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Identificação de parceiros de interação de proteínas em células de mamíferos utilizando SILAC-imunoprecipitação quantitativos Proteômica
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Identification of Protein Interaction Partners in Mammalian Cells Using SILAC-immunoprecipitation Quantitative Proteomics

Identificação de parceiros de interação de proteínas em células de mamíferos utilizando SILAC-imunoprecipitação quantitativos Proteômica

DOI:
10.3791/51656-v

•

12:53 min

•

July 06, 2014

•

,
1Division of Virology, Department of Pathology,University of Cambridge

Chapters

  • 00:05Title
  • 01:49Harvesting of SILAC-labeled Cell Lysates
  • 03:39Binding Lysate to Anti-GFP Beads
  • 04:45Preparation of Samples for MS Analysis
  • 06:11Data Analysis I: Understanding the Results and Removal of Low-confidence Identifications
  • 07:36Data Analysis II: Selecting High Confidence Interactions for Further Study
  • 08:58Data Analysis III: Merging Replica Datasets
  • 10:59Results: Identification of Translation Initiation Factor – Binding Proteins
  • 12:22Conclusion

Summary

Automatic Translation

Automatic Translation

Experimentos de imunoprecipitação SILAC representar um poderoso meio para descobrir nova proteína: interações protéicas. Ao permitir que a quantificação relativa exacta da abundância de proteína em ambas as amostras de controlo e de ensaio, os verdadeiros interacções podem ser facilmente distinguidos dos contaminantes experimentais, e interacções de baixa afinidade preservado através da utilização de condições de tampão menos rigorosas.

Tags

Keywords: SILACImmunoprecipitationQuantitative ProteomicsProtein-protein InteractionsEIF4AIEIF4AIIMass SpectrometryData AnalysisStable Isotope LabelingAffinity Purification

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