Encyclopedia of Experiments: Biology
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Transcript
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- Para começar, transfira suavemente alguns embriões para uma placa de Petri contendo meio de embrião. Agora segure o acorde com fórceps e faça uma lágrima nele com outro fórceps.
Em seguida, empurre suavemente o embrião através da lágrima. A remoção do acorde do embrião acelera seu crescimento e movimento. Para se livrar dos detritos, transfira os embriões para outra placa de Petri contendo meio de embrião usando uma pipeta Pasteur.
Coloque a placa de Petri em uma incubadora, e deixe os embriões crescerem a 28 graus Celsius. Coloque um estágio de microscópio cheio de água iluminada a 28 graus Celsius antes do experimento para evitar desvios relacionados à temperatura no comportamento larval.
Coloque a placa de Petri no palco e monte na câmera acima do prato. Em seguida, centralize o embrião no campo de visão da câmera. Agora toque suavemente o embrião com uma agulha cega, e grave a resposta larval no software de gravação da câmera de vídeo.
Após o estímulo, o embrião exibe uma poderosa resposta de fuga... um mergulho de explosão junto com curvas afiadas. Meça o tempo entre o toque e o pico de aceleração das larvas durante sua fuga.
No protocolo de exemplo, observaremos a resposta das larvas de zebrafish a estímulos externos.
- Para realizar o ensaio, coloque uma placa de Petri cheia com aproximadamente 25 mililitros de meio de embrião em um estágio iluminado controlado pela temperatura definido a aproximadamente 28 graus Celsius. Monte a câmera de alta velocidade acima do prato. Inicie o software de gravação de vídeo e defina a velocidade de captura para 1.000 quadros por segundo para garantir que velocidades rápidas de natação possam ser capturadas.
Posicione o embrião no centro da placa de Petri, claramente visível no campo de visão. Pressione o registro e, em seguida, entregue um estímulo mecanosensorial tocando suavemente o embrião com uma agulha cega em cima da cabeça.
Pare a gravação assim que o embrião nadar para fora do campo de visão ou voltar a descansar.
- Testes repetidos das mesmas larvas podem levar à habitação ou promover fraqueza muscular em alguns modelos de doença, resultando em resposta reduzida ao estímulo tátil. Portanto, cada embrião só deve ser testado uma vez.
