची के साथ काटें और ट्यूबिंग से जुड़े 18 जी एंजियो-कैथेटर का उपयोग करके पीए के माध्यम से गुरुत्वाकर्षण द्वारा फेफड़ों को फ्लश करें और 28सेमीएच 2ओ पर लटकने वाले 20 एमएल प्री-चिल्ड संरक्षण समाधान के साथ एक सिरिंज।
- प्राप्तकर्ता के फेफड़े से नमूने एकत्र करें।
- प्रोटीन या आरएनए अभिव्यक्ति विश्लेषण के लिए बेहतर लोब और पोस्ट-कैवल लोब को स्नैप-फ्रीज करें, हिस्टोलॉजी के लिए मध्य लोब को संरक्षित करें, और गीले-से-सूखे वजन अनुपात के लिए अवर लोब का उपयोग करें) (चित्रा 9 ए)।
- बाएं प्रत्यारोपित बाएं लोब को तीन भागों में विभाजित करें: स्नैप-जमे हुए के लिए एकत्र किया गया ऊपरी क्षेत्र, हिस्टोलॉजी के लिए मध्य क्षेत्र, और गीले-से-सूखे वजन अनुपात के लिए निचला क्षेत्र (चित्रा 9 बी)।
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Representative Results
फुफ्फुसीय एडिमा को मापने के लिए, गीले-से-सूखे वजन अनुपात की गणना की गई थी। दाता के मूल लोब, प्रत्यारोपित लोब, और प्राप्तकर्ता के मूल लोब को प्रोटोकॉल में वर्णित के रूप में एकत्र किया गया था और गीले वजन के लिए तुरंत वजन किया गया था, 48 घंटे के लिए 60 डिग्री सेल्सियस पर सुखाया गया था, और फिर सूखे वजन के लिए फिर से वजन किया गया था। एक बढ़ा हुआ गीला-से-सूखा वजन अनुपात फुफ्फुसीय एडिमा का संकेत होगा। हमारे परिणामों से संकेत मिलता है कि प्रत्यारोपित लोब में दाता या प्राप्तकर्ता के मूल लोब (पी = 0.0050, एन = 6 / समूह) की तुलना में गीले-से-सूखे वजन अनुपात में उल्लेखनीय वृद्धि हुई थी; चित्र 11)।
| कफ के लिए एंजियो-कैथेटर का आकार | |||
| चूहे के शरीर का वजन (जी) | पीए | Br | पीवी |
| 180-200 | 20 G | 18 G | 16 G |
| 200-230 | 18 G | 16 G | 14 G |
| 230-250 | 18 G | 14 G | 14 G |
| 250-270 | 18 G | 14 G | 12 - 14 G |
| 270 से अधिक | 16 G | 14 G | 12 G |
तालिका 1. कफ के लिए आकार गाइड। फुफ्फुसीय धमनी (पीए), ब्रोंकस (बीआर), या फुफ्फुसीय नस (पीवी) का आकार शरीर के वजन से संबंधित है। शरीर के वजन के आधार पर और आप किस प्रकार का कफ बना रहे हैं, अनुशंसित एंजियो-कैथेटर आकार दिया गया है।
चित्र 1. सर्जिकल उपकरण। (ए) फाइन कैंची, (बी) फोर्सप्स, (सी-ई) माइक्रोसर्जिकल फोर्सप्स, (एफ) ड्यूमोंट # 5 बारीक फोर्स, (जी) वन्नास-ट्यूबिंगन स्प्रिंग कैंची और कैस्ट्रोविजो माइक्रो विच्छेदन कैंची, (एच) हलस्टेड-मच्छर हेमोस्टैट, (जे) रिट्रैक्टर, (के) यासरगिल क्लैंप, (एल) डिफेनबैक बुलडॉग क्लैंप, (एम) घुमावदार हेमोस्टैट, और (एन) यासरगिल क्लैंप एप्लिकेट। सभी उपकरणों को 30 मिनट के लिए 121 डिग्री सेल्सियस पर ऑटोक्लेव किया जाना चाहिए। कृपया इस आंकड़े का एक बड़ा संस्करण देखने के लिए यहां क्लिक करें।
