Encyclopedia of Experiments: Biology
A subscription to JoVE is required to view this content.
Transcript
Please note that all translations are automatically generated.
- Til å begynne med, overfør forsiktig noen embryoer til en Petri-tallerken som inneholder embryomedium. Hold nå koret med tang og gjør en tåre i den med en annen tang.
Skyv deretter embryoet forsiktig gjennom tåren. Fjerne koret fra embryoet akselererer veksten og bevegelsen. For å kvitte seg med ruskene, overfør embryoene til en annen Petri-tallerken som inneholder embryomedium ved hjelp av en Pasteur pipette.
Plasser Petri-parabolen i en inkubator, og la embryoene vokse ved 28 grader Celsius. Sett et opplyst vannfylt mikroskopstadium til 28 grader Celsius før eksperimentet for å unngå temperaturrelaterte avvik i larvadferd.
Plasser Petri-parabolen på scenen og monter i kameraet over parabolen. Deretter sentrerer du embryoet i kameraets synsfelt. Berør embryoet forsiktig med en stump nål, og ta opp larveresponsen på videoopptaksprogramvaren.
Ved stimulans viser embryoet en kraftig fluktrespons - en briste svømmer sammen med skarpe svinger. Mål tiden mellom berøring og larvenes toppakselerasjon under flukten.
I eksempelprotokollen vil vi observere responsen til sebrafisk larver til ytre stimuli.
- For å utføre analysen, plasser en Petri-tallerken fylt med ca. 25 milliliter embryomedium på et opplyst temperaturkontrollert stadium satt til ca. 28 grader Celsius. Monter høyhastighetskameraet over parabolen. Start videoopptaksprogramvaren, og sett opptakshastigheten til 1000 bilder per sekund for å sikre at raske svømmehastigheter kan fanges.
Plasser embryoet i midten av Petri-parabolen, tydelig synlig i synsfeltet. Trykk på posten og lever deretter en mekanosensorisk stimulans ved å berøre embryoet forsiktig med en stump nål på toppen av hodet.
Stopp opptaket når embryoet har svømt ut av synsfeltet eller returnert til hvile.
- Gjentatt testing av de samme larvene kan føre til habituation eller fremme muskelsvakhet i noen sykdomsmodeller, noe som resulterer i redusert respons på taktil stimulans. Derfor bør hvert embryo bare testes en gang.
