Journal
/
/
Identificatie van eiwit complexen in<em> Escherichia coli</em> Met Sequential Peptide Affinity Purification in combinatie met tandem massaspectrometrie
JoVE Journal
Biology
A subscription to JoVE is required to view this content.  Sign in or start your free trial.
JoVE Journal Biology
Identification of Protein Complexes in Escherichia coli using Sequential Peptide Affinity Purification in Combination with Tandem Mass Spectrometry
DOI:

14:58 min

November 12, 2012

, , , ,

Chapters

  • 00:05Title
  • 01:47Construction of Gene-specific SPA-tagging in E. Coli DY330 Strain
  • 03:54Culturing and Sonication
  • 05:26Affinity Purification
  • 07:53Proteolysis and Sample Preparation for Mass Spectrometry
  • 09:38Protein Identification by LTQ Orbitap Velos Mass Spectrometer
  • 11:02Results
  • 14:27Conclusion

Summary

Automatic Translation

Affiniteitszuivering van gemerkte eiwitten in combinatie met massaspectrometrie (APM) is een krachtige methode voor systematische mapping van eiwit interactie netwerken en het onderzoeken van de mechanistische basis van biologische processen. Hier beschrijven we een geoptimaliseerde sequentiële peptide affiniteit (SPA) APM procedure ontwikkeld voor de bacterie<em> Escherichia coli</em> Die worden gebruikt voor het isoleren en stabiele multi-eiwitcomplexen karakteriseren buurt homogeniteit zelfs vanaf lage kopie-aantallen per cel.

Related Videos

Read Article