Overview
Bu video, Drosophila'daöğrenmeyi ve hafızayı test eden klasik bir koşullandırma testlerini açıklar Kur şartlandırması denir. Tahlil, alıcı olmayan bir premed kadın tarafından reddedilme yaşadıktan sonra erkek kurlarının azaltılmasına dayanmaktadır. Örnek protokol, kısa ve uzun süreli belleği değerlendirmek için kullanılabilecek yordam için bir kurulum gösterir.
Protocol
Bu protokol Koemans ve ark., Drosophila Courtship Conditioning As a Measure of Learning and Memory, J. Vis. Exp. (2017)'den bir alıntıdır.
NOT: Aşağıda özetlenen protokolde, toplama, eğitim ve testin bir çoğaltması açıklanmıştır. Sonuçların tekrarlanabilirliğini test etmek için, bu adımlar paralel olarak, birden fazla günde ve ayrı sinek gruplarıyla tekrarlanmalıdır (Tablo 1). Protokol, 25 ° C sabit koşullar,% 70 nem ve 12 saat açık / karanlık döngü altında uçarken normal olan yumurtadan yetişkine 10 günlük bir yaşam döngüsüne dayanmaktadır. Bu protokolün tüm yönleri, koşulların tüm test boyunca sabit tutulduğunu varsayar. Süreler, ışığın yanması (BLO) veya inkübatördeki ışıklar açıldıktan (ALO) saatler sonra olarak belirtilir, çünkü bu, araştırmacının günün tercih ettiği saate bağlı olarak kolayca ayarlanabilir. CO2 gazını sadece naif erkek sineklerin ilk toplanması ve premated dişilerin toplanması için kullanın. Kur şartlandırması için bu protokol aşağıdaki adımlardan oluşur:
- Premated kadın koleksiyon kültürlerinin kurulması
- Erkek deneklerin toplanması için kültürlerin kurulması
- Konut bloklarının hazırlanması
- Standartlaştırılmış premated kadınların üretimi için çiftleşme şişelerinin kurulması
- Erkek deneklerin toplanması
- Eğitim
- Test
- Video veri analizi ve istatistikleri
1. Premated Kadın Koleksiyon Kültürlerinin Kurulması
- Powerfood'ı hazırlayın. %0,8 (w/v) agar kaynatın, %8 (w/v) maya, %2 (w/v) maya özü, %2 (w/v) pepton, %3 (w/v) sakkaroz, %6 (w/v) glikoz, %0,05 (w/v) MgSO4ve %0,05 (w/v) CaCl2 15 dakika suda. %0,05 (w/v) metilparabene(DİkKAT: toksik)ve %0,5 (v/v) propiyonik asit eklemeden önce çözeltinin 70 °C'ye soğumasını bekleyin (DİkKAT: toksik). Homojen bir çözelti elde etmek için 50 °C'ye kadar soğutarken karıştırarak iyice karıştırın.
- Gıda oda sıcaklığında katılaştırılmadan önce, her 175 mL plastik şişeye ~50 mL powerfood ekleyin. Yiyeceklerin daha fazla soğumasını bekleyin. Şişeyi bir fişle kapatın.
NOT: Powerfood, muhtemelen yumurtlamayı teşvik ederek çok sayıda sinek üretimi için özel olarak formüle edilmiş özel bir gıda karışımıdır. Powerfood, davranış analizi için kullanılacak erkek sinekleri üretmek için kullanılmaz (adım 2) çünkü atipik diyet ve potansiyel kalabalık gelişmeyi etkileyebilir. - Gün -11 (Tablo 1), powerfood şişelerinde yaklaşık 60-100 sinek (erkek ve dişi karışımı) ile 5-20 wildtype kültürü başlatın; bunlar, standartlaştırılmış premated dişiler üretmek için 4. Larvaların yavru yapabileceği alanı artırmak için her şişeye bir filtre kağıdı ekleyin; bu, kapatabilecek sineklerin sayısını artıracaktır.
- "Standartlaştırılmış premated dişilerin üretimi için çiftleşme şişelerinin kurulması" için girdi olarak yeterli yeni eklosing sinek elde etmek için deney boyunca 1.1-1.3 adımlarını periyodik olarak tekrarlayın (adım 4).
