の調製ショウジョウバエ胚
Summary
ライブイメージング解析のためのショウジョウバエの胚を作製する、シンプルで安価な、そして効果的な方法が提示される。我々のプロトコルは、湿度およびガス交換を提供し、ショウジョウバエの胚を圧縮しません。このメソッドは、実体顕微鏡や正立複合顕微鏡を用いてショウジョウバエの胚のGFPベースのライブイメージングに適しています。
Abstract
緑色蛍光タンパク質（GFP）をベースボックスに追加ライブイメージングは、そのような組織の形態形成、細胞間接着、または細胞死などの動的過程の遺伝的調節を研究するための強力な手法です。 GFPを発現するショウジョウバエの胚は、容易にどちらかの立体または共焦点顕微鏡を用いて画像化している。あらゆるライブイメージングプロトコルの目標は、このような脱水や低酸素などの有害な影響を最小限に抑えることです。ライブイメージング解析のためのショウジョウバエの胚を調製するための以前のプロトコルは、ハロカーボンのオイルでdechorionated胚を配置し、ハロカーボンガス透過膜とカバーの間にそれらを挟む関与している<sup> 1月3日</sup>。この方法で取り付け胚を通じて、圧縮の導入は、形態形成のあらゆる生体力学ベースの解析のために望ましくない合併症を表します。我々はハンギングドロッププロトコルを呼び出す私たちの方法、、ライブイメージング中の胚の優秀な生存率の結果と胚が圧縮されている必要はありません。簡単に言えば、ハンギングドロッププロトコルは、順番に、湿度の高い室以上の位置に固定されるカバーガラス、から中断されているハロカーボンオイルの滴で胚の配置を含む。ガス交換を提供し、脱水を防ぐことに加えて、この配置は、タイムラプス買収時の位置から流出することを防止するためにハロカーボンのオイルの胚の浮力を利用しています。このビデオでは、ハンギングドロッププロトコルを使用して、ライブイメージングのためのショウジョウバエの胚を収集して準備する方法について詳細に説明します。このプロトコルは、実体顕微鏡あるいは直立化合物の蛍光顕微鏡を用いたイメージングdechorionated胚に適しています。
Protocol
Discussion
我々は、ハンギングドロッププロトコルを呼び出すのライブイメージング解析、のために、ショウジョウバエの胚を作製する新しい方法を説明します。残念ながら、それは倒立顕微鏡を扱う場合ハンギングドロッププロトコルを使用することはできません。このケースで挟み込む技術が（上記の抽象的で説明したように）使用され、胚の圧縮は、懸念のままする必要があります。
<p class="j…Acknowledgements
我々は感謝ディスカバリーグラントだけでなく、研究ツールとカナダ自然科学工学研究評議会（NSERC）からインストゥルメントの助成金を介してBHRにサポートを認めます。我々はまた、H.織田と例のライブイメージングシーケンスで使用された遺伝資源を提供するためのブルーミントンショウジョウバエストックセンターを認めます。
Materials
References
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