Encyclopedia of Experiments: Biology
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Transcript
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- Comenzar con una placa de Petri que contiene embriones en medio E3. Añadir tricarina para anestesiar los embriones y fenilthiouria, solución PTU, para inhibir la formación de pigmentos.
Utilice una pipeta de vidrio para transferir uno de los embriones desocupados a una pequeña placa De Petri con un pozo inferior de vidrio poco profundo en el centro y retire el exceso de medio. A continuación, coloque una solución de agarose a una concentración óptima para minimizar la distorsión y la motilidad del embrión en un tubo de microfugio y calentarla.
Vierta la primera capa de agarose sobre el embrión, llenando completamente el pozo poco profundo. Coloque otro vaso de cubierta sobre el pozo y agregue un 1% de agarose encima de eso.
Una vez que la agarose se solidifique, llene la placa Petri con el medio E3 que contiene tricarina. Esta es la tercera capa y mantiene la agarose y el embrión hidratados.
- Justo antes de montar, calentar la solución de agarose a 65 grados Celsius y luego dejar que se enfríe a aproximadamente 30 grados Celsius para que el embrión no se dañe por el calor y añadir tricaina a la solución de agarose. Utilice platos inferiores de vidrio de 35 milímetros con un fondo de vidrio cubierto número cero. Coloque suavemente un embrión deschorionado con uno de sus lados laterales hacia la parte inferior del plato con una pipeta de vidrio o un micropipette.
agregar el Primero agarosa solución Para el pequeño pozo Creado por el cubrir vidrio adjunto Para el fondo de el plato Para cubrir el embrión fabricación seguro ese el agarosa Cubre el pequeño pozo pero hace no desbordamiento eso. cubrir el pequeño pozo con el cubrir vidrio Para crear un estrecho lleno de agarose espacio con el embrión entre el Dos cubrir gafas. lugar un capa de 1% agarosa solución en Arriba de el cubrir vidrio todo sobre el fondo de el plato cuál será guardar el cubrir vidrio en lugar como eso Solidifica. entonces llenar el restante porción de el plato con E3 Contiene 0.02% tricarina Para guardar el sistema Hidratado. Para identificar el óptimo agarosa concentración para capa Uno montar el Embriones en creciente Concentraciones de agarosa y realizar timelapse imagenológico Para identificar el concentración ese Minimiza embrión distorsión y motilidad entonces prueba un Mejor gama de Concentraciones basado en el Resultados.
- El paso más crítico de este protocolo es identificar la concentración óptima de agarose para la capa uno. Prueba diferentes nano concentraciones de agarose como 0.030%, 0.032%, etcétera, para encontrar la concentración óptima.
