Inbedding van volwassen drosophilahoofden in paraffine: weefsel voorbereiden op histologie

Abstract

Bron: Sunderhaus, E. R., Kretzschmar, D. Mass Histology to Quantify Neurodegeneration in Drosophila . J.Vis. Exp. (2016).

Deze video beschrijft hoe je Drosophila-hoofden in paraffine kunt insluiten met behulp van de kraagmethode, een techniek die vliegkoppen voorbereidt op seriële doorsneden. Paraffinesecties worden gebruikt voor histologisch onderzoek van de anatomie van de hersenen en voor de beoordeling van neurodegeneratie. Het aanbevolen protocol laat zien hoe meerdere vliegen in één voorbereiding kunnen worden verwerkt, waardoor de tijdsefficiëntie wordt verhoogd en experimentele artefacten worden geminimaliseerd.

Protocol

Dit protocol is een uittreksel uit Sunderhaus en Kretzschmar, Mass Histology to Quantify Neurodegeneration in Drosophila, J. Vis. Exp. (2016). 1. Het bevestigen van het hoofd op kragen en inbedding in paraffine OPMERKING: Alle stappen in het fixatieproces moeten worden uitgevoerd in een zuurkast. Methylbenzoaat vormt geen gezondheidsrisico, maar heeft een zeer duidelijke geur, die o…

Representative Results

Figuur 1: Paraffine Serial Sections. A) Met behulp van de halsbandmethode kunnen experimentele en controlevliegen als één monster worden verwerkt door ze op één halsband te rijgen. Oogloze sinus oculis vliegen worden ingevoegd voor oriëntatie (pijlen). B) Schema met de oriëntatie van de vliegkoppen in de kraag. C) In deze afbeelding zijn secties van verschi…

Materials

Collar	Genesee Scientific	TS 48-100	We are using custom made collars that are made from one piece of metal instead of layers as the ones by Genesee.
Rubber ice cube tray for embedding	Household store		The size can be made-to-fit by glueing in additional walls
Crystallizing dish	Fisher Scientific Company	08-762-3
Ether	Fisher Scientific Company	E138-1
Ethanol	Decon Laboratories Inc.	2701
Choloroform	Fisher Scientific Company	C298-500
Glacial Acetic Acid	Fisher Scientific Company	A38-212
Methylbenzoate	Fisher Scientific Company	M205-500	Distinct Odor – Use in fume hood!
Low Melting Point Paraffin Wax	Fisher Scientific Company	T565	Make sure to keep extra melted in a 65 °C waterbath