Waiting
Login processing...

Trial ends in Request Full Access Tell Your Colleague About Jove
JoVE Journal Chemistry
Click here for the English version

Chemistry

HPLC إلى جانب البصمات الكيميائية للتعرف على الأنماط المتعددة لتحديد أصالة ياسمين أرماندي كوليس

Published: November 11, 2022 doi: 10.3791/64690
Automatic Translation
*1, *1, *2, 2, 2, 2, 1
1School of Pharmacy, The Second Class Laboratory of Traditional Chinese Medicine Pharmaceutics, National Administration of Traditional Chinese Medicine, Chengdu Medical College, 2Pengzhou Second People's Hospital
* These authors contributed equally

Summary

هنا ، نقدم بروتوكولا لإنشاء كروماتوغرافيا سائلة عالية الأداء (HPLC) ، إلى جانب التعرف على بصمات الأصابع الكيميائية متعددة الأنماط ، والتي توفر استراتيجية جديدة لتحديد الأصناف الأصلية من Clematidis Armandii Caulis وزناتها بشكل فعال.

Abstract

تم إنشاء طريقة لتحديد المواد الطبية الصينية والزناة ذات الصلة بها عن طريق أخذ Clematidis Armandii Caulis (Chuanmutong ، وهو دواء صيني تقليدي مستخدم عالميا) كمثال. تم تحليل ومقارنة عشر دفعات من أصناف Chuanmutong الأصلية وخمس دفعات من الغش ذي الصلة بناء على بصمات الكروماتوغرافيا السائلة عالية الأداء (HPLC) جنبا إلى جنب مع القياسات الكيميائية ، بما في ذلك التحليل العنقودي (CA) ، وتحليل المكونات الرئيسية (PCA) ، وتحليل التمييز الجزئي المتعامد للمربعات الصغرى (OPLS-DA). بالإضافة إلى ذلك ، تم تحديد محتوى β-سيتوستيرول. تم إنشاء البصمة الكيميائية للتحكم في Chuanmutong ، وتم تحديد 12 قمة مشتركة. كان التشابه بين بصمة 10 دفعات من أصناف Chuanmutong الأصلية وبصمة التحكم 0.910-0.989 ، في حين أن تشابه خمس دفعات من الغش كان 0.133-0.720 فقط. استنادا إلى القمم الشائعة في مخطط الكروماتوجرام ، تم تصنيف 15 دفعة من العينات إلى ثلاثة مستويات محتوى بواسطة PCA ، وتم تجميعها في أربع فئات بواسطة CA ، مما حقق تمييزا واضحا بين Chuanmutong الأصلي والغش في Chuanmutong. علاوة على ذلك ، تم العثور على سبعة مكونات تفاضلية يمكنها تحديد Chuanmutong الأصلي والغش من Chuanmutong بشكل فعال من خلال OPLS-DA. كان محتوى β-سيتوستيرول من 10 دفعات من أصناف Chuanmutong الأصلية 97.53-161.56 ميكروغرام / غرام ، في حين أن محتوى β-سيتوستيرول للدفعات الخمس من الغش يختلف اختلافا كبيرا ، من بينها محتوى β-سيتوستيرول من Clematis peterae Hand.-Mazz. وياسمين غوريانا روكسب. Var. finetii Rehd. وآخرون ويلس. كان أقل بكثير من الأصناف الأصلية من Chuanmutong. يوفر محتوى مكون مؤشر HPLC وطريقة التعرف على بصمات الأصابع الكيميائية متعددة الأنماط التي تم إنشاؤها في هذه الدراسة استراتيجية جديدة لتحديد المواد الطبية الصينية الأصلية والغش ذي الصلة بشكل فعال.

Introduction

تشوانموتونغ ، كوليس جاف من ياسمين أرماندي فرانش. أو Clematis montana Buch.-Ham. ، هو دواء صيني تقليدي شائع الاستخدام في العيادات1،2،3. يتم استخدامه لعلاج مشاكل المسالك البولية ، وذمة ، وتقرحات على اللسان والفم ، وانخفاض إفراز الحليب ، وتصلب المفاصل ، وآلام العضلات الناجمة عن الحرارة الرطبة4. تم الحصول على Chuanmutong دائما من الأصناف البرية ، الموزعة بشكل رئيسي في جنوب غرب الصين ، وخاصة في سيتشوان ، حيث يمكن العثور على أفضل جودة 5,6. من الصعب التمييز بين الأصناف الأصيلة والغش المرتبط ارتباطا وثيقا بسبب خصائصها المتشابهة7،8،9،10. ينص معيار جودة Chuanmutong في إصدار 2020 من دستور الأدوية الصيني فقط على الخصائص والتعريف المجهري وتحديد الطبقة الرقيقة دون تحديد المحتوى ، والذي لا يمكنه تحديد الغش بشكل فعال ، وبالتالي له مخاطر محتملة. علاوة على ذلك ، هناك عدد قليل من التقارير التي تقارن وتحدد Chuanmutong والنباتات ذات الصلة. وبالتالي ، فإن طريقة مراقبة الجودة لضمان أصالة Chuanmutong تستحق مزيدا من الدراسة.

تتكون المكونات الكيميائية ل Chuanmutong بشكل أساسي من ترايتيربينويدس خماسي الحلقات من نوع الأوليانان وجليكوسيدات وفلافونويد وأحماض عضوية11،12،13،14. من بينها ، حمض الأوليانوليك ، β-سيتوستيرول ، ستيغماستيرول ، وإرغوستيرول لها تأثيرات مدرة للبول ذات شدة مختلفة ، والتي قد تكون مواد دوائية محتملة لتعزيز إدرار البول وتخفيف بيلة الخنق15,16. يتم الحصول على البصمات الكيميائية عن طريق فصل واكتشاف العديد من المكونات الكيميائية الموجودة في العينات بواسطة كروماتوغرافيا سائلة عالية الأداء (HPLC) ، كروماتوغرافيا الغاز (GC) ، إلخ. اعتماد أساليب التحليل الإحصائي المناسبة لتحليل خصائص Chuanmutong يمكن أن تحدد مراقبة الجودة الشاملة والتحديد العلمي للطب الصيني التقليدي17،18،19.

في هذه الدراسة ، تم جمع 10 دفعات من أصناف Chuanmutong الأصلية وخمس دفعات من الغش. تمت مقارنة جودتها وتحليلها بواسطة طريقة بصمة HPLC جنبا إلى جنب مع التعرف على الأنماط المتعددة ، بما في ذلك التحليل العنقودي (CA) ، وتحليل المكون الرئيسي (PCA) ، وتحليل التمييز الجزئي المتعامد للمربعات الصغرى (OPLS-CA) ، وتحديد محتوى المكون الدوائي. يحدد هذا البروتوكول طريقة لتحديد الأصناف الأصلية ذات الخصوصية العالية ، وهي استراتيجية جديدة للتحديد العلمي للأصناف الأصلية والغش للمواد الطبية الصينية.

