Encyclopedia of Experiments: Biology
A subscription to JoVE is required to view this content. Sign in or start your free trial.
Transcript
Please note that all translations are automatically generated.
- في يرقات سمك الحمار الوحشي، يمكن للتحفيز البصري تنشيط الخلايا العصبية الحسية somatosensory وتحفيز استجابة الهروب.
لإجراء هذه التقنية ، قم بتركيب يرقة معدلة وراثيا مع الجانب الظهري المواجه في هلام الآغروز ووضعه تحت مجهر تشريح. استخدم شفرة حلاقة لفصل جزء على شكل إسفين من الآغروز من حول الصفار والذيل.
ضع طرف كابل بصري بالقرب من الجذع حيث يقع جسم الخلية للخلية العصبية Rohon-Beard. قم بتسليم نبضة من ضوء الليزر الأزرق.
في بروتوكول المثال ، سنقوم بتركيب اليرقات لتنشيط الخلايا العصبية Rohon-Beard ، مع التعبير عن متغير channelrhodopsin ومراقبة الاستجابة السلوكية.
- جعل 1.5٪ agarose منخفضة الذوبان في الماء المقطر المزدوج وتخزينها في كتلة حرارة 42 درجة مئوية لمنعها من ترسيخ.
تحت مجهر تشريح ، ضع الجانب الظهري لليرقة لأعلى. عندما يتم تماسك الآجروز ، استخدم شفرة حلاقة رقيقة لقطع الآجروز من جانبي اليرقة.
بعد ذلك ، قم بإجراء قطعتين قطريتين لكلا جانبي الصفار ، مع الحرص على عدم سرقة اليرقة.
الآن قم بتركيب الكاميرا عالية السرعة على نطاق التشريح وتوصيل الكاميرا بالكمبيوتر. ثم قم بتشغيل الكمبيوتر والكاميرا عالية السرعة. افتح برنامج تصوير الفيديو وضبط إعدادات الكاميرا.
بعد ذلك ، استخدم مجهر تشريح الفلورسنت لوضع طرف الكابل البصري بالقرب من جسم الخلية العصبية مع تعبير ChEF-tdTomato. تقديم نبضة من الضوء الأزرق لتنشيط الخلايا العصبية الحسية.
للإفراج عن اليرقة ، نقب عن الآجروز مع ملقط وكن حريصا على عدم إصابة الحيوان.