चित्र 2. एंजियो-कैथेटर और रिब-बैक सर्जिकल ब्लेड # 11 के विभिन्न आकारों के साथ कफ तैयार करना। कफ के लिए चुने गए एंजियो-कैथेटर का आकार कफ आकार गाइड (तालिका 1) द्वारा निर्धारित किया जाता है जो चूहे के शरीर के वजन को ध्यान में रखता है और क्या कफ फुफ्फुसीय धमनी (पीए), ब्रोंकस (बीआर), या फुफ्फुसीय नस (पीवी) के लिए है। एंजियो-कैथेटर (ए) 20 जी, (बी) 18 जी, (सी) 16 जी, (डी) 14 जी, या (ई) 12 जी को प्रोटोकॉल में वर्णित (एफ) रिब-बैक सर्जिकल ब्लेड # 11 के साथ काटा जाता है, और आवश्यकतानुसार खारा में संग्रहीत किया जाता है। (जी) कफ बॉडी की लंबाई 2 मिमी है और कफ बॉडी को संभालने के लिए कफ बॉडी के शीर्ष पर 1 मिमी एक्स 1 मिमी टैब (चौड़ाई एक्स ऊंचाई) छोड़ा गया है। कृपया इस आंकड़े का एक बड़ा संस्करण देखने के लिए यहां क्लिक करें।
चित्र 3. गर्म इस्किमिया। फेफड़ों को फुफ्फुसीय धमनी के माध्यम से संरक्षण समाधान के साथ फ्लश किया जाता है, हवा की ज्वारीय मात्रा से दोगुना फुलाया जाता है, और फिर एक अंडर पैड के साथ लपेटा जाता है और चूहे को 1 घंटे के लिए शरीर के सामान्य तापमान पर रखने के लिए सर्जरी वार्मिंग बोर्ड पर रखा जाता है।
चित्र 4. दाता फेफड़े पीवी, पीए और बीआर का कफ। (ए) फुफ्फुसीय नस, पीवी (बी) फुफ्फुसीय धमनी, पीए, या (सी) ब्रोन्कस, बीआर, को ठीक से आकार के कफ के माध्यम से डाला जाता है, जो 8-0 के साथ सुरक्षित होता है नायलॉन सीवन, और (डी) तब बाँझ धुंध पर संग्रहीत बर्फ पर बाँझ पेट्री डिश पर बर्फ-ठंडे खारा के साथ कम हो जाता है। कृपया इस आंकड़े का एक बड़ा संस्करण देखने के लिए यहां क्लिक करें।
चित्र 5. 4 वें इंटरकोस्टल स्पेस पर मापना और विच्छेदन करना। (ए) प्राप्तकर्ता चूहे को लापरवाह रखा जाता है, और छाती को सुप्रास्टर्नल नॉच से ज़िफॉइड प्रक्रिया तक मापा जाता है और एक रेखा खींची जाती है। (बी) इस रेखा के मध्य बिंदु पर, बाईं ओर एक और रेखा आधी लंबाई पर खींची जाती है। (सी) इस रेखा के साथ, माइक्रोसर्जन को एक ऐसे क्षेत्र के लिए महसूस करना चाहिए जहां हृदय आवेग सबसे मजबूत है ताकि 4वें इंटरकोस्टल स्पेस (लाल सर्कल) के उचित स्थान को सुनिश्चित किया जा सके। (डी) त्वचा और मांसपेशियों को फिर बारीक कैंची से विच्छेदित किया जाता है। (ई) रिट्रैक्टर का उपयोग तब व्यापक रूप से जगह खोलने के लिए किया जाता है। कृपया इस आंकड़े का एक बड़ा संस्करण देखने के लिए यहां क्लिक करें।
चित्र 6. एनास्टोमोसिस। दाता के कफ (ए) पीवी (बी) बीआर, या (सी) पीए को प्राप्तकर्ता के पीवी, बीआर या पीए में डाला जाता है, और फिर 7-0 नायलॉन सीवन के साथ सुरक्षित किया जाता है। कृपया इस आंकड़े का एक बड़ा संस्करण देखने के लिए यहां क्लिक करें।
चित्र 7. रीपरफ्यूजन। एनास्टोमोस पूरा होने के बाद, क्लैंप को हटाकर रीपरफ्यूजन शुरू किया जा सकता है, और प्राप्तकर्ता चूहा वेंटिलेशन और संज्ञाहरण के तहत 3 घंटे तक जीवित रहता है। कृपया इस आंकड़े का एक बड़ा संस्करण देखने के लिए यहां क्लिक करें।
चित्र 8. घाव बंद होना। (ए) सरल डबल गांठ के साथ तीन 6-0 नायलॉन सीवन पसलियों के चारों ओर 4 वीं पसली से बेहतरऔर 5 वीं पसली से नीचे रखे जाते हैं। (बी) तीन सीवन को एक साथ इकट्ठा करने के लिए दोनों हाथों में हेमोस्टैट्स का उपयोग करें और वेंटिलेशन सेटिंग्स में पीआईपी को 6 सेमीएच2ओ तक बढ़ाएं। (C) घाव को बंद करने के लिए ऊपर और दूर खींचकर एक ही समय में सभी तीन गांठों को एक साथ बांधें, PEEP को तुरंत 2 cmH2O तक कम करें, और 6-0 नायलॉन सीवन के साथ त्वचा को बंद करें। कृपया इस आंकड़े का एक बड़ा संस्करण देखने के लिए यहां क्लिक करें।
