की तैयारी ड्रोसोफिला लाइव इमेजिंग के लिए भ्रूण हैंगिंग ड्रॉप प्रोटोकॉल का उपयोग करना
Summary
ड्रोसोफिला भ्रूण रहते इमेजिंग विश्लेषण के लिए तैयारी की एक सरल, सस्ता और कारगर तरीका प्रस्तुत किया है. हमारी नमी और गैस विनिमय प्रोटोकॉल प्रदान करता है और ड्रोसोफिला भ्रूण सेक नहीं है. इस विधि GFP-आधारित ड्रोसोफिला एक stereomicroscope या ईमानदार यौगिक सूक्ष्मदर्शी का उपयोग भ्रूण के रहते इमेजिंग के लिए उपयुक्त है.
Abstract
ग्रीन फ्लोरोसेंट प्रोटीन (GFP) आधारित रहते हैं – इमेजिंग timelapse ऊतक morphogenesis, सेल कोशिका आसंजन, या कोशिका मृत्यु जैसे गतिशील प्रक्रियाओं की आनुवंशिक विनियमन के अध्ययन के लिए एक शक्तिशाली तकनीक है. भ्रूण ड्रोसोफिला GFP व्यक्त आसानी से या तो त्रिविम या confocal माइक्रोस्कोपी का उपयोग imaged हैं. किसी भी रहते इमेजिंग प्रोटोकॉल का एक लक्ष्य के लिए निर्जलीकरण और hypoxia जैसे हानिकारक प्रभाव को कम है. ड्रोसोफिला भ्रूण रहते इमेजिंग विश्लेषण के लिए तैयार करने के लिए पिछला प्रोटोकॉल हेलोकार्बन तेल में dechorionated भ्रूण रखने और उन्हें एक हेलोकार्बन गैस पारगम्य झिल्ली और एक coverslip के बीच sandwiching शामिल है<sup> 1-3</sup>. इस तरीके से बढ़ते भ्रूण के माध्यम से संपीड़न के परिचय morphogenesis के किसी भी biomechanical आधारित विश्लेषण के लिए एक अवांछनीय जटिलता का प्रतिनिधित्व करता है. हमारी विधि है, जो हम फांसी ड्रॉप प्रोटोकॉल, भ्रूण की उत्कृष्ट व्यवहार्यता में रहते इमेजिंग के दौरान परिणाम कॉल करता है और आवश्यकता है कि भ्रूण संकुचित हो नहीं. संक्षेप में, फांसी ड्रॉप प्रोटोकॉल है कि एक coverslip, जो बारी में है, पर एक नम कक्ष की स्थिति में तय से निलंबित कर दिया है हेलोकार्बन तेल की एक बूंद में भ्रूण के स्थान शामिल है. गैस विनिमय प्रदान और निर्जलीकरण को रोकने के अलावा, इस व्यवस्था हेलोकार्बन तेल में भ्रूण की उछाल का लाभ लेता है timelapse अधिग्रहण के दौरान स्थिति से बाहर बहती से उन्हें रोकने. इस वीडियो में विस्तार से वर्णन कैसे इकट्ठा करने के लिए और रहते इमेजिंग के लिए फांसी ड्रॉप प्रोटोकॉल का उपयोग ड्रोसोफिला भ्रूण तैयार है. इस प्रोटोकॉल इमेजिंग dechorionated stereomicroscopy या किसी भी ईमानदार यौगिक प्रतिदीप्ति खुर्दबीन का उपयोग भ्रूण के लिए उपयुक्त है.
Protocol
Discussion
हम रहते इमेजिंग विश्लेषण है, जो हम फांसी ड्रॉप प्रोटोकॉल फोन के लिए ड्रोसोफिला भ्रूण तैयारी की एक नई विधि का वर्णन. दुर्भाग्य से, यह संभव करने के लिए फांसी ड्रॉप प्रोटोकॉल का उपयोग अगर एक औंधा माइक्रोस?…
Acknowledgements
हम कृतज्ञता एक डिस्कवरी के रूप में के रूप में अच्छी तरह से अनुदान एक अनुसंधान उपकरण और साधन अनुदान से प्राकृतिक विज्ञान और कनाडा के इंजीनियरिंग अनुसंधान परिषद (NSERC) के माध्यम से BHR समर्थन स्वीकार करते हैं. हम भी एच. ओडीए और ब्लूमिंगटन ड्रोसोफिला स्टॉक केंद्र आनुवंशिक स्टॉक है कि उदाहरण के रहते इमेजिंग दृश्यों में इस्तेमाल किया गया प्रदान करने के लिए स्वीकार करते हैं.
Materials
References
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