德罗索菲拉 男性附属腺切除：分离二级细胞的方法

-在解剖显微镜和血清补充介质下，用钳子从每只苍蝇身上取出生殖道。首先，去除可能伴有生殖道的部分消化道。要分离附属腺体和射精管，请取出睾丸、射精球和末梢。 在 PBS 中清洗组织一到两分钟，以去除血清。 然后，将其转移到分离溶液中。

要使腺体内的细胞暴露在分离溶液中，用钳子保持每个腺体的中心，用一对锋利的钳子切开腺体。 取出腺体的近部和射精管，留下含有罕见二级细胞群的腺体末端，这些细胞群负责分泌参与交配的蛋白质。最后，将附属腺尖转移到微型离心机管中，为消化做准备。 在下列协议中，我们将解剖附属腺体，以分离二级细胞进行转录体分析。

-在开始手术之前，切割和火焰轮，宽200微升提示处理腺体， 并通过火焰附近的多个 1000 微升尖端的尖端开启不到一秒钟，以缩小开口。 然后，根据修改后的提示的渴望速度从更窄到更宽。对于附属腺体解剖，将20至25只雄性果蝇放在冰上的玻璃盘中，并使用钳子和解剖显微镜去除一只雄性苍蝇的生殖道。

清除所有其他组织的附属腺对，包括睾丸和射精球，并在室温下将附属腺体转移到含有血清补充介质的玻璃板中。收集20对辅料腺时，在室温下将腺体在PBS盘中清洗一至两分钟。在洗涤结束时，将腺体转移到新鲜准备的分离溶液中，并在解剖显微镜下使用锋利的钳子，以牢牢捏住腺叶的中间。

使用第二对钳子，用锋利的尖端切割组织，将附属腺体的近部区域和射精管从含有二次细胞的腺体部分分离出来。然后，使用湿前火焰圆润宽200微升移液器尖，将腺体转移到1.5毫升管。