चित्र 9. फेफड़े के ऊतक संग्रह। (ए) दाता या प्राप्तकर्ता के मूल लोब के लिए, बेहतर लोब और पोस्ट-कैवल लोब को प्रोटीन या आरएनए अभिव्यक्ति विश्लेषण के लिए फ्रीज किया जा सकता है, मध्य लोब को हिस्टोलॉजी के लिए संरक्षित किया जा सकता है, और अवर लोब का उपयोग गीले-से-सूखे वजन अनुपात के लिए किया जा सकता है। (बी) प्रत्यारोपित लोब के लिए, ऊपरी क्षेत्र को स्नैप जमे हुए, मध्य क्षेत्र को हिस्टोलॉजी के लिए, या गीले-से-सूखे वजन अनुपात के लिए निचले क्षेत्र को इकट्ठा करें। कृपया इस आंकड़े का एक बड़ा संस्करण देखने के लिए यहां क्लिक करें।
चित्र 10. चयनात्मक बीएएल द्रव संग्रह के लिए क्लैंप का अनुप्रयोग। पूल किए गए नमूने से बचने के लिए, बीएएल द्रव को दाएं (देशी) या बाएं (प्रत्यारोपित) फेफड़े से एकत्र किया जा सकता है। (ए) दाएं लोब से बीएएल तरल पदार्थ एकत्र करने के लिए बाएं फेफड़े के हिलर क्षेत्र को दबाया जा सकता है। (बी) बाएं लोब से बीएएल तरल पदार्थ एकत्र करने के लिए दाएं फेफड़े के हिलर क्षेत्र को दबाया जा सकता है। कृपया इस आंकड़े का एक बड़ा संस्करण देखने के लिए यहां क्लिक करें।
चित्र 11. गीला-से-शुष्क वजन अनुपात। वेट-टू-ड्राई वजन अनुपात की गणना फुफ्फुसीय एडिमा को मापने के लिए की गई थी और इसका उपयोग यह इंगित करने के लिए किया जा सकता है कि प्रत्यारोपण कितनी अच्छी तरह से चला गया। दाता के मूल लोब, प्रत्यारोपित लोब, या प्राप्तकर्ता के मूल लोब को प्रोटोकॉल में वर्णित के रूप में एकत्र किया गया था और गीले वजन के लिए तुरंत वजन किया गया था, 48 घंटे के लिए 60 डिग्री सेल्सियस पर सुखाया गया था, और फिर सूखे वजन के लिए फिर से वजन किया गया था। गीले वजन और सूखे वजन का अनुपात लिया गया था। दाता या प्राप्तकर्ता के मूल लोब की तुलना में प्रत्यारोपित लोब के लिए अनुपात में काफी वृद्धि हुई थी। एन = 6 चूहे / समूह और सलाखों एसडी ± का प्रतिनिधित्व करते हैं। सांख्यिकीय विश्लेषण टुकी के पोस्ट-हॉक विश्लेषण के साथ एनोवा का उपयोग करके किया गया था। ** पी<0.01. कृपया इस आंकड़े का एक बड़ा संस्करण देखने के लिए यहां क्लिक करें।
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Discussion
इस रिपोर्ट में, हमने प्रक्रिया को अनुकूलित करने के लिए चूहे फेफड़े के प्रत्यारोपण प्रोटोकॉल में कई महत्वपूर्ण चरणों में हस्तक्षेप किया है। जबकि चूहे के फेफड़ों के प्रत्यारोपण के लिए विभिन्न कफिंगतकनीकों की सूचना दी गई है 1,2,3,4,5,6,7,8,9,15, यह प्रक्रिया अभी भी माइक्रोसर्जनों के लिए लागू करने के लिए व्यक्तिपरक और कठिन हो सकती है। हमने इस बात पर जोर दिया है कि प्रत्यारोपित फेफड़ों में रक्त या बीआर प्रदान करने के लिए पीवी और पीए के लिए कफ के उचित आकार का उपयोग किया जाना चाहिए, और हमने चूहे के शरीर के वजन के आधार पर इष्टतम कफ आकार निर्धारित करने के लिए एक अधिक उद्देश्यपूर्ण तरीका प्रदान किया है। फेफड़ों के गर्म इस्किमिया को अधिक लगातार प्रेरित करने के लिए, हमने फेफड़ों की मुद्रास्फीति, क्लैंपिंग और 1 घंटे के गर्म इस्किमिया समय के दौरान चूहे को गर्म रखने की सिफारिशें दी हैं। प्राप्तकर्ता की प्रक्रिया