Her præsenterer vi en protokol til etablering af højtydende væskekromatografi (HPLC) kombineret med kemisk fingeraftryksgenkendelse af flere mønstre, hvilket giver en ny strategi til effektivt at identificere de ægte sorter af Clematidis Armandii Caulis og dets forfalskningsmidler.
En metode til identifikation af kinesiske medicinske materialer og deres relaterede forfalskninger blev konstrueret ved at tage Clematidis Armandii Caulis (Chuanmutong, en universelt anvendt traditionel kinesisk medicin) som et eksempel. Ti batcher af ægte Chuanmutong-sorter og fem batcher af relaterede forfalskningsmidler blev analyseret og sammenlignet baseret på højtydende væskekromatografi (HPLC) fingeraftryk kombineret med kemometri, herunder klyngeanalyse (CA), hovedkomponentanalyse (PCA) og ortogonal delvis mindste kvadratdiskriminationsanalyse (OPLS-DA). Derudover blev indholdet af β-sitosterol bestemt. Chuanmutongs kontrolkemiske fingeraftryk blev etableret, og 12 almindelige toppe blev identificeret. Ligheden mellem fingeraftrykket af 10 partier ægte Chuanmutong-sorter og kontrolfingeraftrykket var 0,910-0,989, mens ligheden mellem fem batcher af forfalskningsmidler kun var 0,133-0,720. Baseret på de almindelige toppe i kromatogrammet blev 15 batcher af prøver klassificeret i tre indholdsniveauer af PCA og blev aggregeret i fire kategorier af CA, hvilket opnåede en klar sondring mellem autentisk Chuanmutong og forfalskninger af Chuanmutong. Desuden blev syv differentielle komponenter, der effektivt kan identificere autentiske Chuanmutong og forfalskninger af Chuanmutong, fundet gennem OPLS-DA. Det β-sitosterol indhold af 10 partier ægte Chuanmutong sorter var 97,53-161,56 μg/g, mens indholdet af β-sitosterol i de fem partier af forfalskninger varierede meget, blandt hvilke β-sitosterol indholdet af Clematis peterae Hand.-Mazz. og Clematis gouriana Roxb. Var. finetii Rehd. et Wils. var betydeligt lavere end for autentiske sorter af Chuanmutong. HPLC-indekskomponentindholdet og den kemiske fingeraftryksgenkendelsesmetode med flere mønstre, der er etableret i denne undersøgelse, giver en ny strategi til effektivt at identificere autentiske kinesiske medicinske materialer og relaterede forfalskningsmidler.
Chuanmutong, tør Caulis af Clematis armandii Franch. eller Clematis montana Buch.-Ham., er en traditionel kinesisk medicin, der almindeligvis anvendes i klinikker 1,2,3. Det bruges til behandling af urinproblemer, ødem, sår på tungen og munden, nedsat mælkesekretion, ledstivhed og muskelsmerter forårsaget af fugtig varme4. Chuanmutong er altid opnået fra vilde sorter, hovedsageligt fordelt i det sydvestlige Kina, især i Sichuan, hvor den bedste kvalitet kan findes 5,6. Det er vanskeligt at skelne mellem autentiske sorter og deres nært beslægtede forfalskninger på grund af deres lignende egenskaber 7,8,9,10. Kvalitetsstandarden for Chuanmutong i 2020-udgaven af kinesisk farmakopé fastsætter kun egenskaber, mikroskopisk identifikation og tyndlagsidentifikation uden indholdsbestemmelse, som ikke effektivt kan identificere forfalskninger og derfor har potentielle risici. Desuden er der få rapporter, der sammenligner og identificerer Chuanmutong og beslægtede planter. Derfor er en kvalitetskontrolmetode for at sikre ægtheden af Chuanmutong værd at undersøge yderligere.
De kemiske bestanddele af Chuanmutong består hovedsageligt af pentacykliske triterpenoider af oleanan-typen og deres glycosider, flavonoider og organiske syrer11,12,13,14. Blandt dem har oleanolsyre, β-sitosterol, stigmasterol og ergosterol vanddrivende virkninger af forskellig intensitet, hvilket kan være potentielle farmakodynamiske stoffer til fremme af diurese og lindring af stranguri15,16. Kemiske fingeraftryk opnås ved at adskille og detektere mange kemiske komponenter indeholdt i prøver ved højtydende væskekromatografi (HPLC), gaskromatografi (GC) osv. Vedtagelse af passende statistiske analysemetoder til analyse af Chuanmutongs egenskaber kan bestemme den overordnede kvalitetskontrol og videnskabelige identifikation af traditionel kinesisk medicin17,18,19.
I denne undersøgelse blev 10 partier Chuanmutong autentiske sorter og fem partier af forfalskningsmidler indsamlet. Deres kvalitet blev sammenlignet og analyseret ved HPLC-fingeraftryksmetoden kombineret med multimønstergenkendelse, herunder klyngeanalyse (CA), hovedkomponentanalyse (PCA), ortogonal delvis mindste kvadraters diskriminationsanalyse (OPLS-CA) og indholdsbestemmelse af den farmakodynamiske komponent. Denne protokol fastlægger en metode til identifikation af autentiske sorter med høj specificitet, en ny strategi for videnskabelig identifikation af autentiske sorter og forfalskninger af kinesiske lægemidler.
