Optogenética del pez cebra: Activación de la neurona somatosensorial modificada genéticamente para estudiar las respuestas conductuales larvarias

- En las larvas de pez cebra, un estímulo visual puede activar neuronas somatosensoriales y desencadenar una respuesta de escape. Hay dos tipos de estas neuronas que se encuentran en las neuronas larva, trigémino y Rohon-Beard.

Para realizar esta técnica, monte una larva transgénica con el lado dorsal mirando hacia arriba en gel de agarose y colóquela bajo un microscopio diseccionador. Utilice una cuchilla de afeitar para separar una porción en forma de cuña de agarose de alrededor de la yema y la cola.

Coloque la punta de un cable óptico cerca del tronco donde se encuentra el cuerpo celular de la neurona Rohon-Beard.

En el protocolo de ejemplo, montaremos las larvas para activar la neurona Rohon-Beard, expresando una variante de channelrhodopsin y observaremos la respuesta conductual.

- Hacer 1.5% de agarose de baja fusión en agua de doble destilado y almacenar en un bloque de calor de 42 grados Celsius para evitar que se solidifique. Usando una pipeta pasteur de vidrio, transferir una de las larvas prepantaladas en un tubo de 1.5% de agarose de bajo derretimiento con el menor agua de embrión azul posible.

Bajo un microscopio diseccionador, coloque la larva dorsal hacia arriba. Cuando la agarose se solidifique, use una fina cuchilla de afeitar para cortar la agarose de ambos lados de la larva.

A continuación, hacer dos cortes diagonales de ambos lados de la yema, teniendo cuidado de no cortar la larva.

Ahora monte la cámara de alta velocidad en el alcance de disección y conecte la cámara a la computadora.

A continuación, utilice el microscopio diseccionador fluorescente para colocar la punta del cable óptico cerca de un cuerpo de células neuronas con expresión ChEF-tdTomato. Entregar un pulso de luz azul para activar la neurona sensorial.

Liberar la larva, separar la agarose con fórceps y tener cuidado de no herir al animal.