के दौरान, 4वें इंटरकोस्टल स्पेस का पता लगाना मुश्किल हो सकता है। हमने सिफारिश की है कि कोई भी हृदय आवेग के लिए माप और भावना की एक विधि को नियोजित करके इस स्थिति का अधिक सटीक रूप से पता लगा सकता है। घाव को बेहतर ढंग से बंद करने के लिए, हमने सीवन को संभालने और पीआईपी को समायोजित करने की एक तकनीक भी दिखाई जो घाव को अधिक तेज़ी से बंद कर सकती है और फेफड़ों की अतिमुद्रास्फीति और चोट को रोक सकती है। अंत में, हमने ऊतक और बीएएल द्रव संग्रह के लिए रणनीतियों को प्रस्तुत किया है जो नमूनों के अधिक उद्देश्य कटाई की अनुमति देते हैं जिनकी तुलना प्रयोगों और विभिन्न शरीर के वजन में की जा सकती है।
वर्णित तकनीकों की सबसे महत्वपूर्ण सीमा सामान्य रूप से प्रत्यारोपण ऑपरेशन की तीव्र सीखने की अवस्था है। सीखने की अवस्था वह है जिसे लगातार शल्य चिकित्सा अभ्यास के साथ और साहित्य में समस्या निवारण तकनीकों की समीक्षा से कम किया जा सकता है। एक और सीमा यह है कि यह मॉडल आईआरआई और प्रत्यारोपण के तीव्र चरण का अध्ययन करता है जहां जैव रासायनिक परिवर्तन पहली बार होते हैं, जो हमारी प्रयोगशाला का फोकस है। भविष्य के अध्ययनों को प्रत्यारोपण के बाद लंबी समय सीमा पर ब्रोन्कियल और संवहनी पैटेंसी का परीक्षण करना चाहिए।
कुल मिलाकर, प्रत्यारोपण और इस्किमिया-रीपरफ्यूजन चोट (आईआरआई) के लिए चिकित्सीय हस्तक्षेप का मूल्यांकन करने के लिए एक व्यवहार्य छोटा पशु प्रत्यारोपण मॉडल महत्वपूर्ण है। चूहे के फेफड़े प्रत्यारोपण मॉडल, विशेष रूप से, छोटे जानवरों के पूर्व विवो फेफड़ों के छिड़काव (ईवीएलपी) 17 का अध्ययन करने के लिए एक सहायक के रूप में उपयोगी है। यह मुराइन फेफड़ों के प्रत्यारोपण के लिए एक अधिक व्यवहार्य विकल्प भी है, क्योंकि बड़ा शारीरिक आकार शोधकर्ता को अधिक गहराई से विश्लेषण के लिए पर्याप्त ऊतक प्राप्त करने की अनुमतिदेता है। इसके अतिरिक्त, नए छोटे अणु और प्रोटीन थेरेप्यूटिक्स 19,20,21,22 के साथ चिकित्सीय हस्तक्षेप के बाद दाता फेफड़ों के एलोग्राफ्ट्स की व्यवहार्यता निर्धारित करने के लिए मॉडल आवश्यक है या तो दाता को, ईवीएलपी17 के माध्यम से दाता अंग को, या प्राप्तकर्ता को और विवो डेटा में इकट्ठा करने के लिए एक शक्तिशाली अवसर प्रदान करता है। इस रिपोर्ट में हम जिन अनुकूलनों का वर्णन करते हैं, वे माइक्रोसर्जनों के लिए महत्वपूर्ण हैं जो अपने सीखने की अवस्था को कम करने और कुछ व्यक्तिपरकता को दूर करने का लक्ष्य रखते हैं। एक मानकीकृत फेफड़े कफिंग आकार एल्गोरिथ्म का उपयोग करके, सर्जिकल दृष्टिकोण को सुव्यवस्थित और अधिक उद्देश्यपूर्ण किया जा सकता है। प्रत्यारोपण अवधि के समापन पर, बीएएल द्रव और ऊतक संग्रह के लिए वर्णित संरचित दृष्टिकोण भी जानवरों का जिम्मेदार उपयोग और प्रति प्रयोग एकत्र किए गए डेटा के प्रभाव को अधिकतम करके माइक्रोसर्जन के समय का कुशल उपयोग प्रदान करता है।
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Disclosures
