Escape Response Assay: En metode til at studere reaktionen fra Zebrafish Larva at røre Stimuli

- Til at begynde med skal du forsigtigt overføre et par embryoner til en petriskål indeholdende embryo medium. Hold nu chorionen med pincet og lav en tåre i den med en anden pincet.

Dernæst forsigtigt skubbe embryoet gennem tåre. Fjernelse af chorion fra embryoet fremskynder dens vækst og bevægelse. For at slippe af med snavs, overføre embryoner til en anden Petri parabol indeholder embryo medium ved hjælp af en Pasteur pipette.

Placer Petri parabol i en inkubator, og lad embryoner vokse ved 28 grader Celsius. Sæt en belyst vand fyldt mikroskop fase til 28 grader Celsius forud for forsøget for at undgå temperaturrelaterede afvigelser i larve adfærd.

Placer Petri parabol på scenen og montere i kameraet over fadet. Næste, center embryoet i kameraets synsfelt. Nu forsigtigt røre embryoet med en stump nål, og optage larverespons på videokamera optagelse software.

Ved stimulus udviser embryoet en kraftig flugtrespons- en brast svømmetur sammen med skarpe sving.

I eksempelprotokollen vil vi observere zebrafisklarverens reaktion på eksterne stimuli.

- For at udføre analysen skal du placere en petriskål fyldt med ca. 25 milliliter embryomedie på en oplyst temperaturreguleret scene indstillet til ca. 28 grader Celsius. Monter højhastighedskameraet over skålen. Start videooptagelsessoftwaren, og indstil indfangningshastigheden til 1.000 billeder i sekundet for at sikre, at hurtige svømmehastigheder kan fanges.

Placer embryoet i midten af petriskålen, tydeligt synligt i synsfeltet. Tryk på rekord og derefter levere en mekanosensorisk stimulus ved forsigtigt at røre embryoet med en stump nål på toppen af hovedet.

Stop optagelsen, når embryoet er svømmet ud af synsfeltet eller vendt tilbage til hvile.

- Gentagne test af de samme larver kan føre til tilvænning eller fremme muskelsvaghed i nogle sygdomsmodeller, hvilket resulterer i reduceret respons på den taktile stimulus. Derfor bør hvert foster kun testes én gang.