Overview
Neste artigo discutimos como estabelecer um modelo de câncer de mama em camundongos do sexo feminino, injetando células cancerígenas de mama na almofada de gordura mamária. O protocolo de exemplo demonstra a injeção ortotópica.
Protocol
Os experimentos em animais foram realizados de acordo com a Disposição e Recomendação Geral da Legislação De Administração Experimental de Animais Chineses e foram aprovados pelo Comitê de Uso e Cuidados Com Animais da Universidade Médica da Capital (Ref no. AEEI-2014-052). Foram utilizados camundongos balb/c femininos de 6 a 8 semanas.
1. Preparação das Células e Animais
- Um dia antes da operação, raspe o cabelo ao redor dos quatro mamilos para expor a área de operação.
- Use uma mão para segurar o mouse firmemente na parte de trás para ter certeza de que o mouse não se moverá livremente, vire o mouse para expor sua barriga ao operador e, em seguida, use outra mão para raspar a pele ao redor dos quartos mamilos com uma máquina de barbear eletrônica.
- Coloque uma fina camada de creme de depilação ao redor dos mamilos por 30 a 60 s, limpe o creme com água destilada e, em seguida, seque o mouse com papel macio.
- No dia da operação, colete células cancerígenas de mama murina (4T1-luc2), conte o número celular e ajuste a densidade celular para 2 x 105 células/mL em soro fisiológico tamponado por fosfato (PBS) em tubos microcentrifus estéreis e mantê-los no gelo. Para cada rato, 1 x 104 células/50 μL em uma seringa de 1 mL é preparado.
2. Injeção Ortotópica
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Anestesia de ratos
- Induzir anestesia. Coloque os ratos em um recipiente transparente fechado e ligue 2% de gás isoflurane para anestesiar os ratos por cerca de 5 minutos, até que todos se deitem e durmam.
- Mantenha anestesia. Transfira os ratos do recipiente para máscaras individuais de anestesia, coloque alguma pomada veterinária em seus olhos para evitar o ressecamento, mantenha os ratos supinomente com seus mamilos expostos ao operador e deixe-os continuar inalar gás isoflurane por alguns minutos até que a injeção tenha sido realizada.
- Confirme o sucesso da anestesia pela falta de um reflexo de retirada do dedo do dedo do dedo do dedo.
- Aplique pomada oftálmica aos olhos dos camundongos para evitar o ressecamento dos olhos.
NOTA De acordo com o tamanho do contêiner e o número de máscaras de anestesia individuais disponíveis, um grupo de camundongos pode ser anestesiado e injetado um por um sob anestesia individual.
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Desempenho da injeção
- Use uma mão para preparar a pele ao redor do quarto mamilo com pinças, para montar um "túnel" erguido para a seringa seguir. Use a outra mão para segurar a seringa com a agulha virada para cima para entrar na pele subcutânea a 5 - 10 mm do mamilo; em seguida, siga o "túnel" até que a ponta da agulha se aproxime do mamilo, mova cuidadosamente a ponta da agulha para cima na almofada de gordura mamária até que o olho da agulha fique sob a ponta do mamilo, descarte a pinça e injete as células lentamente.
- Vire a agulha um pouco e retraia a seringa lentamente; use um cotonete para pressionar a ferida da agulha por 10 a 20 s para ter certeza de que não há infiltração de fluido.
- Observe o quarto mamilo para confirmar uma injeção bem sucedida: uma esfera plana branca transparente com o mamilo como o centro pode ser observado(Figura 1).
- Mantenha os camundongos anestesiados por mais um minuto para evitar deixar os ratos se recuperarem e se moverem muito rapidamente, o que fará com que a ferida de injeção se abra e as células tumorais vazem.
Figura 1: Fotos antes e depois da injeção ortotópica na almofada de gordura mamária de camundongos balb/c fêmeas. A operação foi realizada, e as fotos foram tiradas enquanto os ratos estavam sob anestesia isoflurane. A, antes da injeção, B, depois dainjeção.
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Materials
Name | Company | Catalog Number | Comments |
anesthesia machine | Midmark Corporation, Dayton, OH, USA | Matrx VMS | anesthesia |
isoflurane | Hebei yipin chemical reagents company | O21400 | anesthesia |
1 mL syringe | Becton, Dickinson and Company | A257 | cell injection |
hair removal cream | Veet | - | hair removal cream |
Carbomer Eye Gel | Dr.GerhardMannChem-Pharm.FabrikGmbH | - | ophthalmic ointment |