エスケープ応答アッセイ:ゼブラフィッシュ幼虫のタッチ刺激への反応を研究する方法

- まず、胚培地を含むペトリ皿に数個の胚をそっと移し、鉗子でチョリオンを保持し、別の鉗子で涙を流してください。

次に、涙を通して胚を軽く押し出します。胚から絨毛を取り除くことは、その成長と動きを加速させます。破片を取り除くために、パスツールピペットを使用して胚培地を含む別のペトリ皿に胚を移します。

ペトリ皿をインキュベーターに入れ、胚を摂氏28度で成長させなさい。幼虫行動の温度関連の偏差を避けるために、実験の前に照らされた水で満たされた顕微鏡ステージを摂氏28度に設定します。

ペトリ皿をステージに置き、皿の上のカメラに取り付けます。次に、胚をカメラの視野に中央に置きます。

刺激を受けると、胚は強力な脱出反応(鋭い回転と一緒にバースト泳ぎ)を示します。

プロトコル例では、ゼブラフィッシュの幼虫の外部刺激に対する反応を観察します。

- アッセイを実行するには、約25ミリリットルの胚培地で満たされたペトリ皿を約28°Cに設定した照明付きの温度制御ステージに置き、高速カメラを上に取り付けます。

ペトリ皿の中央に胚を置き、視界にはっきりと見える。記録を押して、頭の上に鈍い針で優しく胚に触れることによってメカノ感覚刺激を提供する。

胚が視界から抜け出したり、休息に戻ったら、記録を停止します。

- 同じ幼虫の繰り返し検査は、一部の疾患モデルにおいて習慣化や筋力低下を促進し、触覚刺激に対する応答を低下させる可能性があります。