Encyclopedia of Experiments: Biology
A subscription to JoVE is required to view this content.
Transcript
Please note that all translations are automatically generated.
- תחת מיקרוסקופ דיסקציה ובמדיה בתוספת סרום, להסיר את מערכת הרבייה מכל זבוב עם מלקחיים. ראשית, להסיר חלקים של מערכת העיכול שאולי ליווה את מערכת הרבייה.
כדי לחשוף את התאים בתוך הבלוטות לפתרון הדיסוציאציה, להחזיק את המרכז של כל בלוטה עם מלקחיים לחתוך דרך הבלוטה עם זוג מלקחיים חדים. הסר את החלק הפרוקסימלי של הבלוטה ואת צינור השפיכה כדי להשאיר מאחור את הקצה הדיסטלי של הבלוטות המכילות את אוכלוסיית התאים המשנית הנדירה האחראית להפרשת חלבונים המעורבים בהזדווגות. לבסוף, להעביר את בלוטת האביזר טיפים צינור מיקרו צנטריפוגה כהכנה לעיכול. בפרוטוקול הבא, אנו לנתח את בלוטות האביזר כדי לבודד תאים משניים לניתוח תעתיק.
- לפני תחילת ההליך, לחתוך ולהבה עגול, רחב 200 טיפים microliter לטיפול בבלוטות, ולהעביר את קצה הפתיחה של כמה 1000 טיפים microliter ליד להבה במשך פחות משנייה אחת כדי לצמצם את הפתחים. לאחר מכן, למיין את הטיפים שונה מ צר יותר לרחב יותר בהתבסס על מהירות השאיפה שלהם. עבור ניתוח בלוטת אביזר, מקום 20 עד 25 drosophila זכר בצלחת זכוכית על קרח ולהשתמש מלקחיים מיקרוסקופ ניתוח כדי להסיר את מערכת הרבייה של זבוב זכר אחד.
לנקות את זוג בלוטת האביזר מכל הרקמות האחרות, כולל האשכים ונורה שפיכה, ולהעביר את בלוטות האביזר לצלחת זכוכית המכילה סרום בתוספת מדיום בטמפרטורת החדר. כאשר נאספו 20 זוגות בלוטות עזר, לשטוף את הבלוטות בצלחת של PBS במשך דקה עד שתי דקות בטמפרטורת החדר. בסוף הכביסה, להעביר את הבלוטות לפתרון דיסוציאציה טרי מוכן, ולהשתמש מלקחיים חדים תחת מיקרוסקופ לנתח לצבוט בחוזקה את אמצע האונה הבלוטות.
באמצעות זוג שני של מלקחיים, לחתוך את הרקמה עם קצה חד כדי להפריד את האזור הפרוקסימלי של בלוטת האביזר ואת צינור השפיכה מהחלק של הבלוטה המכילה תאים משניים.
