수영 유발 마비 (SWIP) 분석: C. 예레건의 도파민 중재 운동을 정량화하는 방법

- 수영-induced 마비, 또는 SWIP 분석, L4 단계 C. 아레간 애벌레 액체로 채워진 유리 반점 플레이트에 전송. 개발 외음부의 존재에 의해 L4 헤르마프로디트 식별.

도파민 매개 수영을 평가하기 위해, C-모양의 신체 굽힘 및 스래싱 동작을 특징으로 웜의 움직임을 기록. 보통, 도파민 뉴런은 시냅스 갈라진 왼쪽으로 도파민을 방출, 이는 차례로, 수신 셀에 도파민 수용체를 결합.

메시지가 전달되면, 도파민은 수용체에서 방출되고, 불바운드 신경 전달물질은 특수 수송 단백질을 통해 도파민 뉴런에 의해 채택되고 재사용될 수 있습니다.

변경 된 도파민 신호와 애벌레에서, 도파민 수송기 또는 도파민 방출을 증가 하는 약물 치료에 돌연변이를 비활성화에 의해 발생, 도파민 시 냅 스 갈라 질 갈라질에 축적.

예제 프로토콜에서는 암페타민으로 처리된 C. elegans에서 수동 및 자동화된 SWIP 분석서의 상세한 데모를 볼 수 있습니다.

- SWIP의 수동 평가의 경우 0.5 밀리마일라 암페타민의 유무에 관계없이 40 마이크로리터를 유리 스팟 플레이트에 추가합니다.

타이머를 시작합니다. 우물에 방출된 웜 수를 기록하고 총 10분 동안 각 분 마크에 SWIP를 나타내는 웜 수를 관찰하고 기록합니다.

절차의 끝에서, 스프레드 시트에 원시 데이터를 복사하고 분석 전반에 걸쳐 테스트 된 웜의 총 수로 각 분에서 마비 웜의 백분율을 계산하고 100배 곱.

대조군 과 암페타민 처리군 간의 통계적 분석은 수행될 수 있다.

수영 유발 마비의 자동화 된 분석을 위해, 추적 소프트웨어 분석을 실행하기 위해 카메라, 웜 추적기 소프트웨어 및 스크립트를 설정합니다.

그런 다음 한 번에 하나의 웜의 수영 비디오를 기록하고 웜 트래커 소프트웨어를 사용하여 바디 굽힘의 빈도를 계산합니다. 추적 소프트웨어와 함께 제공된 스크립트에 따라 웜 스래싱 주파수를 얻고 웜 스래싱 데이터에서 열 맵을 생성합니다.