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Protocol

1. طرق الكشف عن بصمات الأصابع الكيميائية

  1. الظروف الكروماتوغرافية
    1. تحضير الأسيتونيتريل (A) / الماء (B) المرحلة المتنقلة. قم بتعيين برنامج تدرج على النحو التالي في برنامج HPLC: 0-20 دقيقة ، 3٪ A-10٪ A ؛ 20-25 دقيقة ، 10٪ أ -13٪ أ ؛ 25-65 دقيقة ، 13٪ أ -25٪ أ ؛ 65-75 دقيقة ، 25٪ أ -40٪ أ ؛ 75-76 دقيقة ، 40٪ أ -3٪ أ ؛ 76-85 دقيقة ، 3٪ أ - 3٪ أ.
    2. حافظ على معدل تدفق المرحلة المتنقلة عند 1.0 مل / دقيقة.
    3. قم بإجراء الفصل الكروماتوجرافي على عمود C18 (250 مم × 4.6 مم ، 5 ميكرومتر) يتم الحفاظ عليه عند 30 درجة مئوية.
    4. اضبط حجم الحقن على 10 ميكرولتر.
    5. كشف العينات بطول موجي 205 نانومتر.
      ملاحظة: للحصول على الإعدادات المحددة للظروف الكروماتوغرافية ، راجع إجراءات تشغيل برنامج العمل الخاص بالكروماتوغرافيا السائلة عالية الأداء (جدول المواد).
  2. تحضير محلول العينة
    1. طحن المواد الخام إلى حجم الجسيمات موحدة عن طريق تمريرها من خلال شبكة من النايلون بقطر داخلي 850 ميكرومتر ± 29 ميكرومتر.
    2. ضع 2 جم من المادة الخام المطحونة (وزنها بدقة) في قارورة مخروطية سعة 50 مل مع سدادة وأضف 50 مل من الميثانول. ضع السدادة على القارورة والموجات فوق الصوتية (600 واط ، 40 كيلو هرتز) لمدة 30 دقيقة.
    3. ثم قم بتبريد القارورة إلى درجة حرارة الغرفة (RT). قم بوزن العينات مرة أخرى ، وعوض الوزن الأولي عن طريق استبدال المستخرج المفقود.
    4. صب 4 مل من محلول الميثانول الذي يحتوي على المستخلصات الطبية في دورق حجمي سعة 10 مل. أضف 6 مل من H2O ، واخلطها واتركها تستقر لمدة 10 دقائق.
    5. أخيرا ، قم بتصفية المادة الطافية من خلال غشاء مرشح 0.45 ميكرومتر وضعها في وضع الاستعداد.
  3. التحقق من صحة طرق الكشف عن بصمات الأصابع
    1. قم بإعداد العينة كما هو موضح أعلاه (الخطوة 1.2) وأخضعها لتحليل HPLC (الخطوة 1.1) ست مرات في اليوم. لتقييم الدقة، احسب الانحراف المعياري النسبي (RSD) لوقت الاحتفاظ النسبي ومناطق الذروة النسبية كما هو موضح في الخطوة 1.3.5.
    2. قم بتقييم استقرار محلول العينة من خلال تحليل نفس محلول العينة المخزن في RT لمدة 0 و 2 و 4 و 6 و 8 و 12 و 24 ساعة، وحساب RSD لوقت الاحتفاظ النسبي ومناطق الذروة النسبية كما هو موضح في الخطوة 1.3.5.
    3. خذ ست نسخ متماثلة من نفس العينة (CMT-4) ، وقم بإعداد محلول العينة وفقا للإجراء أعلاه (الخطوة 1.2) ، واكتشف بصمة إصبعه في HPLC باتباع الخطوة 1.1. احسب RSD لوقت الاستبقاء النسبي ومناطق الذروة النسبية، وقم بتقييم قابليته للتكرار كما هو موضح في الخطوة 1.3.5.
    4. ثم استخدم رقم الذروة 10 في الشكل 1B كذروة مرجعية واحسب RSD لوقت الاحتفاظ النسبي ومنطقة الذروة النسبية لكل قمة مشتركة كما هو موضح في الخطوة 1.3.5.
    5. استخدم الصيغ المذكورة أدناه لحساب وقت الاحتفاظ النسبي ومنطقة الذروة النسبية لكل قمة مشتركة:
      T re = T مميزة / Tمرجع
      Are = خاصية / مرجع A
      حيث T re = وقت الاحتفاظ النسبي ، T الخاصية = وقت الاحتفاظ الذروة المميز ، Tالمرجع = وقت الاحتفاظ بالذروة المرجعية ، Are = منطقة الذروة النسبية ، الخاصية = منطقة الذروة المميزة ، والمرجع= منطقة الذروة المرجعية.
      ملاحظة: يتطلب إنشاء بصمات الطب الصيني التقليدي عموما اختيار قمة كروماتوغرافية يسهل الحصول عليها وذات دقة عالية. يستخدم هذا كذروة مرجعية لتحديد بصمات الأصابع وفحص ثباتها وقابليتها للتكاثر.

2. إنشاء تحليل بصمات الأصابع والتشابه Chuanmutong

  1. استخدم 10 دفعات من العينات الأصلية وخمس دفعات من المواد المغشوشة مثل Clematis argentilucida (Levl. et Vant.) W. T. Wang (CC) ، Clematis apiifolia var. obtusidentata Rehd. وآخرون ويلس. (العاصمة) ، ياسمين بيتراي هاند - ماز. (DE) ، ياسمين غوريانا روكسب. Var. finetii Rehd. et ويلز (XS) ، وياسمين فينيتيانا ليفل. et فانيوت. (SMT) كعينات لتحليل بصمات الأصابع.
  2. قم بإعداد حلول العينة كما هو موضح في الخطوة 1.2. قم بإجراء تحليل بصمات الأصابع لجميع محاليل العينات بواسطة HPLC وفقا للشروط الموضحة في الخطوة 1.1.
  3. استيراد البيانات ذات الصلة إلى نظام تقييم التشابه للبصمات الكروماتوغرافية للطب الصيني التقليدي (SESCF-TCM ، إصدار 2012). سيقوم النظام بتعيين القمم ذات الارتفاع المعقول والدقة الجيدة في الكروماتوجرام لجميع العينات كقمم شائعة.
    ملاحظة: يمكن تنزيل برنامج SESCF-TCM بعد التسجيل على الموقع الإلكتروني للجنة دستور الأدوية الصيني (http://114.247.108.158:8888/login).
    1. في البرنامج ، انقر فوق الزر تعيين الطيف المرجعي في القائمة.
    2. ثم في نافذة إعدادات المعلمات ، اضبط عرض النافذة الزمنية على 0.5 وحدد طريقة توليد طيف التحكم كطريقة وسيطة.
    3. انقر فوق معايرة متعددة النقاط في القائمة الرئيسية ، ثم حدد مطابقة الذروة كمطابقة ذروة الطيف الكامل.
    4. أخيرا ، انقر فوق إنشاء عنصر تحكم لإنشاء بصمة كروماتوغرافية مرجعية للأنواع الأصلية من Chuanmutong.
  4. استيراد وقت الاحتفاظ ومنطقة الذروة ل 10 دفعات من عينات Chuanmutong الأصلية وخمس دفعات من المواد المغشوشة إلى SESCF-TCM لتحليلها. العمليات المحددة هي كما يلي:
    1. في البرنامج ، انقر فوق الزر "تعيين الطيف المرجعي " في القائمة الرئيسية.
    2. في نافذة إعدادات المعلمة ، قم بتعيين بصمة كروماتوغرافية مرجعية للأنواع الأصلية من Chuanmutong كمرجع، وحدد طريقة توليد طيف التحكم كطريقة وسيطة ، واضبط عرض النافذة الزمنية على 0.5.
    3. انقر فوق معايرة متعددة النقاط في القائمة الرئيسية ، ثم حدد مطابقة الذروة كمطابقة ذروة الطيف الكامل.
    4. أخيرا ، انقر فوق حساب التشابه لحساب التشابه بناء على بصمات كروماتوجرام المرجعية ل Chuanmutong. أخيرا ، احسب تشابه بصمات الأصابع باستخدام نظام تقييم بصمات الأصابع الكروماتوغرافية للطب الصيني (إصدار 2012).
      ملاحظة: بالنسبة للعمليات المحددة ، راجع مواصفات التشغيل لنظام تقييم بصمات الأصابع الكروماتوغرافية للطب الصيني (إصدار 2012).

