Encyclopedia of Experiments: Biology
A subscription to JoVE is required to view this content. Sign in or start your free trial.
Transcript
Please note that all translations are automatically generated.
- התחל עם צלחת פטרי המכילה עוברים בינוני E3. הוסף tricaine כדי להרדימה העוברים phenylthiouria, פתרון PTU, כדי לעכב היווצרות פיגמנט. בעזרת מיקרוסקופ לנתח, dechorionate העוברים.
השתמש פיפטה זכוכית כדי להעביר את אחד העוברים dechorionated לצלחת פטרי קטנה עם תחתית זכוכית רדודה היטב במרכז ולהסיר את המדיום עודף. הבא, למקם פתרון agarose בריכוז אופטימלי כדי למזער את עיוות העובר ואת תנועתיות לתוך צינור microfuge ולחמם אותו.
יוצקים את השכבה הראשונה של agarose על העובר, ממלאים לחלוטין את הבאר הרדודה.
לאחר agarose מתמצק, למלא את צלחת פטרי עם המדיום E3 המכיל tricaine. זוהי השכבה השלישית ושומר על agarose ועובר hydrated. בפרוטוקול הבא, נבצע הרכבה אגר שכבות של עוברי זברה עבור הדמיה זמן לשגות זמן ממושך.
- רגע לפני ההרכבה, מחממים את תמיסת ההתעוררות ל-65 מעלות צלזיוס ואז נותנים לה להתקרר ל-30 מעלות צלזיוס בקירוב, כך שהעובר לא נפגע מהחום ומוסיפים טריקאין לתמיסת האגרוז. השתמש 35 מילימטר זכוכית התחתון כלים עם מספר אפס מכוסה תחתית זכוכית.
להוסיף הראשון אגרוז (סרט) פתרון אל קטן ובכן שנוצרו לפי לכסות זכוכית המצורפת אל התחתון של צלחת אל לכסות העובר עושה בטוח ש אגרוז (סרט) מכסה קטן ובכן אבל עושה לא גלישה זה. לכסות קטן ובכן עם לכסות זכוכית אל ליצור ת צר מלא אגרוז שטח עם העובר בין שניים לכסות משקפיים. המקום ת שכבה של 1% אגרוז (סרט) פתרון על העליון של לכסות זכוכית כל מעל התחתון של צלחת אשר צ'ו לשמור לכסות זכוכית In המקום כ זה מתגבש. ולאחר מכן מילוי הנותרים החלק של צלחת עם E3 המכיל 0.02% טריקאין (קון) אל לשמור מערכת מיובש. אל לזהות אופטימלית אגרוז (סרט) ריכוז עבור שכבה אחד הר עוברים In הגדלת ריכוזים של אגרוז (סרט) ו לבצע שעון זמן הדמיה אל לזהות ריכוז ש ממזער העובר עיוות ו תנועתיות, ולאחר מכן מבחן ת עדין יותר טווח של ריכוזים מבוסס על תוצאות.
- הצעד הקריטי ביותר של פרוטוקול זה הוא לזהות את הריכוז האופטימלי של agarose עבור שכבה אחת.
