Questo video descrive un classico saggio di condizionamento che testa l’apprendimento e la memoria in Drosophila, chiamato condizionamento del corteggiamento. Il saggio si basa sulla riduzione del corteggiamento maschile dopo aver subito un rifiuto da parte di una femmina premated non ricettiva. Il protocollo di esempio mostra una configurazione per la procedura che può essere utilizzata per valutare la memoria a breve e lungo termine.
Protocol
Questo protocollo è un estratto da Koemans et al., Drosophila Courtship Conditioning As a Measure of Learning and Memory, J. Vis. Exp. NOTA: Nel protocollo descritto di seguito viene descritta una replica di raccolta, training e test. Per verificare la riproducibilità dei risultati, questi passaggi devono essere ripetuti in parallelo, in più giorni e con gruppi separati di mosche (Tabella 1). Il protocollo si basa su …
Representative Results
Figura 1: Determinazione dell’indice di corteggiamento e panoramica sperimentale. (A) Immagini che mostrano un comportamento stereotipato del corteggiamento maschile nei confronti di una mosca femminile. Vengono mostrate diverse fasi del comportamento del corteggiamento: orientamento (I), seguito (II), vibrazione alare (estensione) e maschiatura (III), leccare (IV) e tentare …
Materials
P{KK101437}VIE-260B
VDRC
101437
Dhat-at-RNAi in 60100 background
P{KK108109}VIE-260B
–
–
Control-RNAi in 60100 background (gift from K. Keleman)
w+, UAS-dcr2/yhh;;elav-Gal4 (III)
–
–
panneuronal driver line
Containers for plant tissue culture
VWR
960177
175 mL plastic vials
Folded filters
Whatman
10311643
Filter paper to enlarge area flies can pupate on
Flat-bottom blocks (96-wells)
Qiagen
19579
Used for housing blocks
MicroAmp Clear Adhesive Film
Applied Biosystems
4306311
PCR adhesive film as lid on flat-bottom blocks
Razor blade
–
–
Any sharp will do
Needle
–
–
0.8 mm diameter
Aspirator
–
–
Cut a 1mL pipet tip with scissors in order to have two pieces. The narrow tip of the pipettip is placed as fly entrance in a ~80 cm flexible hose. To prevent a fly from getting in the hose, a normal piece of cotton or small mesh gaze is placed in between the tip and the hose. The other half of the pipettip can be used as mouth piece at the end of the hose.
Courtship chambers
–
–
file S1 can be opened with indicated CAD software
Camcorder
Sony
–
camera specification: >4M pixels, full HD.
For manual quantification, any simple video recording device has the potential to produce a video of sufficient quality to observe courtship behavior accurately. For automated quantification, there will likely be different requirements depending on the software to be used, and users should investigate this thoroughly if automated quantification is desired.