層状寒天取り付け:逆顕微鏡による長期イメージングのための生きたゼブラフィッシュ胚の準備

- E3培地に胚を含むペトリ皿から始める。トリカインを加えて、胎児とフェニルチウリア、PTU溶液を麻酔し、顔料形成を阻害する。

ガラスピペットを使用して、デコリオネートされた胚の1つを中央に浅いガラス底を持つ小さなペトリ皿に移し、余分な媒体を取り除きます。

胚の上にアガロースの第1層を注ぎ、浅い井戸を完全に満たし、井戸の上に別のカバーガラスを置き、その上に1%アガロースを加えます。

アガロースが固まったら、トリカインを含むE3培地でペトリ皿を満たします。これは第3層であり、アガロースと胚を水分補給し続けます。

- 取り付ける直前に、アガロース溶液を摂氏65度に加熱し、胚が熱によって害を受けないように約30°Cに冷却し、アガロース溶液にトリカインを加えます。ガラス底をゼロにした35ミリメートルのガラス底皿を使用してください。ガラスピペットまたはマイクロピペットで皿の底に向かって側面の1つを持つデコリオネート胚をそっと置きます。

足す ザ まずは アガロース 解決 宛先 ザ 小さい まぁ 作成 によって ザ 覆う グラス 付属 宛先 ザ 底 の ザ 皿 宛先 覆う ザ 胚 作り もちろん それ ザ アガロース カバー ザ 小さい まぁ だがしかし は じゃない オーバーフロー それ。 覆う ザ 小さい まぁ で ザ 覆う グラス 宛先 創造する a 狭い アガロースに満ちた 間 で ザ 胚 間 ザ 2 覆う 眼鏡。 場所 a 層 の 1% アガロース 解決 オン ページのトップへ の ザ 覆う グラス すべての オーバー ザ 底 の ザ 皿 どっち 遺言 保つ ザ 覆う グラス インチ 場所 として それ 凝固。 そうしたら 注ぐ ザ 残り 部分 の ザ 皿 で E3 含有 0.02% トリカイン 宛先 保つ ザ 制 水和。 宛先 識別する ザ 最適 アガロース 濃度 対して 層 1 マウント ザ 胚 インチ 増加 濃度 の アガロース そして 実行する タイムラプス イメージング 宛先 識別する ザ 濃度 それ 最小 化 胚 歪み そして 運動 そうしたら 試験 a 細かい 範囲 の 濃度 ベース オン ザ 業績。

- このプロトコルの最も重要なステップは、層1のためのアガロースの最適濃度を同定することです。