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Indução de lesão cerebral axonal difusa em ratos com base na aceleração rotacional
Chapters
Summary May 9th, 2020
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Este protocolo valida um modelo de roedor confiável, fácil de executar e reprodutível da lesão axonal difusa cerebral (DAI) que induz danos generalizados de matéria branca sem fraturas no crânio ou contusões.
Transcript
Lesão cerebral traumática é uma das principais causas de morte e incapacidade. Lesão cerebral axonal difusa é um dano axonal generalizado se desenvolve após tbi. Nesta pesquisa, gostaria de apresentar nosso modelo sobre lesão cerebral axonal difusa por indução baseada no resultado do mecanismo de aceleração rotacional TBI.
Selecione ratos adultos machos Sprague-Dawley pesando de 300 a 350 gramas. Fornecer comida de rato e ad libitum de água. Realize todos os experimentos entre 6:00 e 12:00. O dispositivo foi colocado em uma mesa de laboratório pesada e estável.
O dispositivo consiste nos seguintes componentes: um cilindro, um peso de ferro, um mecanismo rotacional composto por um tubo cilíndrico e pinos de fixação da cabeça. O peso é fixado a uma corda e elevado à altura de 120 centímetros. O peso em queda livre atinge o parafuso ativando o mecanismo de rotação.
O dispositivo de rotação lateral da cabeça do rato foi usado para girar a cabeça rapidamente de zero a 90 graus. Após indução, lesão cerebral axonal difusa, rato foi transferido para a sala de recuperação. F é a força aplicada na cabeça do animal em quilogramas.
Capital M é o momento da força, K para energia cinética. Pouco m é a massa do peso em queda, g para aceleração gravitacional, h para altura em centímetros, e D é a distância entre os pinos de ouvido em centímetros. Para avaliação do déficit neurológico e déficits de modelos de grau, utilizamos escore de gravidade neurológica em ratos.
Avaliamos mobilidade, hemiplegia, tarefa de caminhada de feixe, falha na tarefa de caminhada do feixe. Falha de balanceamento de feixes de tarefa ampla 1,5 centímetros. Estabilidade e equilíbrio de feixes, esforço no equilíbrio do feixe de 1,5 centímetro de largura e reflexos.
48 horas após a lesão, todos os ratos, lesões e grupo controle, foram profundamente anestesiados e transcardiacalmente perfumados com soro fisiológico heparinizado de 0,9%, seguido por 500 mililitros de 4% de formaldeído em salina tampão fosfato de 0,1 M. Após a perfusão, a decapitação foi produzida e os cérebros foram imediatamente removidos, depois fixados em uma solução de 4% de formaldeído por 48 horas. Os cérebros foram então bloqueados em seções coronais de cinco milímetros da lâmpada olfativa face ao córtex visual enquanto o cerebelo e caules cerebrais foram dissecados.
Após a incorporação da parafina, seções coronais e sagidas foram feitas a partir do tálamo. Produzir a coloração imunoquímica da proteína precursora beta-amilóide. Os vários grupos de ratos em diferentes momentos são mostrados no esquema.
Lesão cerebral axonal difusa no início do experimento. Na época, 48 horas, o Escore de Gravidade Neurológica foi examinado. Na época, 48 horas, a coloração imunoquímica do beta-APP foi realizada em todos os dois grupos.
Déficit neurológico ilustrado 48 horas após lesão cerebral axonal difusa para dois grupos de estudo. Um teste de Mann-Whitney indicou que o déficit neurológico foi significativamente maior para 15 ratos de lesão cerebral axonal difusa em comparação com 15 ratos ingênuos em 48 horas após a intervenção. Fotomicrogramas representativos revelando imunoreactividades axais e neuronais após lesão cerebral axonal difusa isolada em ratos 48 horas após a lesão.
Cordas celulares menores são detectadas com proteína precursora beta-amilóide. Em grupo falso, não foi detectado. Em nosso trabalho, desenvolvemos um modelo novo simples, reprodutível e confiável para lesões cerebrais axonas difusas baseadas no mecanismo de aceleração rotacional.
Tal modelo permitirá uma melhor compreensão da fisiopatologia da lesão cerebral axonal difusa e desenvolvimento de tratamentos mais eficazes. Muito obrigado por sua atenção.
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