Prøveindsamlingen til forskning er det første vigtige skridt til at konstruere multi-mønster genkendelse til at identificere ægtheden af kinesiske medicinske materialer. Gennem markedsundersøgelser fandt vi, at Sichuan Ya’an, Liangshan og Leshan er de vigtigste produktionsområder for vilde ressourcer i Chuanmutong. De beslægtede sorter af samme slægt har også samme geografiske udbredelse 6,20; CC, DC, DE, XS og SMT misbruges ofte som Chuangmutong<sup cla…
The authors have nothing to disclose.
Dette arbejde blev støttet af Project of Sichuan Traditional Chinese Medicine Administration (nr. 2020JC0088, nr. 2021MS203).
Acetic acid | Zhiyuan Chemical Reagent Co., Ltd., Tianjin, China | 2017381038 | |
Acetonitrile | Sigma-Aldrich Trading Co., Ltd., Shanghai, China | WXBD5243V | |
β-Sitosterol | Meisai Biological Technology Co., Ltd., Chongqing, China | 20210201 | |
C18 column | Yuexu Material Technology Co., Ltd., Shanghai, China | Welch Ultimate LP | |
Chuanmutong | Guoqiang Chinese Herbal Pieces Co., Ltd., Sichuan, China | 19020103 | CMT-1 |
Chuanmutong | Hongya Wawushan Pharmaceutical Co., Ltd., Sichuan, China | 200701 | CMT-2 |
Chuanmutong | Hongpu Pharmaceutical Co., Ltd., Sichuan, China | 200701 | CMT-3 |
Chuanmutong | Hongpu Pharmaceutical Co., Ltd., Sichuan, China | 200901 | CMT-4 |
Chuanmutong | Xinrentai Pharmaceutical Co., Ltd., Sichuan, China | 210701 | CMT-5 |
Chuanmutong | Haobo Pharmaceutical Co., Ltd., Sichuan, China | 210401 | CMT-6 |
Chuanmutong | Xinrentai Pharmaceutical Co., Ltd., Sichuan, China | 200901 | CMT-7 |
Chuanmutong | Wusheng Pharmaceutical Group Co., Ltd., Sichuan, China | 201201 | CMT-8 |
Chuanmutong | Limin Chinese Herbal Pieces Co., Ltd., Sichuan, China | 201001 | CMT-9 |
Chuanmutong | Yuhetang Pharmaceutical Co., Ltd., Sichuan, China | 210501 | CMT-10 |
Clematis argentilucida (Levl. et Vant.) W. T. Wang | Madzi Bridge, Sanlang Township, Tianquan County, Sichuan, China | – | CC |
Clematis apiifolia var. obtusidentata Rehd. et Wils. | Heilin Village, Qiliping Township, Hongya County, Sichuan, China | – | DC |
Clematis peterae Hand.-Mazz. | Huangmu Village, Huangmu Township, Hanyuan County, Sichuan, China | – | DE |
Clematis gouriana Roxb. Var. finetii Rehd. et Wils | Mixedang Mountain, Huangwan Township, Emei County, Sichuan, China | – | XS |
Clematis finetiana Levl. et Vaniot. | Wannian Village, Huangwan Township, Emei County, Sichuan, China | – | SMT |
Electronic balance | Haozhuang Hengping Scientific Instrument Co., Ltd., Shanghai, China | FA1204 | |
Ergosterol | Meisai Biological Technology Co., Ltd, Chongqing, China | 20210201 | |
Ethanol | Kelon Chemical Co., Ltd., Chengdu, China | 2021112602 | |
Ethyl acetate | Zhiyuan Chemical Reagent Co., Ltd., Tianjin, China | 2017042043 | |
Formic acid | Kelon Chemical Co., Ltd., Chengdu, China | 2016062901 | |
High performance liquid chromatography | Agilent, USA. | 1260 | |
IBM SPSS Statistics version 26.0 | International Business Machines Corporation, USA | – | |
Methanol | Sigma-Aldrich Trading Co., Ltd., Shanghai, China | WXBD6409V | |
Methanol | Kelon Chemical Co., Ltd., Chengdu, China | 202010302 | |
n-butyl alcohol | Zhiyuan Chemical Reagent Co., Ltd., Tianjin, China | 2020071047 | |
Petroleum ether | Zhiyuan Chemical Reagent Co., Ltd., Tianjin, China | 2020090125 | |
Phosphoric acid | Comeo Chemical Reagent Co., Ltd., Tianjin, China | 20200110 | |
SESCF-TCM version 2012 | National Pharmacopoeia Commission, China | – | http://114.247.108.158:8888/login |
Stigmasterol | Meisai Biological Technology Co., Ltd., Chongqing, China | 20210201 | |
Trichloromethane | Sinopharm Group Chemical Reagent Co., Ltd., Shanghai, China | 20200214 | |
Umetrics SIMCA version 14.1.0.2047 | Umetrics, Sweden | – | https://www.sartorius.com/en/products/process-analytical-technology/data-analytics-software/mvda-software/simca/simca-free-trial-download |
Ultrapure water machine | Youpu Ultrapure Technology Co., Ltd., Sichuan, China | UPH-II-10T | |
Ultrasonic cleaner | Kunshan Hechuang Ultrasound Instrument Co., Ltd., Jiangsu, China | KH3200E |