액체 배양에 RNAi 공급: C. elegans에서 유전자 발현을 녹여 고처리량 방법

- 시작하려면, 카베니실린과 1 밀리풀라 IPTG를 추가하여 S 기저 매체를 포함하는 배양 플라스크를 제어하고 테스트합니다. 성장 단계 1에서 유충을 포함하는 튜브를 몇 분 동안 L1 애벌레라고도 합니다.

비특이적 RNAi 플라스미드를 운반하는 RNAi 박테리아를 유전자 표적화 RNAi를 가진 대조군 플라스크 및 박테리아에 첨가합니다.

유충이 적당한 산소화를 보장하기 위하여 연속적인 동요로 자게하십시오. 유충은 박테리아에 공급합니다.

실시예 프로토콜에서, 우리는 액체 배양에서 daf-2 유전자를 표적으로 하는 RNAi를 가진 L1 애벌레를 취급할 것입니다.

- 치료를 시작하려면, 2,800 밀리리터 Fernbach 배양 플라스크에 동반 텍스트 프로토콜에 설명된 대로 추가 시약과 S 기저 미디어의 207.45 밀리리터를 추가합니다.

L1s를 섭씨 25도 에서 빼내고 15밀리리터 튜브로 이송합니다.

다음으로, 젊은 벌레 수집을 위한 50,000개의 벌레와 100,000개의 벌레를 이전 단계에서 준비한 4개의 Fernbach 문화 플라스크에 추가합니다.

박테리아를 추가 한 후, S 기저와 완전한 벌레 배양300 밀리리터에 총 볼륨을 가지고. 수집 까지 150 RPM흔들리는 인큐베이터에서 25섭씨에서 웜 문화를 배양.