3. تحليل التعرف على الأنماط المتعددة لبصمة Chuanmutong

  1. التحليل العنقودي (CA)
    1. استخدم مناطق الذروة ل 12 قمة شائعة في بصمات 10 دفعات من عينات Chuanmutong الأصلية ودفعاتها الخمس من الغش كمتغيرات ، وأدخلها في برنامج التحليل الإحصائي للتحليل العنقودي المنهجي (CA).
    2. اختر طريقة بين المجموعات واستخدم معامل ارتباط بيرسون كأساس للتصنيف لرسم مخطط تحليل الكتلة ل Chuanmutong وزناته. العمليات المحددة هي كما يلي:
      1. في برنامج التحليل الإحصائي ، انقر فوق ملف لاستيراد البيانات.
      2. انقر فوق تحليل في القائمة ثم انقر فوق نظام التجميع في التصنيف.
      3. حدد منطقة الذروة المشتركة كمتغير ، واضبط عدد المجموعات على أربعة.
      4. انقر فوق الطريقة ، وحدد طريقة التجميع كاتصال بين المجموعات ، وحدد الفاصل الزمني للقياس ك Pearson Correlation ، وانقر فوق "موافق " لرسم خريطة CA.
  2. تحليل المكونات الرئيسية (PCA)
    1. قم باستيراد منطقة الذروة المشتركة النسبية للأصناف الأصلية ومغشوشاتها إلى برنامج التحليل لتحليل PCA ، واستخدم خريطة نقاط PCA لتقييم خريطة مصفوفة الدرجات لاختلافات العينة. العمليات المحددة هي كما يلي:
      1. افتح برنامج تحليل البيانات ، وانقر فوق ملف في القائمة وقم بإنشاء مشروع عادي جديد. قم باستيراد منطقة الذروة المكونة من 12 قمة شائعة في جدول بيانات (على سبيل المثال ، تنسيق Excel) من نظام HPLC. ثم انقر فوق " إنهاء" لإكمال استيراد البيانات.
      2. انقر فوق جديد لإنشاء نموذج جديد لتعيين نوع النموذج باستخدام PCA. انقر فوق Autofit و Add لتناسب البيانات ، ثم انقر فوق Scores للحصول على خريطة نقاط PCA.
  3. تحليل تمييز المربعات الصغرى الجزئية المتعامدة (OPLS-DA)
    1. استخدم طريقة تحليل التمييز بين المربعات الصغرى الجزئية المتعامدة مع وضع الإشراف لإجراء مزيد من التحليل لقمم منطقة الذروة المشتركة النسبية لأصناف Chuanmutong الأصلية والغش ورسم خريطة درجة تصنيف OPLS-DA لجميع العينات. العمليات المحددة هي كما يلي:
      1. في برنامج تحليل البيانات ، انقر فوق ملف في القائمة لاستيراد ملف وإنشاء مشروع عادي جديد. قم باستيراد منطقة الذروة المكونة من 12 قمة شائعة في جدول بيانات من نظام HPLC ، ثم انقر فوق إنهاء لإكمال استيراد البيانات.
      2. انقر فوق جديد لإنشاء نموذج جديد لتعيين نوع النموذج باستخدام PCA. انقر فوق احتواء تلقائي وإضافة لتناسب البيانات. ثم انقر فوق الدرجات للحصول على خريطة نقاط PCA.
      3. انقر فوق جديد واختر جديد كنموذج واحد لتعيين نوع النموذج باستخدام OPLS-DA.
      4. انقر فوق مقياس واضبط النوع باستخدام Par for All. انقر فوق Autofit أولا ثم انقر فوق النتائج للحصول على خريطة نقاط OPLS-DA.
    2. من أجل تحديد تأثير كل قمة مشتركة في Chuanmutong على نتائج تصنيفها والفرق بين مواد Chuanmutong الأصلية والغش ذي الصلة ، استخدم الأهمية المتغيرة في الإسقاط (VIP) للتحليل.
    3. ارسم خريطة VIP للمكونات المختلفة ل Chuanmutong. استخدم خريطة VIP الناتجة لتقييم تأثير كل متغير على التصنيف ولفرز المكونات التي تساهم بشكل كبير في الاختلافات بين المجموعات. العمليات المحددة هي كما يلي:
      1. في برنامج تحليل البيانات ، انقر فوق تحليل في القائمة وانقر فوق التباديل ، واضبط عدد التباديل على 200 ، واحصل على R 2 و Q2 من خريطة نقاط OPLS-DA.
      2. انقر فوق VIP واختر VIP Predictive للحصول على خريطة VIP.

