Drosophila Condicionamento de namoro: um método para testar o aprendizado e a memória em moscas

Abstract

Fonte: Koemans, T. S., et al. Drosophila Courtship Conditioning As a Measure of Learning and Memory. J. Vis. Exp. (2017).

Este vídeo descreve um ensaio de condicionamento clássico que testa o aprendizado e a memória em Drosophila, chamado condicionamento de namoro. O ensaio baseia-se na redução do namoro masculino após sofrer uma rejeição por uma fêmea pré-noiva não receptiva. O protocolo de exemplo mostra uma configuração para o procedimento que pode ser usada para avaliar a memória de curto e longo prazo.

Protocol

Este protocolo é um trecho de Koemans et al., Drosophila Courtship Conditioning As a Measure of Learning and Memory, J. Vis. Exp. (2017). NOTA: No protocolo descrito abaixo, uma réplica da coleta, treinamento e testes é descrita. Para testar a reprodutibilidade dos resultados, essas etapas devem ser repetidas em paralelo, em vários dias, e com grupos separados de moscas(Tabela 1). O protocolo é baseado em um ciclo d…

Representative Results

Figura 1: Determinação do Índice de Namoro e Visão Geral Experimental. (A) Imagens mostrando um comportamento de namoro masculino estereotipado em relação a uma mosca fêmea. Diferentes estágios de comportamento de namoro são mostrados: orientação (I), seguinte (II), vibração de asa (extensão) e toques (III), lambida (IV) e tentativa de copulação (V). (…

Materials

P{KK101437}VIE-260B	VDRC	101437	Dhat-at-RNAi in 60100 background
P{KK108109}VIE-260B	–	–	Control-RNAi in 60100 background (gift from K. Keleman)
w+, UAS-dcr2/yhh;;elav-Gal4 (III)	–	–	panneuronal driver line
Containers for plant tissue culture	VWR	960177	175 mL plastic vials
Folded filters	Whatman	10311643	Filter paper to enlarge area flies can pupate on
Flat-bottom blocks (96-wells)	Qiagen	19579	Used for housing blocks
MicroAmp Clear Adhesive Film	Applied Biosystems	4306311	PCR adhesive film as lid on flat-bottom blocks
Razor blade	–	–	Any sharp will do
Needle	–	–	0.8 mm diameter
Aspirator	–	–	Cut a 1mL pipet tip with scissors in order to have two pieces. The narrow tip of the pipettip is placed as fly entrance in a ~80 cm flexible hose. To prevent a fly from getting in the hose, a normal piece of cotton or small mesh gaze is placed in between the tip and the hose. The other half of the pipettip can be used as mouth piece at the end of the hose.
Courtship chambers	–	–	file S1 can be opened with indicated CAD software
Camcorder	Sony	–	camera specification: >4M pixels, full HD.
			For manual quantification, any simple video recording device has the potential to produce a video of sufficient quality to observe courtship behavior accurately. For automated quantification, there will likely be different requirements depending on the software to be used, and users should investigate this thoroughly if automated quantification is desired.
Name	Company	Catalog Number	Comments
power food
Agar	Sigma	A7002
Yeast	Bruggeman	–
Yeast extract	MP biomedicals	0210330391
Peptone	Sigma	P6838
Sucrose	Sigma	S9378
Glucose	Sigma	G7021
MgSO4	Sigma	M2643
CaCl2	Merck	1023780500
Methylparabene (CAUTION)	Sigma	H5501
Propionic acid (CAUTION)	Sigma	P1386
Demineralized water	–
Yeast paste	–		yeast grains and water mixture in a 1:1 ratio
Name	Company	Catalog Number	Comments
normal food
Agar	MP biomedicals	215017890
Yeast	bruggeman	–
Corn flour	de Molen	–
Sugar	de Molen	–
Methylparabene (CAUTION)	Sigma	H5501
Propionic acid (CAUTION)	Sigma	P1386
Demineralized water	–