Encyclopedia of Experiments: Biology
A subscription to JoVE is required to view this content.
Transcript
Please note that all translations are automatically generated.
- C. elegans används som en experimentell infektionsmodell av tarmpatogener som orsakar sjukdom, delvis genom att störa tarmbarriären, öka dess permeabilitet.
Placera sedan dessa maskar på agarplattor med märkt mat som består av värmedryddad E. coli blandad med FITC-dextran, en polysackarid med hög molekylvikt med en fluorescerande tagg.
Låt maskarna äta de märkta bakterierna.
Överför maskar till en formaldehydlösning för att fixa djuren.
Slutligen, avbilda maskarna med fluorescerande mikroskopi. Observera att C. elegans intestinala granulat är autofluorescerande, så det kommer att finnas bakgrundssignal. Men totalt sett indikerar mer intestinal fluorescens högre permeabilitet.
I exempelprotokollet kommer vi att analysera effekten av behandling med biomolekylen DIM på tarmpermeabiliteten hos maskar infekterade med patogena Pseudomonas aeruginosa-bakterier.
- Förbered fitc-dextran-kompletterade plattor genom att blanda 2 milliliter värmeinaktiverad E. coli med 4 milligram FITC-dextran. Tillsätt 100 mikroliter av blandningen till var och en av 20 färska NGM-agarplattor och låt plattorna torka i en timme på en ren labbbänk.
Nästa dag tvätta maskarna med S Buffer och låt dem krypa i den färska NGM-agarplattan i en timme.
- Formaldehyd är en giftig kemikalie och bör hanteras varsamt.