4. تحديد β-سيتوستيرول في تشوانموتونغ بواسطة HPLC

  1. الشروط الكروماتوغرافية (راجع الخطوة 1.1)
    1. تحضير المرحلة المتنقلة: الميثانول - الماء (97: 3).
    2. اضبط معدل تدفق المرحلة المتنقلة على 1.0 مل / دقيقة.
    3. قم بإجراء الفصل الكروماتوجرافي على عمود C18 (250 مم × 4.6 مم ، 5 ميكرومتر) يتم الحفاظ عليه عند 30 درجة مئوية.
    4. اضبط حجم الحقن على 10 ميكرولتر.
    5. كشف المكون بطول موجي 204 نانومتر.
  2. تحضير محلول العينة
    1. تحضير محلول مخزون قياسي من β-سيتوستيرول (0.1 مجم / مل) عن طريق إذابة كمية موزونة بدقة من المعيار المرجعي المقابل في الميثانول.
    2. طحن عينة التحليل من المواد الخام إلى حجم الجسيمات موحدة عن طريق تمرير العينة من خلال شبكة النايلون بقطر داخلي من 180 ميكرومتر ± 7.6 ميكرومتر.
    3. ضع 2 غرام من المادة الخام المطحونة (وزنها بدقة) في قارورة مستديرة القاع وأضف 50 مل من الكلوروفورم إليها.
    4. قم بتوصيل القارورة بمكثف الارتجاع وقم بتسخينها في حمام مائي مغلي (غليان معتدل) لمدة 60 دقيقة. قم بتصفية محلول الاستخراج باستخدام ورق ترشيح 15-20 ميكرومتر.
    5. تبخر الراشح إلى ما يقرب من الجفاف في حمام مائي مغلي (غليان معتدل) لمدة 10 دقائق تقريبا.
    6. قم بإذابة البقايا وتكوين الحجم إلى 5 مل باستخدام الميثانول. أخيرا ، مرر المادة الطافية عبر غشاء مرشح 0.45 ميكرومتر ، وضعها في وضع الاستعداد.
  3. التحقق من صحة الطريقة
    1. خذ محلول مخزون β-سيتوستيرول المحضر في الخطوة الفرعية 4.2.1 ، وقم بتخفيفه بتركيزات 100٪ ميثانول ، وقم بإعداد محاليل بتركيزات 100 ميكروغرام / مل ، و 80 ميكروغرام / مل ، و 60 ميكروغرام / مل ، و 50 ميكروغرام / مل ، و 40 ميكروغرام / مل ، و 30 ميكروغرام / مل ، و 20 ميكروغرام / مل.
    2. حقن العينات تحت الظروف الكروماتوغرافية الموضحة في الخطوة 4.1 لتحديد منطقة الذروة ، وإجراء تحليل الانحدار مع منطقة الذروة إلى حجم الحقن ، والحصول على معادلة الانحدار ومعامل الارتباط لتقييم خطيتها.
    3. قم بإعداد العينات كما هو موضح أعلاه (الخطوة 4.2) وإخضاعها لتحليل HPLC (الخطوة 4.1) ست مرات في نفس اليوم. ثم احسب RSD لمناطق الذروة لتقييم الدقة.
    4. قم بتقييم استقرار محلول العينة عن طريق تحليل نفس محاليل العينة المخزنة في RT لمدة 0 و 2 و 4 و 6 و 8 و 12 و 24 ساعة ، كما هو موضح في الخطوة 4.1. ثم احسب RSD لمناطق الذروة كما هو موضح في الخطوة 1.3.5.
    5. افحص قابلية التكرار عن طريق إذابة نفس العينة (CMT-4) في السداسي ، المعد كما هو موضح في الخطوة 4.2 ، وإخضاعها لتحليل HPLC كما هو موضح في الخطوة 4.1. ثم احسب RSD لمحتوى β-سيتوستيرول في ست عينات.
    6. تقييم دقة الطريقة من خلال استخدام طريقة الجمع القياسية. لهذا, إضافة حلول مرجعية β-سيتوستيرول إلى العينات في 80٪, 100٪, و 120٪ من محتوى β-سيتوستيرول وكرر كل شرط ثلاث مرات كما هو موضح في الخطوة 4.1. قم بتقييم دقة الطريقة عن طريق حساب متوسط الاسترداد و RSD.
      ملاحظة: صيغة حساب معدل الاسترداد (RR) هي كما يلي:
      نسبة RR = [(M t - M 0) / Ms] × 100
      حيث M t = جودة β-سيتوستيرول بعد إضافة المعيار, M 0 = جودة محلول العينة, و Ms = جودة β-سيتوستيرول المضافة.
  4. تحديد محتوى β سيتوستيرول من العينات
    1. خذ 10 دفعات من المواد الطبية الصينية الأصلية وخمس دفعات من الغش ذي الصلة لإعداد محاليل العينات وفقا للخطوة 4.2.
    2. ثم حقن كل محلول عينة ومحلول مرجعي β-سيتوستيرول لتحديد منطقة الذروة في ظل الظروف الموضحة في الخطوة 4.1, وحساب محتوى β-سيتوستيرول لكل عينة باستخدام طريقة نقطة واحدة القياسية الخارجية.

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Representative Results

البصمة الكروماتوغرافية ل Chuanmutong وتحليل التشابه (SA)
كانت قيم RSD لوقت الاحتفاظ النسبي للدقة والتكرار والاستقرار أقل من 0.46٪ و 1.65٪ و 0.53٪ على التوالي ؛ كانت قيم RSD لمنطقة الذروة النسبية أقل من 4.23٪ و 3.56٪ و 3.96٪ على التوالي. كما هو موضح في الأشكال 1A ، B ، كان هناك 12 قمة مشتركة مميزة (من الذروة 1 إلى الذروة 12) في بصمات HPLC في عينات Chuanmutong الأصلية العشرة. نظرا لأن منطقة الذروة رقم 10 كانت كبيرة نسبيا ، فقد كانت الدقة جيدة ؛ نظرا لأنه كان مكونا موجودا في كل عينة ، فقد تم استخدامه كذروة مرجعية للتحقيق في استقرار بصمة الإصبع وإمكانية استنساخها. بعد ذلك ، تم أخذ الذروة رقم 10 على أنها الذروة المرجعية (S) ، وتم حساب وقت الاحتفاظ النسبي للقمم ال 11 المتبقية.

في تحليل التشابه ، كلما اقترب معامل الارتباط من 1 ، زاد التشابه بين العينات. كما هو موضح في الجدول 1 ، كانت درجات التشابه ل 10 دفعات من Chuanmutong 0.910-0.989. أظهرت هذه النتائج أن الدفعات ال 10 من Chuanmutong كانت لها تشابه كبير واتساق جيد ، والتي يمكن استخدامها لتقييم الجودة الشاملة ل Chuanmutong. كما هو موضح في الشكل 1 ج ، تم الحصول على بصمات خمس دفعات من الغش. كان التشابه بين بصمات خمس دفعات من الغش وبصمات التحكم في Chuanmutong 0.133-0.720 فقط (الجدول 1) ، مما يشير إلى وجود اختلافات واضحة بين العينات الأصلية والغش ذي الصلة. تركزت الاختلافات بشكل أساسي في أرقام الذروة الكروماتوغرافية على الكروماتوجرام في 28-55 دقيقة. وبالتالي ، يمكن لبصمات التحكم في Chuanmutong التمييز بشكل فعال بين العينات الأصلية والزناة ذات الصلة.

تم استخدام البرنامج الإحصائي SPSS 26 لتحليل CA في هذه التجربة (الشكل 2A) ؛ تم تقسيم 15 دفعة من العينات إلى فئتين عندما كانت مسافة التصنيف 20. كانت الفئة الأولى 10 دفعات من Chuanmutong والزناة المعتادين (CC). الفئة الثانية كانت الزناة في Chuanmutong ، بما في ذلك DC و DE و XS و SMT. عندما كانت مسافة التصنيف أربعة ، تم تقسيم جميع العينات إلى أربع فئات. كانت الفئة الأولى 10 دفعات من Chuanmutong ، والفئة الثانية كانت CC ، والفئة الثالثة كانت SMT و XS ، والفئة الرابعة كانت DC و DE. أظهرت نتائج التصنيف أن جودة الأصناف الأصلية من Chuanmutong كانت هي نفسها بشكل أساسي ، وكانت هناك اختلافات واضحة مع جميع الزناة. في الوقت نفسه ، بالمقارنة مع الغش الآخر ، كان CC أقرب إلى مجموعة Chuanmutong الأصلية ، ولكن لا يزال من الممكن تمييزه عند تضييق مسافة التصنيف.

