Este vídeo descreve um ensaio de condicionamento clássico que testa o aprendizado e a memória em Drosophila, chamado condicionamento de namoro. O ensaio baseia-se na redução do namoro masculino após sofrer uma rejeição por uma fêmea pré-noiva não receptiva. O protocolo de exemplo mostra uma configuração para o procedimento que pode ser usada para avaliar a memória de curto e longo prazo.
Protocol
Este protocolo é um trecho de Koemans et al., Drosophila Courtship Conditioning As a Measure of Learning and Memory, J. Vis. Exp. (2017). NOTA: No protocolo descrito abaixo, uma réplica da coleta, treinamento e testes é descrita. Para testar a reprodutibilidade dos resultados, essas etapas devem ser repetidas em paralelo, em vários dias, e com grupos separados de moscas(Tabela 1). O protocolo é baseado em um ciclo d…
Representative Results
Figura 1: Determinação do Índice de Namoro e Visão Geral Experimental. (A) Imagens mostrando um comportamento de namoro masculino estereotipado em relação a uma mosca fêmea. Diferentes estágios de comportamento de namoro são mostrados: orientação (I), seguinte (II), vibração de asa (extensão) e toques (III), lambida (IV) e tentativa de copulação (V). (…
Materials
P{KK101437}VIE-260B
VDRC
101437
Dhat-at-RNAi in 60100 background
P{KK108109}VIE-260B
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Control-RNAi in 60100 background (gift from K. Keleman)
w+, UAS-dcr2/yhh;;elav-Gal4 (III)
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panneuronal driver line
Containers for plant tissue culture
VWR
960177
175 mL plastic vials
Folded filters
Whatman
10311643
Filter paper to enlarge area flies can pupate on
Flat-bottom blocks (96-wells)
Qiagen
19579
Used for housing blocks
MicroAmp Clear Adhesive Film
Applied Biosystems
4306311
PCR adhesive film as lid on flat-bottom blocks
Razor blade
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Any sharp will do
Needle
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0.8 mm diameter
Aspirator
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Cut a 1mL pipet tip with scissors in order to have two pieces. The narrow tip of the pipettip is placed as fly entrance in a ~80 cm flexible hose. To prevent a fly from getting in the hose, a normal piece of cotton or small mesh gaze is placed in between the tip and the hose. The other half of the pipettip can be used as mouth piece at the end of the hose.
Courtship chambers
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file S1 can be opened with indicated CAD software
Camcorder
Sony
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camera specification: >4M pixels, full HD.
For manual quantification, any simple video recording device has the potential to produce a video of sufficient quality to observe courtship behavior accurately. For automated quantification, there will likely be different requirements depending on the software to be used, and users should investigate this thoroughly if automated quantification is desired.