Escape Response Assay: een methode om de reactie van zebravislarven te bestuderen om stimuli aan te raken

- Om te beginnen, breng voorzichtig een paar embryo's over in een Petrischaal met embryomedium. Houd nu het koraal vast met een tang en maak er een scheur in met een andere tang.

Duw vervolgens het embryo voorzichtig door de scheur. Het verwijderen van het koraal uit het embryo versnelt de groei en beweging. Om van het puin af te komen, breng je de embryo's over naar een andere Petrischaal met embryomedium met behulp van een Pasteur pipet.

Plaats de Petrischaal in een incubator en laat de embryo's groeien op 28 graden Celsius. Stel voorafgaand aan het experiment een verlichte met water gevulde microscooptrap in op 28 graden Celsius om temperatuurgerelateerde afwijkingen in het larvale gedrag te voorkomen.

Plaats de Petrischaal op het podium en monteer in de camera boven de schotel. Centreer vervolgens het embryo in het gezichtsveld van de camera. Raak het embryo nu voorzichtig aan met een stompe naald en neem de larvale reactie op de opnamesoftware van de videocamera op.

Bij stimulus vertoont het embryo een krachtige ontsnappingsreactie- een uitbarsting zwemt samen met scherpe bochten. Meet de tijd tussen de aanraking en de piekversnelling van de larven tijdens zijn ontsnapping.

In het voorbeeldprotocol zullen we de reactie van zebravislarven op externe stimuli observeren.

- Om de test uit te voeren, plaatst u een Petrischaal gevuld met ongeveer 25 milliliter embryomedium op een verlichte temperatuurgeregelde fase die is ingesteld op ongeveer 28 graden Celsius. Monteer de hogesnelheidscamera boven de schotel. Start de video-opnamesoftware en stel de opnamesnelheid in op 1.000 frames per seconde om ervoor te zorgen dat hoge zwemsnelheden kunnen worden vastgelegd.

Plaats het embryo in het midden van de Petrischaal, duidelijk zichtbaar in het gezichtsveld. Druk op opnemen en geef vervolgens een mechanosensorische stimulus door het embryo voorzichtig aan te raken met een stompe naald bovenop het hoofd.

Stop de opname zodra het embryo uit het gezichtsveld is gezwommen of weer tot rust is gekomen.

- Herhaalde tests van dezelfde larven kunnen leiden tot gewen gewenking of spierzwakte bevorderen in sommige ziektemodellen, wat resulteert in een verminderde respons op de tactiele stimulus. Daarom mag elk embryo slechts één keer worden getest.