تم استيراد مناطق الذروة المشتركة للدفعات ال 15 من العينات إلى برنامج تحليل البيانات لتحليل PCA ، وأظهرت مصفوفة الدرجات (R 2 x = 0.994 ، Q2 = 0.961) (الشكل 2B) أن تأثير التجميع للدفعات ال 15 من العينات كان واضحا. على الجانب الأيمن من المحور Y كانت هناك 10 دفعات من Chuanmutong و CC. من بينها ، كان CC يقع في الربع الأول ، والذي يختلف عن الأصناف الأصلية من Chuanmutong. كان الجانب الأيسر من المحور Y هو الزناة ، بما في ذلك SMT و XS و DE و DC. من بينها ، كانت SMT و XS تقع في الربع الثاني ، وتقع DE و DC في الربع الثالث. عند مقارنة الأصناف الأصلية من Chuanmutong والغش التقليدي ، فإن الفرق بين CC والأصناف الأصلية صغير نسبيا ، في حين أن الفرق بين الغش الأصلي والآخر واضح.

تم استخدام منطقة الذروة المشتركة ل Chuanmutong وغشها كمتغير ، تم استيرادها إلى برنامج تحليل البيانات ل OPLS-DA ، ثم تم رسم مصفوفة الدرجات (الشكل 3 أ). كان R 2 x [1] من نموذج OPLS-DA 0.695 ، وكان R 2 x [2] 0.605 ، وكلاهما أكبر من 0.5 ، مما يشير إلى أن النموذج مستقر وموثوق ويمكن استخدامه لتمييز العينات الأصلية عن الغش.

يمكن أن نرى من الشكل 3 أ أن نقاط عينة الغش الأصلي وغيره من الكائنات المغشوشة كانت منفصلة تماما، ولم يكن هناك تقاطع بين نقاط العينة. تم تقسيم جميع العينات إلى ثلاثة أجزاء. كانت الأصناف الأصلية من Chuanmutong و CC متشابهة. تم تجميع عينات XS و DC و DE في فئة واحدة ، وكانت عينة SMT هي الفئة الأخيرة. علاوة على ذلك ، تم استخدام طريقة الحكم ذات الأهمية المتغيرة في الإسقاط (VIP) (الشكل 3B) لفحص قمم المكونات المختلفة في بصمة كل عينة. تم أخذ VIP > 1.0 كمعيار لفحص متغيرات seveb التي تساهم بشكل كبير في التصنيف بين مجموعات العينات. وفقا لنتائج الفحص ، كانت مكونات العلامة الرئيسية التي تسببت في الاختلاف في التركيب بين العينات الأصلية والغش هي القمم رقم 9 ورقم 5 ورقم 7 ورقم 6 ورقم 10 ورقم 3 ورقم 2. كانت قيمة VIP للقمم المتبقية أقل من 1 ، مما كان له تأثير ضئيل على تمييز العينات.

تم العثور على العلاقة الخطية بين منطقة ذروة β-سيتوستيرول وتركيز محلولها باستخدام تحليل الانحدار. أطاع هذا الاعتماد معادلة Y = 5.4918 X-4.5563 ، حيث Y هي منطقة ذروة β-سيتوستيرول و X هي محتوى β-سيتوستيرول في ميكروغرام / مل. في الوقت نفسه ، معامل الارتباط r = 0.9995 ، والذي يلبي المتطلبات. كان RSD لاختبار الدقة واختبار الاستقرار واختبار التكرار 1.76٪ و 4.22٪ و 3.85٪ على التوالي. أظهرت النتائج أن طريقة تحديد محتوى β-سيتوستيرول كانت خطية جيدة ودقة وقابلية للتكرار ، وكان محلول العينة مستقرا في غضون 24 ساعة. كان متوسط النسبة المئوية للاسترداد عند ثلاثة مستويات 101.50٪ و 101.90٪ و 100.72٪. كان RSD المقابل 2.56٪ و 1.56٪ و 1.68٪ على التوالي. أكدت الاتفاقات الجيدة بين القيم النظرية والفعلية المحددة دقة وقابلية تطبيق طريقة التحليل. يظهر الكروماتوجرام السائل ل β-سيتوستيرول في الشكل 4 ، وتم تحديد محتوى β-سيتوستيرول في 15 دفعة من العينات (الجدول 2). أظهرت النتائج أن تركيز β-سيتوستيرول في 10 دفعات من العينات الأصلية كان في حدود 97.53-161.56 ميكروغرام / غرام (مستقر نسبيا). تم الكشف عن هذا المكون في جميع الدفعات الخمس من الغش ، ولكن المحتوى يختلف اختلافا كبيرا.

Figure 1
الشكل 1: بصمات أصابع Chuanmutong وزناتها. (أ) بصمات 10 دفعات من عينات Chuanmutong الأصلية (S1: CMT-1 ، S2: CMT-2 ، S3: CMT-3 ، S4: CMT-4 ، S5: CMT-5 ، S6: CMT-6 ، S7: CMT-7 ، S8: CMT-8 ، S9: CMT-9 ، S10: CMT-10). (ب) بصمات كروماتوغرام مرجعية لعينات تشوانموتونغ الأصلية؛ كانت أوقات الاحتفاظ النسبية 0.18 (الذروة رقم 1) ، 0.22 (الذروة رقم 2) ، 0.29 (الذروة رقم 3) ، 0.72 (الذروة رقم 4) ، 0.75 (الذروة رقم 5) ، 0.82 (الذروة رقم 6) ، 0.86 (الذروة رقم 7) ، 0.92 (الذروة رقم 8) ، 0.96 (الذروة رقم 9) ، 1.00 (الذروة رقم 10) ، 1.02 (الذروة رقم 11) ، 1.37 (الذروة رقم 12). (ج) بصمات خمس دفعات من مواد تشوانموتونغ المغشوشة (S1: CC ، S2: DC ، S3: DE ، S4: XS ، S5: SMT). (د) مقارنة بين بصمات كروماتوجرام مرجعية لعينات Chuanmutong الأصلية والدفعات الخمس من مغشوشاتها (S1: بصمات كروماتوجرام مرجعية ، S2: CC ، S3: DC ، S4: DE ، S5: XS ، S6: SMT). الرجاء الضغط هنا لعرض نسخة أكبر من هذا الشكل.

Figure 2
الشكل 2: تحليل CA و PCA ل 10 دفعات من عينات Chuanmutong الأصلية وخمس دفعات من المواد المغشوشة. أ: جتحليل . (ب) تحليل PCA. الرجاء الضغط هنا لعرض نسخة أكبر من هذا الشكل.

Figure 3
الشكل 3: خريطة نقاط OPLS-DA وخريطة نقاط VIP ل 10 دفعات من عينات Chuanmutong الأصلية وخمس دفعات من المواد المغشوشة. (أ) خريطة درجات OPLS-DA. (ب) خريطة درجات كبار الشخصيات. الرجاء الضغط هنا لعرض نسخة أكبر من هذا الشكل.

Figure 4
الشكل 4: الكروماتوجرام السائل لسيتوستيرول β. S1: β-سيتوستيرول ، S2: CMT-4 ، S3: XS ، S4: DC ، S5: SMT ، S6: CC ، S7: DE. الرجاء الضغط هنا لعرض نسخة أكبر من هذا الشكل.

العينات اسم التشابه
أصناف أصلية من تشوانموتونج سمت-1 0.947
سمت-2 0.910
CMT-3 0.989
CMT-4 0.937
سي إم تي-5 0.989
CMT-6 0.988
CMT-7 0.956
CMT-8 0.959
CMT-9 0.939
CMT-10 0.966
الزناة سي سي 0.599
دي سي 0.720
دي 0.133
إكس إس 0.694
سمت 0.180

الجدول 1: نتائج تشابه 10 دفعات من عينات Chuanmutong الأصلية ومغشوشاتها. من خلال استيراد البيانات ذات الصلة إلى نظام تقييم بصمات الأصابع الكروماتوغرافية للطب الصيني ، تم حساب تشابه 10 دفعات من عينات Chuanmutong الأصلية وخمس دفعات من الغش.