2. Erkek Deneklerin Toplanması için Kültürlerin Kurulması
- % 0,5 (w/v) agar ile yapılan normal yiyecekleri hazırlayın, 1.1 ve 1.2. adımlarda açıklandığı gibi% 2.75 (w/ v) maya, % 5.2 (w / v) mısır unu, % 11 (w / v) şeker, % 0.05 (w / v) metilparabene ve% 0.5 (v / v) sudaki propiyonik asit. 175 mL plastik şişeleri sinek şişesi fişi ile kapatın.
- Gün -10 (Tablo 1), normal gıda içeren her 175 mL şişeye yaklaşık 30-75 bakir dişi (Malzeme / Ekipman Tablosu) ile yaklaşık 10-20 erkek yerleştirin. Yavru için yüzey alanını artırmak ve üretkenliği en üst düzeye çıkarmak için bir filtre kağıdı ekleyin.
- Gerekli sayıda denek erkeği elde etmek için genotip başına üç ila altı adet 175 mL şişe oluşturun.
NOT: İstenilen genotipin verimliliğine bağlı olarak daha fazla şişe gerekebilir.
3. Konut Bloklarının Hazırlanması (Şekil 2A)
- Bir mikrodalgada muhafaza bloğu başına yaklaşık 50 mL powerfood eritin veya taze hazırlayın.
- Multidispenser pipet kullanarak 96 kuyulu, düz tabanlı bloğun her kuyusuna 500 μL powerfood ekleyin.
- Yiyeceklerin oda sıcaklığında katılaşmasını izin verin.
- Blokları PCR yapışkan filmle örtün ve sineklere temiz hava sağlamak için kuyu başına en az 4 delik açmak için bir iğne kullanın.
- Her kuyuyu açabilmek için, yapışkan filmi her satır arasında uzunlamasına kesmek için bir jilet kullanın. Filmi bloğun bir ucunda olduğu gibi bırakın.
- Bloklar 4 °C'de 2 güne kadar saklanabilir.
NOT: Blokların kullanmadan önce oda sıcaklığına yeniden dengelenebilmesine izin verin.
4. Standartlaştırılmış Premated Kadın Üretimi için Çiftleşme Şişelerinin Kurulması
- -1 gününde, 2-5 saat BLO'da önceden belirlenmiş kadın koleksiyon kültürlerinden tüm yetişkin wildtype sineklerini çıkarın ve atın.
- Bu şişelerden 2 ila3saat aralıklarla (örneğin, 30dk, 2,5 saat ve 5 saat ALO) aspiratör ( Şekil 2B)kullanarak sinekleri toplayın ve az miktarda maya ezmesi ve filtre kağıdı ile desteklenmiş yeni bir powerfood şişesine yerleştirin.
- Kalabalıktan kaçınmak ve optimum bir çiftleşme atmosferini teşvik etmek için, her yeni şişeye 150-200'den fazla sinek aktarmayın. En az% 25 erkek sağlayarak tüm kadınların çiftleşmesini sağlayın. Deney boyutunu karşılamak için çiftleşme şişelerinde yeterli dişinin bulunduğundan emin olun.
NOT: Bu protokolde önemli bir adım olduğundan, sadece taze eklenmiş sineklerin ve eski sineklerin, larvaların veya pupaların yeni çiftleşme şişesine aktarılmamasını sağlamak. - Tüm kadınların çiftleşmesi için yeterli zaman tanımak için bu "çiftleşme şişelerini" dört gün boyunca kuluçkaya yatırın.
5. Erkek Deneklerin Toplanması
- 1. günde (Tablo 1) 2-3 h BLO'da, tüm yetişkin sinekleri erkek toplama şişelerinden çıkarmak için CO2'yi kullanın (adım 2), ancak önümüzdeki birkaç saat içinde daha fazla sinekin eclose olmasına izin verin.
- Sonraki 5-6 saat boyunca,CO 2 kullanarak her 20-30 dakikada bir yeni eklenen sinekleri çıkarın ve her erkeği aspiratör (Şekil 2B)kullanarak konut bloğunun bireysel bir kuyusuna koyun (adım 3).
- Yapışkan PCR filmi ile kuyuyu yeniden kapatın.
NOT: Bu protokolde çok önemli bir adım. Erkekler sık sık toplanmalıdır. Toplanan erkekler, soluk pigmentasyon ve yarı saydam karında mekonyum varlığı gösterdiğinde, eklozyon zamanına yakın konut bloğunda izole edilmelidir.
NOT: Aspiratörlerin nazik kullanımı sineklerin aktarılmasına izin verir; ancak, uygunsuz kullanım sinekleri vurgulayacak ve testte varyansa neden olacaktır (Bkz. Tartışma). - Genotip başına en fazla 48 erkek toplamayı hedefleyin. Bu, hem naif hem de eğitimli koşulların analizi için gereken maksimum erkek sayısına küçük bir fazlalık sağlar ve daha sonraki transfer adımları sırasında bir miktar kayba izin verir.
