Escape Response Assay: Eine Methode, um die Reaktion von Zebrafisch Larve auf Berührung Stimuli zu studieren

- Um zu beginnen, sanft ein paar Embryonen in eine Petrischale mit Embryo-Medium übertragen. Jetzt halten Sie die Chorion mit Zange und machen Sie eine Träne in sie mit einer anderen Zange.

Als nächstes schieben Sie den Embryo vorsichtig durch die Träne. Entfernen der Chorion aus dem Embryo beschleunigt sein Wachstum und Bewegung. Um die Trümmer loszuwerden, übertragen Sie die Embryonen auf eine andere Petrischale mit Embryo-Medium mit einer Pasteur Pipette.

Legen Sie die Petrischale in einen Inkubator und lassen Sie die Embryonen bei 28 Grad Celsius wachsen. Stellen Sie vor dem Experiment ein beleuchtetes, mit Wasser gefülltes Mikroskopstadium auf 28 Grad Celsius, um temperaturbedingte Abweichungen im Larvenverhalten zu vermeiden.

Legen Sie die Petrischale auf die Bühne und montieren Sie in der Kamera über der Schale. Als nächstes zentrieren Sie den Embryo im Sichtfeld der Kamera. Berühren Sie nun vorsichtig den Embryo mit einer stumpfen Nadel und zeichnen Sie die Larvenreaktion auf der Videokamera-Aufnahmesoftware auf.

Nach dem Stimulus zeigt der Embryo eine starke Fluchtreaktion -- ein Geplatzungsschwimmen zusammen mit scharfen Wendungen. Messen Sie die Zeit zwischen der Berührung und der Spitzenbeschleunigung der Larven während ihrer Flucht.

Im Beispielprotokoll werden wir die Reaktion von Zebrafischlarven auf äußere Reize beobachten.

- Um den Test durchzuführen, legen Sie eine Petrischale gefüllt mit etwa 25 Milliliter embryo Medium auf eine beleuchtete temperaturgesteuerte Bühne eingestellt auf etwa 28 Grad Celsius. Montieren Sie die High-Speed-Kamera über der Schale. Starten Sie die Video-Aufnahme-Software, und stellen Sie die Aufnahmegeschwindigkeit auf 1.000 Bilder pro Sekunde, um sicherzustellen, dass schnelle Schwimmgeschwindigkeiten erfasst werden können.

Positionieren Sie den Embryo in der Mitte der Petrischale, deutlich sichtbar im Sichtfeld. Drücken Sie die Aufzeichnung und liefern Sie dann einen mechanosensorischen Reiz, indem Sie den Embryo sanft mit einer stumpfen Nadel auf dem Kopf berühren.

Beenden Sie die Aufzeichnung, sobald der Embryo aus dem Sichtfeld geschwommen oder zur Ruhe zurückgekehrt ist.

- Wiederholte Tests der gleichen Larven können zu Gewöhnung führen oder Muskelschwäche in einigen Krankheitsmodellen fördern, was zu einer reduzierten Reaktion auf den taktilen Reiz führt. Daher sollte jeder Embryo nur einmal getestet werden.