العينات اسم المحتوى (ميكروغرام / جم)
أصناف أصلية من تشوانموتونج سمت-1 103.5
سمت-2 124.6
CMT-3 131
CMT-4 121.1
سي إم تي-5 97.5
CMT-6 113.8
CMT-7 105.6
CMT-8 161.6
CMT-9 118
CMT-10 123.5
الزناة سي سي 157.4
دي سي 165.6
دي 32.9
إكس إس 69.7
سمت 192.2

الجدول 2: نتائج تحديد محتوى β-سيتوستيرول في عينات Chuanmutong الأصلية ومغشوشها.

الشكل التكميلي 1: الكروماتوغرافيا السائلة في ظل ظروف تحضير عينة مختلفة وظروف كروماتوغرافية مختلفة. (A) أنظمة الطور المتنقلة (S1: محلول حمض الفورميك الأسيتونيتريل - 0.1٪ ، S2: محلول حمض الأسيتونيتريل - 0.5٪ ، S3: الماء النقي الأسيتونيتريل ، S4: محلول حمض الفوسفوريك الأسيتونيتريل - 0.05٪ ، S5: الماء النقي للميثانول). (ب) الأطوال الموجية للكشف (S1: 205 نانومتر ، S2: 230 نانومتر ، S3: 250 نانومتر ، S4: 300 نانومتر). (ج) درجات حرارة العمود (S1: 20 درجة مئوية ، S2: 30 درجة مئوية ، S3: 40 درجة مئوية). (د) معدلات التدفق (S1: 0.8 مل/دقيقة، S2: 0.9 مل/دقيقة، S3: 1.0 مل/دقيقة). (ه) طرق الاستخراج (S1: الاستخراج بالموجات فوق الصوتية ، S2: استخراج الارتجاع). (و) مذيبات الاستخلاص (S1: أسيتات الإيثيل ، S2: الإيثانول ، S3: الكلوروفورم ، S4: n-butanol ، S5: الميثانول). (ز) وقت الاستخراج (S1: 15 دقيقة ، S2: 30 دقيقة ، S3: 60 دقيقة). الرجاء الضغط هنا لتنزيل هذا الملف.

الشكل التكميلي 2: الكروماتوجرام السائل للإرغوستيرول ، وستيغماستيرول ، وتشوانموتونغ الأصلي. S1: ستيغماستيرول ، S2: إرغوستيرول ، S3: CMT-4. الرجاء الضغط هنا لتنزيل هذا الملف.

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Discussion

يعد جمع العينات للبحث الخطوة الرئيسية الأولى لبناء التعرف على الأنماط المتعددة في تحديد أصالة المواد الطبية الصينية. من خلال أبحاث السوق ، وجدنا أن سيتشوان يان وليانغشان وليشان هي مناطق الإنتاج الرئيسية للموارد البرية في تشوانموتونغ. الأصناف ذات الصلة من نفس الجنس لها أيضا نفس التوزيع الجغرافي 6,20 ؛ غالبا ما يساء استخدام CC و DC و DE و XS و SMT ك Chuangmutong16,21 ؛ لذلك ، في هذه الدراسة ، تم جمع 10 دفعات من Chuanmutong الأصلية وخمس دفعات من العينات المختلطة في أماكن المنشأ المذكورة أعلاه ، وتم تأكيد دقة الأصناف.

الخطوة الرئيسية الثانية هي فحص ظروف الكشف عن بصمة HPLC ، والتي يمكنها عرض أكبر قدر ممكن من المعلومات حول المكونات الكيميائية. في هذه الدراسة ، كما هو موضح في الشكل التكميلي 1 ، تم الحصول على عدد ومساحة القمم الكروماتوغرافية في ظل ظروف تحضير مختلفة ، بما في ذلك طرق الاستخلاص ومذيبات الاستخلاص ووقت الاستخراج. تم تحديد طريقة التحضير المثلى لحل عينة Chuanmutong. من ناحية أخرى ، تمت مقارنة عدد ودقة القمم الكروماتوغرافية للعينات في ظل ظروف كروماتوغرافية مختلفة. أنظمة الطور المتنقلة ، مثل محلول حمض الأسيتونيتريل -0.1٪ ، محلول حمض الأسيتونيتريل -0.5٪ ، الماء النقي الأسيتونيتريل ، محلول حمض الفوسفوريك الأسيتونيتريل -0.05٪ ، والماء النقي للميثانول ، الأطوال الموجية للكشف ، مثل 205 نانومتر ، 230 نانومتر ، 250 نانومتر ، و 300 نانومتر ، ودرجات حرارة العمود ، مثل 20 درجة مئوية ، و 30 درجة مئوية ، و 40 درجة مئوية ، ومعدلات التدفق ، مثل 0.8-1.0 مل / دقيقة ، تم التحقيق فيها. تم تحديد الظروف الكروماتوغرافية المثلى لتحليل عينات Chuanmutong. علاوة على ذلك ، تم تأكيد جدواها من خلال التحقق المنهجي ، وتم بناء طريقة الكشف عن بصمة HPLC ل Chuanmutong بنجاح.

الخطوة الرئيسية الثالثة هي تحليل وإيجاد المعلومات المختلفة في بصمات الطب الصيني الأصيل والزناة. في هذه الدراسة ، أولا ، تم تحليل تشابه بصمات الأصابع باستخدام SESCF-TCM (إصدار 2012). وقد وجد أن التشابه بين بصمات 10 دفعات من عينات Chuanmutong الأصلية وبصمة خاصية التحكم كان مرتفعا جدا. وبالمقارنة ، كان التشابه بين بصمات خمس دفعات من الغش وبصمة الإصبع المميزة للتحكم أقل بكثير من العينات الأصلية. ثم تم تقديم CA و PCA و OPLS-DA لتحليل معلومات الذروة الشائعة للبصمات الكيميائية. تظهر نتائج كل من CA و PCA أن CC المغشوش شائع الاستخدام بين الزناة المختلفين أقرب نسبيا إلى الأصلي ، وهو أمر يصعب تمييزه. ومع ذلك ، عندما يتم تعديل مسافة تصنيف CA إلى أربعة ، يمكن تحقيق التحديد الفعال بين الأصل والمغشوش. استنادا إلى 12 قمة مشتركة للمواد الأصلية ، تم تقييم قيم مساهمة القمم التفاضلية للغش كميا بواسطة OPLS-DA ، وحصلت على سبع قمم كروماتوغرافية تفاضلية ، وهي الذروة رقم 9 ، والذروة رقم 5 ، والذروة رقم 7 ، والذروة رقم 6 ، والذروة رقم 10 ، والذروة رقم 3 ، والذروة رقم 2. يمكن استخدامها لتحديد المواد الأصلية والمزيفة ل Chuanmutong بشكل فعال ، والتي تعد المكونات الرئيسية المميزة للفرق بين الأصلي والمغشوش.