6. Eğitim
- CO 2 kullanarak çiftleşme şişesinden sinekleri çıkarın (adım4.2) ve premated dişileri erkeklerden ayırın.
- Aspiratörü kullanarak, yeni bir konut bloğunun bir satırındaki her kuyuya tek bir uyuşturulmış, premated dişi ekleyin.
- Aspiratörü kullanarak ve anestezi olmadan, 5.2 adımında kurulan konut bloğundan tek bir naif erkeği premated dişi içeren kuyuya aktarın. Erkek kuyuya yerleştirildikten sonra, yapışkan filmle hemen yeniden mühürleyin; erkeğin kaçmasına izin vermeyin.
NOT: Erkek sinekleri aspiratörden konut bloğuna doğal "negatif jeotaksi" davranışlarından yararlanarak aktarın. - Yeterli erkek-kadın çifti kurulana kadar 6.2-6.3 adımlarını tekrarlayın. İdeal olarak, genotip başına 24 çift, bir gövde bloğunun iki tam satırı oluşturun. Kalan naif erkekleri adım 5.2'de kurulan orijinal konut bloğunda bırakın.
- Erkek-kadın çiftlerini eğitim süresi boyunca rahatsız edilmeden bırakın (Tablo 2, Şekil 1B).
NOT: Bu süre zarfında, erkek mahkemeye çıkacak ve premated dişi tarafından reddedilecektir. Öğrenme ve STM için eğitim süresi 1 saat, LTM için eğitim süresi 7-9 saattir. - Eğitimi sonlandırın (Tablo 2, Şekil 1B), erkeği premated dişiden nazikçe ayırmak için bir aspiratör kullanarak; anestezi kullanmayın. Ayrılmış erkeği yeni bir konut bloğuna yerleştirin.
- 5.2 adımında kurulan gövde bloğundan yeni bir konut bloğuna tüm naif erkekleri nazikçe ve anestezi olmadan aktarmak için aspiratörü kullanın.
NOT: Bu adım STM ve öğrenme için isteğe bağlıdır, ancak LTM için çok önemlidir, çünkü sinekler LTM'yi test etmek için ek bir 24 saat için barındırır. - STM ve LTM için, test etmeden önce erkeklerin sırasıyla 1 saat ve ~24 saat dinlenmesine izin verin (Tablo 2, Şekil 1B).
- Öğrenmek için, eğitimli ve naif erkekleri hemen test edin (adım 7).
7. Test
- CO 2 kullanarak çiftleşme şişelerinden sinekleri toplayın (adım4.2) ve premated dişileri erkeklerden ayırın.
- Dişilerin normal yiyecekleri içeren bir şişede en az 1 saat anesteziden kurtulmasına izin verin.
- Test başlamadan önce tüm ekipmanların hazır olması için video kayıt cihazlarına önceden monte edin (Şekil 2C).
- Teste öğrenme, STM ve LTM için farklı zaman çizelgelerine göre başlayın (Tablo 2, Şekil 1B). Öğrenme eğitiminden hemen sonra, STM için eğitimden sonra 1 saat ve LTM için eğitimden sonra 24 saat test gerçekleştirin.
- Aspiratör kullanarak, öğrenme test ediliyorsa (adım 6.7, eğitimli; adım 6.8, naif) tek bir erkeği yavaşça dinlenme muhafaza bloğundan veya eğitim konut bloğundan bölücü kapalı olan bir kur arenasının yarısına aktarın (Şekil 2D; bkz. Yapı planı için Dosya S1).
NOT: Doğal "negatif jeotaksi" davranışının kullanımı, erkek sinekleri aspiratörden kur arenasına aktarmak için yeterli olmalıdır. - Giriş deliğini bir sonraki arenaya hızlı ama yavaşça taşıyın ve 18 arenanın tümü bir erkek içerene kadar 7.5 adımını tekrarlayın.
- Aspiratör kullanarak ve CO2olmadan, 18 arenanın diğer yarısına bir premated dişi (adım 7.2'de toplanır) ekleyin.
- Kur odasını kameranın altına dikkatlice yerleştirin, kuyuların açılması aşağı bakacak şekilde (Şekil 2C).
- Erkekler ve premated dişiler arasında doğrudan etkileşime izin vermek için arenaların bölücüsünden çıkarın.
