Encyclopedia of Experiments: Biology
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- Preparare le larve di Drosophila per un saggio di sonda di calore, raccogliere animali dello stadio di sviluppo desiderato e trasferire singole larve su una piastra di prova con un sottile film d'acqua. L'acqua consente alle larve di muoversi liberamente senza attaccarsi alla superficie della piastra.
Le larve di Drosophila rilevano stimoli termici nocivi attraverso neuroni sensoriali multidendritici nella loro epidermide noti come nocicettori. Questi non si sparano fino a quando non viene raggiunta una certa soglia sensoriale, come le alte temperature potenzialmente dannose.
Impostare la sonda di calore su una temperatura che superi questa soglia sensoriale e far fuoco ai nocicettori. Premere delicatamente la punta della sonda contro la larva per applicare calore. La larva risponderà alla temperatura nociva con comportamenti termo-nocicettivi, ritirandosi dalla sonda. Interrompere quando la larva presenta un ruolo a 360 gradi lontano dalla sonda di calore o quando è trascorso un tempo definito. Registrare il tempo di risposta. Registrare il tempo di risposta.
Nel protocollo di esempio, vedremo una dimostrazione di un test localizzato della sonda di calore sulle prime larve di Drosophila a terza stella.
- In primo luogo, preimpostare la temperatura della sonda termica sul set point desiderato. Utilizzare un pennello o delle forcep per trasferire delicatamente una singola larva su una piattaforma piatta, assicurando che la lava sia coperta da un sottile film d'acqua.
- Al fine di ridurre al minimo la variazione di pressione, nonché di garantire la corretta posizione e angolo della sonda di calore, la pratica rende perfetti.
- Premere delicatamente la punta della sonda contro la larva al segmento A4, applicando una leggera pressione con la punta a circa un angolo di 45 gradi tra la sonda e la superficie della larva. La pressione dovrebbe causare una leggera indentazione sulla superficie della larva e di solito sarà sufficiente per prevenire la locomozione. Continuare a stimolare la larva fino a quando non viene esibita una risposta di prelievo o fino al raggiunto il taglio di 20 secondi.
Le larve che rispondono in genere mostrano prima un comportamento preliminare di sollevamento della testa e della coda, seguito dal comportamento di astinenza del rotolamento di almeno 360 gradi. Una volta avviato il comportamento di astinenza, rilasciare il contatto con la sonda e registrare la latenza o il tempo impiegato per il ritiro. Se non viene osservato alcun comportamento di prelievo entro 20 secondi, la larva non risponde.