لم تتضمن الطبعة الأخيرة من دستور الأدوية الصيني بعد تحديد محتوى المكونات الفعالة ل Chuanmutong. من أجل تحسين مراقبة الجودة ، بحثت هذه الدراسة في طرق تحديد محتوى المكونات النشطة مثل β-سيتوستيرول ، إرغوستيرول ، سيتوستيرول ، وحمض الأوليانوليك المتعلقة بعمل مدر للبول في التقارير السابقة22،23،24،25،26. كما هو موضح في الشكل التكميلي 2 ، لم يتم اكتشاف إرغوستيرول في Chuanmutong الأصلي ، وكان من الصعب فصل Stigmasterol في مخطط الكروماتوجرام ولا يمكن قياسه بدقة. وأخيرا, تم إنشاء طريقة تحديد محتوى β-سيتوستيرول; أظهرت نتائج الكشف أنه تم العثور على β-سيتوستيرول في 10 دفعات من عينات Chuanmutong الأصلية وخمس دفعات من المواد المغشوشة. لذلك ، لم يكن β-سيتوستيرول فريدا للمواد الطبية الأصلية. على الرغم من أنه يمكن توفير بعض المعلومات حول جودة Chuanmutong ، إلا أنه لا يزال من الضروري إجراء مزيد من التحليل للقمم الكروماتوغرافية التفاضلية في بصمات الأصابع في المستقبل لمعرفة ما إذا كان يمكن العثور على المكونات المحددة المتعلقة بفعالية Chuanmutong.

في الوقت الحاضر ، غالبا ما يتم تحديد الأدوية الصينية التقليدية من خلال تشابه طيف بصمات الأصابع الكيميائية. ومع ذلك ، فإن هذا المؤشر عبارة عن معلمة تستند إلى المعلومات الإجمالية للقمم الكروماتوغرافية للعينة ، والتي لا يمكنها توفير مزيد من المعلومات حول تحديد الهوية والاختلافات الرئيسية للعينات المختلفة. لذلك ، استخدمت هذه الدراسة أيضا CA و PCA و OPLS-DA لتحديد معلومات الذروة الشائعة للبصمات الكيميائية ، ووجدت القمم الكروماتوغرافية التفاضلية الرئيسية بين العينات الأصلية والمغشوشة من Chuanmutong ، وحددتها بنجاح. أخيرا ، تم إنشاء البصمات الكيميائية المقترنة HPLC للتعرف على الأنماط المتعددة.

نظرا لأنه ليس من غير المألوف خلط المواد الطبية الصينية الأصيلة وزناتها ، مثل Fritillaria thunbergii و Herba Asari و Lonicera japonica ، فإن هذه الطريقة ستوفر استراتيجية جديدة لتحديد واضح وعلمي للمواد الطبية الصينية الأصيلة وزناتها. ستكون هذه الاستراتيجية ذات أهمية كبيرة لضمان جودة المواد الطبية الصينية في التطبيق السريري.

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Disclosures

ليس لدى المؤلفين ما يكشفون عنه.

Acknowledgments

تم دعم هذا العمل من قبل مشروع إدارة الطب الصيني التقليدي في سيتشوان (رقم 2020JC0088 ، رقم 2021MS203).

Materials

Name Company Catalog Number Comments
Acetic acid Zhiyuan Chemical Reagent Co., Ltd., Tianjin, China 2017381038
Acetonitrile Sigma-Aldrich  Trading Co., Ltd., Shanghai, China WXBD5243V
β-Sitosterol Meisai Biological Technology Co., Ltd., Chongqing, China 20210201
 C18 column Yuexu Material Technology Co., Ltd., Shanghai, China Welch Ultimate LP
Chuanmutong Guoqiang Chinese Herbal Pieces Co., Ltd., Sichuan, China  19020103 CMT-1
Chuanmutong Hongya Wawushan Pharmaceutical Co., Ltd., Sichuan, China  200701 CMT-2
Chuanmutong Hongpu Pharmaceutical Co., Ltd., Sichuan, China  200701 CMT-3
Chuanmutong Hongpu Pharmaceutical Co., Ltd., Sichuan, China  200901 CMT-4
Chuanmutong Xinrentai Pharmaceutical Co., Ltd., Sichuan, China  210701 CMT-5
Chuanmutong Haobo Pharmaceutical Co., Ltd., Sichuan, China  210401 CMT-6
Chuanmutong Xinrentai Pharmaceutical Co., Ltd., Sichuan, China  200901 CMT-7
Chuanmutong Wusheng Pharmaceutical Group Co., Ltd., Sichuan, China  201201 CMT-8
Chuanmutong Limin Chinese Herbal Pieces Co., Ltd., Sichuan, China  201001 CMT-9
Chuanmutong Yuhetang Pharmaceutical Co., Ltd., Sichuan, China 210501 CMT-10
Clematis argentilucida (Levl. et Vant.) W. T. Wang Madzi Bridge, Sanlang Township, Tianquan County, Sichuan, China  - CC
Clematis apiifolia var. obtusidentata Rehd. et Wils. Heilin Village, Qiliping Township, Hongya County, Sichuan, China  - DC
Clematis peterae Hand.-Mazz. Huangmu Village, Huangmu Township, Hanyuan County, Sichuan, China  - DE
Clematis gouriana Roxb. Var. finetii Rehd. et Wils Mixedang Mountain, Huangwan Township, Emei County, Sichuan, China  - XS
Clematis finetiana Levl. et Vaniot. Wannian Village, Huangwan Township, Emei County, Sichuan, China  - SMT
Electronic balance Haozhuang Hengping Scientific Instrument Co., Ltd., Shanghai,  China  FA1204
Ergosterol Meisai Biological Technology Co., Ltd, Chongqing, China 20210201
Ethanol Kelon Chemical Co., Ltd., Chengdu, China 2021112602
Ethyl acetate Zhiyuan Chemical Reagent Co., Ltd., Tianjin, China 2017042043
Formic acid Kelon Chemical Co., Ltd., Chengdu, China 2016062901
High performance liquid chromatography Agilent, USA. 1260
IBM SPSS Statistics version 26.0 International Business Machines Corporation, USA -
Methanol Sigma-Aldrich  Trading Co., Ltd., Shanghai, China WXBD6409V
Methanol Kelon Chemical Co., Ltd., Chengdu, China 202010302
n-butyl alcohol Zhiyuan Chemical Reagent Co., Ltd., Tianjin, China 2020071047
Petroleum ether Zhiyuan Chemical Reagent Co., Ltd., Tianjin, China 2020090125
Phosphoric acid Comeo Chemical Reagent Co., Ltd., Tianjin, China 20200110
SESCF-TCM version 2012 National Pharmacopoeia Commission, China - http://114.247.108.158:8888/login
Stigmasterol Meisai Biological Technology Co., Ltd., Chongqing, China 20210201
Trichloromethane Sinopharm Group Chemical Reagent Co., Ltd., Shanghai, China 20200214
Umetrics SIMCA version 14.1.0.2047 Umetrics, Sweden - https://www.sartorius.com/en/products/process-analytical-technology/data-analytics-software/mvda-software/simca/simca-free-trial-download
Ultrapure water machine Youpu Ultrapure Technology Co., Ltd., Sichuan, China UPH-II-10T
Ultrasonic cleaner Kunshan Hechuang Ultrasound Instrument Co., Ltd., Jiangsu, China KH3200E