- Davranışı en az 10 dakika boyunca kaydetmeye hemen başlayın.
NOT: İki kameralı bir kurulum kullanırken, verimliliği en üst düzeye çıkarmak için çakışan zaman dilimlerinde iki kur plakasının paralel kaydı yapılabilir. - Kur arenalarını el süpürgesi kullanarak boşaltın ve kur odasının yeniden kullanılmadan önce havalandırılmasına izin verin.
- Tüm genotiplerin ve koşulların(yani naif ve eğitimli) testleri tamamlanana kadar 7.4-7.11 adımını tekrarlayın.
8. Video Veri Analizi ve İstatistikleri
- Her bir erkek sinek için, test döneminin ilk 10 dakikası boyunca erkeğin mahkeme ettiği süre yüzdesi olarak tanımlanan kur endeksini (CI) hesaplayın.
NOT: Bu, basmakalıp kur davranışını gözlemleyerek (Şekil 1A) veya kur davranışının otomatik ölçülmesi için bilgisayar yazılımı kullanılarak manuel olarak yapılabilir.
NOT: Yeterli istatistiksel güce ulaşmak ve CI verilerinin tutarlılığını değerlendirmek için üç gün boyunca durum başına 40-60 erkeğin analiz etmesi önerilir. - Naif erkeklere kıyasla eğitimli erkeklerin ortalama CI'sında yüzde azalma olarak tanımlanan öğrenme indeksini (LI) hesaplayın (LI = (CInaïve – CIeğitimli)/ CInaïve). Li'yi her test günü için değerlendirin ve birleştirilen tüm test günlerinden hesaplanan kümülatif LI ile karşılaştırın.
- Üstbilgiler olarak "Genotype" ve "CI" ile ayrı bir iki sütunlu sekme veri dosyası yapın.
NOT: Bu başlıklar büyük/küçük harf duyarlıdır. Her CI için genotipin adı, genotipin bir açıklamasından ve ardından bir alt çizgiden ve eğitim koşulundan (örneğin, genotype_N ve genotype_LTM,vb., burada N = naif ve LTM = uzun süreli bellek; örneğin Ek Dosya S2'ye bakın). Analearn işlevi, "Genotip" sütunundaki ilk alt çizgiden sonra bulunan karakterlere göre eğitilmiş ve naif sinekleri tanımlayacağından, bu ek açıklama esastır. -
Farklı genotiplerden LI değerleri arasındaki farkların istatistiksel önemini değerlendirmek için bir randomizasyon testi gerçekleştirmek için analearn R komut dosyasını (Ek Dosya S3) kullanın.
- Komut dosyasını (Ek Dosya S3) "analearn" adlı bir işlevi tanımlayan R'ye kaynakla.
NOT: İşlev tanımı şudur: analearn <- işlevi(nboot = 10.000, naivelevel = 'N', refmutasyon = NA, datname = NA, üstbilgi = DOĞRU, tohum = NA, writeoutput = DOĞRU). - R komut satırına "analearn()" girerek ve açılır pencere aracılığıyla analiz edilecek veri dosyasını (adım 8.3'te üretilir) seçerek işlevi başlatın.
- İlgili sayıyı girerek ve enter tuşuna basarak kontrol genotipi olan referans mutasyonu seçin.
NOT: Başvuru genotipini seçtikten sonra, komut dosyasının 10.000 önyükleme çoğaltması gerçekleştirmesi birkaç saniye sürer. - Genotipi içeren çıktı tablosuna (Tablo 3) uyun, öğrenme koşulu(örneğin,öğrenme, STM veya LTM), CI naif, ortalama CI eğitimli, LI, deneysel duruma (LI dif) kıyasla kontrolün LI'sı arasındaki fark, LI dif'in% 95 güven aralığının alt sınırı (LL) ve üst sınırı (UL) ve önemli bir fark olmaması olasılığını gösteren p-değeri anlamına gelir.
NOT: analearn, veri dosyasının bulunduğu dizinde bir çıktı metin dosyası depolar. Ancak, çıkış tablosu R-Studio konsolunda da görünür. Varsayılan ad, sağlanan veri dosyasının adına göre oluşturulur. - Analearn işlevinde, önyükleme parametrelerini ayarlamak için işlevin varsayılan ayarlarını değiştirmek için kullanılabilecek birkaç bağımsız değişken vardır.
