Escape Response Assay: Une méthode pour étudier la réponse de larve zebrafish aux stimuli tactiles

- Pour commencer, transférez doucement quelques embryons dans une boîte de Petri contenant du milieu embryonnaire. Maintenant, maintenez la chorion avec des forceps et faites une larme dedans avec un autre forceps.

Ensuite, poussez doucement l’embryon à travers la déchirure. Enlever la chorion de l’embryon accélère sa croissance et son mouvement. Pour se débarrasser des débris, transférez les embryons dans une autre boîte de Pétri contenant du milieu embryonnaire à l’aide d’une pipette Pasteur.

Placez la boîte de Pétri dans un incubateur et laissez les embryons pousser à 28 degrés Celsius. Réglez un stade de microscope rempli d’eau illuminé à 28 degrés Celsius avant l’expérience afin d’éviter toute déviation liée à la température dans le comportement larvaire.

Placez la boîte de Petri sur la scène et montez dans la caméra au-dessus du plat. Ensuite, centrez l’embryon dans le champ de vision de la caméra. Maintenant, touchez doucement l’embryon avec une aiguille émoussée, et enregistrez la réponse larvaire sur le logiciel d’enregistrement de la caméra vidéo.

Au moment du stimulus, l’embryon présente une puissante réponse d’évasion - une poussée nager avec des virages serrés. Mesurer le temps entre le toucher et l’accélération maximale des larves au cours de son évasion.

Dans le protocole d’exemple, nous observerons la réponse des larves de poisson zèbre aux stimuli externes.

- Pour effectuer l’analyse, placez une boîte de Petri remplie d’environ 25 millilitres de milieu embryonnaire sur une scène éclairée à température contrôlée réglée à environ 28 degrés Celsius. Montez la caméra à grande vitesse au-dessus du plat. Lancez le logiciel d’enregistrement vidéo et réglez la vitesse de capture à 1 000 images par seconde pour assurer une vitesse de nage rapide.

Placez l’embryon au centre de la boîte de Pétri, clairement visible dans le champ de vision. Appuyez sur le dossier, puis offrez un stimulus mécanosensoriel en touchant doucement l’embryon avec une aiguille émoussée sur le dessus de la tête.

Arrêtez l’enregistrement une fois que l’embryon est sorti du champ de vision ou qu’il est retourné se reposer.

- Des tests répétés des mêmes larves peuvent conduire à l’accoutumabilité ou favoriser la faiblesse musculaire dans certains modèles de maladies, ce qui entraîne une réponse réduite au stimulus tactile. Par conséquent, chaque embryon ne doit être testé qu’une seule fois.