DOWNLOAD MATERIALS LIST

References

  1. Chen, C. R. Chinese Medicine Specimen Picture Book. , Shanghai World Book Company. Shanghai. 116 (1935).
  2. Xiong, J., et al. Lignans from the stems of Clematis armandii ("Chuan-Mu-Tong") and their anti-neuroinflammatory activities. Journal of Ethnopharmacology. 153 (3), 737-743 (2014).
  3. Pan, L. L., et al. a lignan from the Chinese medicinal plant Clematis armandii, inhibits A431 cell growth via blocking p70S6/S6 kinase pathway. Integrative Cancer Therapies. 16 (3), 351-359 (2017).
  4. Chinese Pharmacopoeia Commission. Pharmacopoeia of The People's Republic of China: (Edition 2020). , The Medicine Science and Technology Press of China. China., Beijing. 38 (2020).
  5. Wang, D. G., Guo, J. L. Textual research on the materia medica and authenticity of Clematidis armandii. Lishizhen Medicine and Materia Medicine Research. 18 (11), 2696 (2007).
  6. Fang, Q. M., Zhang, M., Zhong, Y. Y. The natural resources and exploitation of Caulis Clematidis Armandii in Sichuan. West China Journal of Pharmaceutical Sciences. 20 (5), 404-406 (2005).
  7. Bai, M. N., Dai, Y. X., Wang, Y., Ren, Y. Y., Tan, R. Study on the identification of Caulis Clematidis Armandii. Research and Practice on Chinese Medicines. 31 (3), 13-16 (2017).
  8. Zhou, P. J., Li, X. F., Fu, D. H., Pu, X. Y., Zhu, G. Q. Pharmacognosy identification of Ethnomedicine Clematis ranunculoides Franchet. Journal of Guangzhou University of Traditional Chinese Medicine. 34 (3), 432-436 (2017).
  9. Guo, J. L., Tang, Y., Pei, J., Wang, D. G. Study on random amplified polymorphic DNA and sequence characterized amplified regions of Caulis Clematidis Armandii. Journal of Chengdu Medical College. 6 (4), 283-286 (2011).
  10. Liu, M. Z., Li, M. N., Yao, H., Liu, P. Molecular identification of Clematidis Armandii Caulis and its adulterants and closely related species by ITS2 sequence. Global Traditional Chinese Medicine. 4 (6), 446-450 (2011).
  11. Liu, J. J., Chen, X., Wei, Z. Q., Li, B. Chemical constituents and identification of the caules of Clematis armandii Franch.and Clematis montana Buch.-Ham. Natural Product Research and Development. 22 (6), 998-1000 (2010).
  12. Yang, T. R., Xu, Z., Shi, Y. N. Studies on four compounds from Clematis Montana. Journal of Liaoning University of Traditional Chinese Medicine. 10 (4), 142-143 (2008).
  13. Yan, L. H., Xu, L. Z., Zhou, Z. M., Yang, S. L. Chemical constituents from stems of Clematis armandii(I). Chinese Traditional and Herbal Drugs. 38 (3), 340-342 (2007).
  14. Li, X., et al. Traditional uses, phytochemistry, pharmacology, and toxicology of Akebiae Caulis and its synonyms: A review. Journal of Ethnopharmacology. 277, 114245 (2021).
  15. Ye, X., et al. Diuretic effect and material basis of Clematidis Armandii Caulis in rats. China Journal of Chinese Materia Medica. 44 (9), 1889-1894 (2019).
  16. Kuang, Y., et al. Consistency study of Caulis Clematidis Armandii and its traditionally used products and counterfeit species based on efficacy and pharmacognosy. Pharmacology and Clinics of Chinese Materia Medica. 36 (3), 115-121 (2020).
  17. Li, Y., et al. Quality assessment of Asarum heterotropoides var. mandshuricum based on HPLC multi-component determination and multiple pattern recognition method of fingerprint. Chinese Traditional and Herbal Drugs. 53 (1), 238-243 (2022).
  18. Li, Y., et al. Determination of multi-components of Paeoniae Alba Radix based on fingerprints and chemical pattern recognition. Chinese Traditional and Herbal Drugs. 53 (1), 231-237 (2022).
  19. Li, H. H., et al. Comparative investigation for raw and processed products of Euodiae Fructus based on high-performance liquid chromatography fingerprints and chemical pattern recognition. Chemistry & Biodiversity. 18 (8), 2100281 (2021).
  20. Dong, L. J., et al. Study on suitable distribution areas of Kawa Kimichi produced in Sichuan province-based on remote sensing and GIS-A case study of Clematis Armandii. Modernization of Traditional Chinese Medicine and Materia Medica-World Science and Technology. 17 (11), 2398-2404 (2015).
  21. Tang, S. W., Pei, J., Li, F. Y. Morphological and histological identification of Chuanmutong. West China Journal of Pharmaceutical Sciences. 15 (1), 19-21 (2000).
  22. Li, B., Chen, X., Fang, Q. M., Zhang, B. J., Wei, Z. Q. Quality Research of Chuanmutong. Journal of Sichuan of Traditional Chinese Medicine. 27 (6), 58-60 (2009).
  23. Wu, W. J., Wan, M. M., Cao, Y. H., Tan, R., Song, L. K. Research on the Quality Standard of Chuanmutong. Chinese Archives of Traditional Chinese Medicine. 33 (2), 313-315 (2015).
  24. Wei, Z. Q., Chen, X., Li, B., Dong, X. P. Determination of stigmasterol in Clematis armandii Franch and Clematis montana Buch-Ham. by HPLC. Lishizhen Medicine and Materia Medica Research. 20 (3), 574-575 (2009).
  25. Qing, L. S., et al. Determination of oleanolic acid in Caulis clematidis armandii by HPLC. West China Journal of Pharmaceutical Sciences. 21 (3), 273-274 (2006).
  26. Yang, S. D., Wang, R., Fu, D. Y., Guo, J. J., Tan, W. Y. Determination on oleanolic acid in caulis clematidis armandii by microwave assisted extraction-HPLC/MS. Anhui Academy of Agricultural Sciences. 38 (13), 6929-6931 (2010).

Tags

الكيمياء ، العدد 189 ، البصمة الكيميائية ، التعرف على الأنماط المتعددة ، التحليل العنقودي ، تحليل المكونات الرئيسية ، تحليل التمييز بين المربعات الصغرى الجزئية المتعامدة ، المواد الطبية الصينية ، ياسمين أرماندي كوليس
HPLC إلى جانب البصمات الكيميائية للتعرف على الأنماط المتعددة لتحديد أصالة <em>ياسمين أرماندي كوليس</em>
Play Video
PDF DOI DOWNLOAD MATERIALS LIST

Cite this Article

Wang, F., Qian, Z., Liao, G., Zeng,… More

Wang, F., Qian, Z., Liao, G., Zeng, J., Huang, D., Liu, Q., Xie, X. HPLC Coupled with Chemical Fingerprinting for Multi-Pattern Recognition for Identifying the Authenticity of Clematidis Armandii Caulis. J. Vis. Exp. (189), e64690, doi:10.3791/64690 (2022).

Less
Copy Citation Download Citation Reprints and Permissions
View Video

Get cutting-edge science videos from JoVE sent straight to your inbox every month.

Waiting X
Simple Hit Counter