NOT: "nboot" önyükleme çoğaltmalarının sayısını tanımlar ve varsayılan olarak 10.000 olarak ayarlanır. Bu değer sıfırdan büyük herhangi bir tamsayı numarasına değiştirilebilir. Tablo 5, işlevin varsayılan ayarlarını değiştirmek için kullanılabilecek birkaç bağımsız değişkeni listeler. Ancak, düşük sayıda önyükleme çoğaltması ile üretilen verilerin kullanılması önerilmez.
- Komut dosyasını (Ek Dosya S3) "analearn" adlı bir işlevi tanımlayan R'ye kaynakla.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Representative Results
Şekil 1: Kur Endeksinin Belirlenmesi ve Deneysel Genel Bakış. (A) Bir dişi sineğe karşı basmakalıp erkek kur davranışını gösteren görüntüler. Kur davranışının farklı aşamaları gösterilmiştir: oryantasyon (I), takip (II), kanat titreşimi (uzatma) ve dokunma (III), yalama (IV) ve çiftleşme girişimi (V). (B) Saat olarak işaretlenmiş inkübatör ışık döngüsüne göre eğitim ve test sürelerine şematik genel bakış. Eğitim süreleri çubuklarla, STM ve LTM için dinlenme süreleri kesik çizgiyle ve test başlangıç noktası ok olarak gösterilir. LTM için test süresinin eğitimden sonraki gün olduğunu unutmayın. Bu rakamın daha büyük bir sürümünü görüntülemek için lütfen buraya tıklayın.
Şekil 2: Drosophila Courtship Şartlandırma Tahlil için kullanılan ekipman. (A) Gövde bloğu, kuyu başına 500 μL powerfood içeren düz, alt bir bloktır. 0,8 mm çapında bir şırınga iğnesi kullanılarak oluşturulan kuyu başına en az 4 delikli bir qPCR yapışkan film ile kapatılır. Tek tek sıralar, açılıp kapanmasına izin vermek için jilet kullanılarak şeritler halinde uzunlamasına kesilir. (B) Anestezi kullanılmadan erkek ve dişi sineklerin nazik transferi için aspiratör gereklidir. İç kısım, sinekleri uçta tutmak için bir parça pamukla kapatılan aspiratörun ucunu gösterir. (C) İki kur odasının eş zamanlı kaydı için iki kameralı sistemin kurulumu. (D) 18 arenalı bir kur odası. Kayar giriş delikleri, sinekleri arenalara yerleştirmek için kullanılır. Beyaz bölücüler, erkekler ve dişiler arasında etkileşim başlatmak için aynı anda açılabilir. Bu rakamın daha büyük bir sürümünü görüntülemek için lütfen buraya tıklayın.
Tablo 1: LTM'yi Tek Tek Günlerde Üç Çoğaltma Üzerinden Test Etmek için Örnek Zaman Çizelgesi.
| Genel | Toplamak | Tren | Test | |
| gün -11 | Önceden belirlenmiş kadın koleksiyon kültürlerini başlatın (adım 1.3) | |||
| gün -10 | Erkek deneklerin toplanması için kültürleri başlatın (adım 2.2) | |||
| 1. gün | temsilci 1 | |||
| 2. gün | temsilci 2 | |||
| 3. gün | temsilci 3 | |||
| 4. gün | temsilci 4 | temsilci 1 | ||
| 5. gün | temsilci 2 | temsilci 1 | ||
| 6. gün | temsilci 3 | temsilci 2 | ||
| 7. gün | temsilci 4 | temsilci 3 | ||
| 8. gün | temsilci 4 | |||
| 9. gün | Video veri analizi ve istatistikleri (adım 8) | |||
| rep = yineleme |
Tablo 2: Eğitim Süresi, Eğitim Süreleri ve Öğrenme, STM ve LTM için Test Süreleri
| Öğrenme | Stm | Ltm | |
| Eğitim zamanı | 1 saat. | 1 saat. | 8 saat. |
| Dinlenme süresi | 0 saat. | 1 saat. | ~ 24 saat. |
| eğitime başlamak | 0 h. ALO | 0 h. ALO | 4 saat BLO |
| eğitimi durdurma | 1 h. ALO | 1 h. ALO | 4 saat. ALO |
| testi başlatmak | 1 h. ALO | 2 h. ALO | 0 h. ALO (ertesi gün) |
| ALO = ışıklar yandıktan sonra, BLO = ışıklar yanmadan önce, STM = kısa süreli bellek, LTM = uzun süreli bellek | |||
Tablo 3: Analearn Betiğinden Üretilen İstatistiksel Veriler.
