एपिडर्मल लेजर घायल: सी एलिगेंस में मरम्मत प्रक्रियाओं की जांच करने के लिए स्थानीयकृत क्षति को प्रेरित करना

- शुरू करने के लिए, एक स्लाइड पर एक ताजा एग्राजिंग पैड पर युवा वयस्क कीड़े स्थानांतरित करें। इसके बाद कीड़े को लकवा मारने के लिए 12 मिलीमोलर लेविमिसोल समाधान की कुछ बूंदें जोड़ें। कीड़े को कवरलिप से ढक दें और कुछ मिनटों तक प्रतीक्षा करें। एक कताई डिस्क कॉन्फोकल माइक्रोस्कोप के नीचे स्लाइड रखें और कीड़े की पार्श्व सबसे बाहरी सतह पर ध्यान केंद्रित करें।

वयस्क कीड़ा का एपिडर्मिस एक पतली एकल-स्तरीय संरचना होती है जिसमें बहु-नाभिकीय सिंकिटिया होता है जो कोशिका संलयन घटनाओं से उत्प्रष्: एपिडर्मिस की एपिकल सतह एक लचीली कोलेजनस क्यूटिकल का स्रावित करती है, जबकि बेसल सतह बाह्य बाल लैमिना नामक बाह्य कोशिका मैट्रिक्स की पतली परत से ढकी होती है।

इसके बाद, एपिडर्मिस की एपिकल सतह को लेजर से घायल कर दें। क्षतिग्रस्त कोशिकाओं से साइटोप्लाज्म बाहर निकल सकता है, जो घाव स्थल पर एक बुलबुले के रूप में दिखाई दे रहा है।

लेजर विकिरण को सुई के घायल होने जैसी अन्य तकनीकों पर एक लाभ होता है, क्योंकि यह आंतरिक ऊतकों को नुकसान पहुंचाए बिना क्यूटिकल और एपिडर्मल कोशिकाओं के स्थानीय व्यवधान का कारण बनता है । उदाहरण प्रोटोकॉल में, हम सी एलिगेंस में लेजर घायल होने की प्रक्रिया देखेंगे ।

- नेमाटोड को ठीक से घाव करने के लिए, यह प्रोटोकॉल डिस्क कॉन्फोकल माइक्रोस्कोप कताई से जुड़े एक फेमटोसेकंड लेजर का उपयोग करता है। दो फोटॉन माइक्रोस्कोप में शामिल लोगों के रूप में फेमटोसेकंड लेजर का उपयोग करके लाइन या पॉइंट स्कैन भी पर्याप्त होना चाहिए।

- एक अगर पैड पर 10 युवा वयस्कों को इकट्ठा करके शुरू करें। 12 मिलीमोलर लेविसोले समाधान के दो माइक्रोलीटर ड्रॉप में उन्हें लकवा मारें। फिर उन्हें कवर स्लिप से ढक दें और लकवा मारते समय कुछ मिनट इंतजार करें।

- यह आवश्यक है कि एक जानवर को पूरी तरह से लकवा मार जाए। 12 मिलीमोलर लेविमिसोल घाव की प्रतिक्रिया को प्रभावित नहीं करेगा। हालांकि, स्थिरीकरण के अन्य तरीकों का भी उपयोग किया जा सकता है।

- सुनिश्चित करें कि फेमटोसेकंड लेजर पावर 140 मिलीवाट तक सेट हो, जैसा कि उद्देश्य से पहले मापा जाता है, और लेजर पुनरावृत्ति दर 80 मेगाहर्ट्ज पर है। अब, कताई डिस्क कॉन्फोकल माइक्रोस्कोप के तहत कीड़े का पता लगाएं। एक उच्च संख्यात्मक एपर्चर के साथ 100x उद्देश्य का उपयोग करके, लक्ष्य के पार्श्व पूर्ववर्ती या पीछे के सिंक्टियल एपिमिडर पर ध्यान केंद्रित करें।

एपिडर्मल सेल की एपिकल सतह पर ध्यान केंद्रित करते हुए, 20 मिलीसेकंड से अलग दो 200 मिलीसेकंड दालों के लिए लेजर चमकें। यह एपिडर्मिस को घायल करने के लिए पर्याप्त होना चाहिए। एक पल रुको और साइटोप्लाज्म के स्थानीय व्यवधान का पालन करें, जो बुदबुदाता के रूप में दिखाई देगा। यदि फ्लोरोसेंट मार्कर मौजूद है, तो स्थानीयकृत विरंजन देखा जा सकता है।