Saggio di risposta alla fuga: un metodo per studiare la risposta della larva di zebrafish per toccare gli stimoli

- Per iniziare, trasferire delicatamente alcuni embrioni in una piastra di Petri contenente mezzo embrionale. Ora tenere il corone con le forcep e fare una lacrima con un'altra forza.

Quindi, spingere delicatamente l'embrione attraverso la lacrima. Rimuovere il corore dall'embrione accelera la sua crescita e il suo movimento. Per eliminare i detriti, trasferire gli embrioni in un'altra piastra di Petri contenente mezzo embrionale utilizzando una pipetta Pasteur.

Posizionare la piastra di Petri in un'incubatrice e lasciare che gli embrioni crescano a 28 gradi Celsius. Impostare uno stadio di microscopio riempito d'acqua illuminata a 28 gradi Celsius prima dell'esperimento per evitare deviazioni correlate alla temperatura nel comportamento larvale.

Posizionare la piastra di Petri sul palco e montarla nella fotocamera sopra la piastra. Successivamente, centrare l'embrione nel campo visivo della fotocamera. Ora toccare delicatamente l'embrione con un ago smussato e registrare la risposta larvale sul software di registrazione della videocamera.

Dopo lo stimolo, l'embrione mostra una potente risposta di fuga: una nuotata a raffica insieme a curve bruschi. Misura il tempo tra il tocco e la picco di accelerazione delle larve durante la sua fuga.

Nel protocollo di esempio, osserveremo la risposta delle larve di zebrafish agli stimoli esterni.

- Per eseguire il test, posizionare una piastra di Petri riempita con circa 25 millilitri di mezzo embrione su uno stadio illuminato a temperatura controllata impostato su circa 28 gradi Celsius. Montare la fotocamera ad alta velocità sopra il piatto. Avviare il software di registrazione video e impostare la velocità di acquisizione su 1.000 fotogrammi al secondo per garantire che sia possibile catturare velocità di nuoto elevate.

Posizionare l'embrione al centro della piastra di Petri, chiaramente visibile nel campo visivo. Premere il record e quindi fornire uno stimolo meccanosensorie toccando delicatamente l'embrione con un ago smussato sopra la testa.

Interrompere la registrazione una volta che l'embrione è uscito dal campo visivo o è tornato a riposare.

- Test ripetuti delle stesse larve possono portare all'assueazione o promuovere la debolezza muscolare in alcuni modelli di malattia, con conseguente riduzione della risposta allo stimolo tattile. Pertanto, ogni embrione deve essere testato una sola volta.