Analearn komut dosyasından üretilen istatistiksel veriler. Genotip, öğrenme koşulu(örneğin,öğrenme, STM veya LTM) içeren önyükleme R-komut dosyasının çıktı dosyası, CI naif, ortalama CI eğitimli, LI, deneysel duruma kıyasla kontrolün LI arasındaki fark (LI dif), LI dif'in% 95 güven aralığının alt sınırı (LL) ve üst sınırı (UL) ve önemli bir fark olmaması olasılığını gösteren p-değeri anlamına gelir.
| Genotip | Öğrenme | Cı | Cı | Li | Li | Alt sınır | Üst sınır | p değeri |
| Durum | Saf | Eğitimli | Fark | (%95 sırlanma aralığı) | (%95 sırlanma aralığı) | |||
| Denetim | Stm | 0.467 | 0.116 | 0.752 | Na | Na | Na | Na |
| Dhap-at-RNAi | Stm | 0.699 | 0.257 | 0.633 | 0.119 | -0.03 | 0.265 | 0.116 |
| Denetim | Ltm | 0.59 | 0.384 | 0.348 | Na | Na | Na | Na |
| Dhap-at-RNAi | Ltm | 0.697 | 0.65 | 0.068 | 0.28 | 0.103 | 0.446 | 0.003 |
Ek Dosya S1: Bir kur odasının bina planı. Dosya .stp uzantılarına (CAD dosyaları) izin veren herhangi bir uygulamayla açılabilir. Bu dosyayı indirmek için lütfen tıklayınız.
Ek Dosya S2: Analearn Komut Dosyası için Giriş Dosyası Örneği. Bu dosyayı indirmek için lütfen tıklayınız.
Ek Dosya S3: Analearn.R Komut Dosyası. Dosya R-studio ile açılabilir. Bu dosyayı indirmek için lütfen tıklayınız.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Materials
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| P{KK101437}VIE-260B | VDRC | 101437 | Dhat-at-RNAi in 60100 background |
| P{KK108109}VIE-260B | - | - | Control-RNAi in 60100 background (gift from K. Keleman) |
| w+, UAS-dcr2/yhh;;elav-Gal4 (III) | - | - | panneuronal driver line |
| Containers for plant tissue culture | VWR | 960177 | 175 mL plastic vials |
| Folded filters | Whatman | 10311643 | Filter paper to enlarge area flies can pupate on |
| Flat-bottom blocks (96-wells) | Qiagen | 19579 | Used for housing blocks |
| MicroAmp Clear Adhesive Film | Applied Biosystems | 4306311 | PCR adhesive film as lid on flat-bottom blocks |
| Razor blade | - | - | Any sharp will do |
| Needle | - | - | 0.8 mm diameter |
| Aspirator | - | - | Cut a 1mL pipet tip with scissors in order to have two pieces. The narrow tip of the pipettip is placed as fly entrance in a ~80 cm flexible hose. To prevent a fly from getting in the hose, a normal piece of cotton or small mesh gaze is placed in between the tip and the hose. The other half of the pipettip can be used as mouth piece at the end of the hose. |
| Courtship chambers | - | - | file S1 can be opened with indicated CAD software |
| Camcorder | Sony | - | camera specification: >4M pixels, full HD. |
| For manual quantification, any simple video recording device has the potential to produce a video of sufficient quality to observe courtship behavior accurately. For automated quantification, there will likely be different requirements depending on the software to be used, and users should investigate this thoroughly if automated quantification is desired. | |||
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| power food | |||
| Agar | Sigma | A7002 | |
| Yeast | Bruggeman | - | |
| Yeast extract | MP biomedicals | 0210330391 | |
| Peptone | Sigma | P6838 | |
| Sucrose | Sigma | S9378 | |
| Glucose | Sigma | G7021 | |
| MgSO4 | Sigma | M2643 | |
| CaCl2 | Merck | 1023780500 | |
| Methylparabene (CAUTION) | Sigma | H5501 | |
| Propionic acid (CAUTION) | Sigma | P1386 | |
| Demineralized water | - | ||
| Yeast paste | - | yeast grains and water mixture in a 1:1 ratio | |
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| normal food | |||
| Agar | MP biomedicals | 215017890 | |
| Yeast | bruggeman | - | |
| Corn flour | de Molen | - | |
| Sugar | de Molen | - | |
| Methylparabene (CAUTION) | Sigma | H5501 | |
| Propionic acid (CAUTION) | Sigma | P1386 | |
| Demineralized water | - | ||
