Эпидермальное лазерное ранение: индуцирование локализованного повреждения для изучения процессов восстановления у C. elegans

- Для начала переложите молодых взрослых червей на свежую агарозную подушечку на горке. Затем добавьте несколько капель 12 миллимолярного раствора левамизола, чтобы парализовать глистов. Накройте червей покровным стеклом и подождите несколько минут. Поместите предметное стекло под вращающийся дисковый конфокальный микроскоп и сфокусируйтесь на боковой наружной поверхности червя.

Эпидермис взрослого червя представляет собой тонкую однослойную структуру, состоящую из многоядерных синцитий, которые образуются в результате слияния клеток. Апикальная поверхность эпидермиса выделяет гибкую коллагеновую кутикулу, в то время как базальная поверхность покрыта тонким слоем внеклеточного матрикса, называемым базальной пластинкой.

Далее лазером наматывают апикальную поверхность эпидермиса. Цитоплазма из поврежденных клеток может вытекать наружу, проявляясь в виде пузыря в месте раны.

Лазерное облучение имеет преимущество перед другими методами, такими как игольное ранение, так как вызывает локализованное нарушение кутикулы и клеток эпидермиса, не повреждая внутренние ткани. В примере протокола мы увидим процесс лазерного ранения у C. elegans.

- Для точного намотки нематод в этом протоколе испо