बीएडब्ल्यू, वाईजीएल और जेएलके को राष्ट्रीय स्वास्थ्य संस्थान (एनआईएच) अनुदान आर01एचएल143000 के माध्यम से समर्थन दिया जाता है। बीएडब्ल्यू को रक्षा विभाग (डीओडी) अनुदान W81XWH1810787 के माध्यम से समर्थित किया जाता है। एसएमबी एनआईएच अनुदान आर01डीके123475 के माध्यम से समर्थित है। जेएम को एनआईएच अनुदान एआर061385, एआर070752, डीके106394 और एजी056919 के साथ-साथ डीओडी अनुदान डब्ल्यू81एक्सडब्ल्यूएच-18-1-0787 के माध्यम से समर्थित किया जाता है।
Acknowledgments
कोई नहीं।
Materials
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| 12 Gauge angio-catheter | BD | 382277 | |
| 14 Gauge angio-catheter | B. Braun | 4251717-02 | |
| 16 Gauge angio-catheter | B. Braun | 4252586-02 | |
| 18 Gauge angio-catheter | B. Braun | 4251679-02 | |
| 20 Gauge angio-catheter | B. Braun | 4252527-02 | |
| 4-0 silk suture | Surgical Specialties Corp. | SP116 | |
| 6-0 nylon suture | AD Surgical | S-N618R13 | |
| 7-0 nylon suture | AD Surgical | S-N718SP13 | |
| 8-0 nylon suture | AD Surgical | XXS-N807T6 | |
| Betadine Spray | Avrio Health L.P | UPC 367618160039 | |
| Clippers | VWR | MSPP-023326 | |
| Castroviejo micro dissecting spring scissors | Roboz Surgical Instrument Co | RS-5668 | |
| Dumont #5 - Fine Forceps | Fine Science Tools | 11254-20 | |
| Electrocautery | Macan | MV-7A | |
| Endotracheal intubation kit | Kent Scientific | ETI-MSE | |
| Forceps | Fine Science Tools | 11027-12 | |
| Halsted-mosquito hemostat | Roboz Surgical Instrument Co | RS-7112 | |
| Heparin | Fresnius Medical Care | C504701 | |
| Insulin syringe | Life Technologies | B328446 | |
| Isoflurane | Piramal Critical Care | NDC 66794-017-25 | |
| Isopropyl Alcohol Swabs | BD | 326895 | |
| Ketamine | Hikma Pharmaceuticals PLC | NDC 0413-9505-10 | |
| Dieffenbach Bulldog Clamp | World Precision Instruments | WPI14117 | |
| Needle holder/Forceps, Curved | Micrins | MI1542 | |
| Needle holder/Forceps, Straight | Micrins | MI1540 | |
| Perfadex Plus (Organ Preservation Solution) | XVIVO Perfusion AB | REF# 19950 | |
| PhysioSuite | Kent Scientific | PS-MSTAT-RT | Used to check SpO2 and heartbeat |
| Retractor | Roboz Surgical Instrument Co | RS-6560 | |
| Saline | PP Pharmaceuticals LLC | NDC 63323-186-10 | |
| Scissors | Fine Science Tools | 14090-11 | |
| SomnoSuite Small Animal Anesthesia System | Kent Scientific | SS-MVG-Module | |
| Sterile Cotton Gauze Pad | Fisherbrand | 22-415-469 | |
| Surgical Microscope | Leica | M500-N w/ OHS | |
| Syringe 5mL | BD | 309646 | |
| Vannas-Tubingen Spring Scissors | Fine Science Tools | 15008-08 | |
| Xylazine | Korn Pharmaceuticals Corp | NDC 59399-110-20 | |
| Yasargil Clamp | Aesculap, Inc | FT351T | Used to clamp bronchus |
| Yasargil Clamp | Aesculap, Inc | FT261T | Used to clamp hilum |
| Yasargil Clamp Applicator | Aesculap, Inc | FT484T |
References
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