Intégrer des têtes adultes de drosophile dans la paraffine : Préparer les tissus à l’histologie

Abstract

Source: Sunderhaus, E. R., Kretzschmar, D. Mass Histology to Quantify Neurodegeneration in Drosophila . J. Vis. Exp. (2016).

Cette vidéo décrit comment intégrer les têtes de Drosophila dans la paraffine en utilisant la méthode du collier, une technique qui prépare les têtes volantes pour la section en série. Les sections de paraffine sont utilisées pour les examens histologiques de l’anatomie du cerveau et pour l’évaluation de la neurodégénérescence. Le protocole en vedette montre comment plusieurs mouches peuvent être traitées en une seule préparation, augmentant ainsi l’efficacité du temps et minimisant les artefacts expérimentaux.

Protocol

Ce protocole est un extrait de Sunderhaus et Kretzschmar, Histologie de masse pour quantifier la neurodégénérescence à Drosophila, J. Vis. Exp. (2016). 1. Fixation de la tête sur les colliers et intégration à Paraffin REMARQUE: Toutes les étapes du processus de fixation doivent être effectuées dans une hotte fumigène. Le méthylbenzoate, bien qu’il ne pose pas de risque…

Representative Results

Figure 1 : Sections périodiques de paraffine. A) En utilisant la méthode du collier, les mouches expérimentales et de contrôle peuvent être traitées comme un seul échantillon en les enfilant sur un collier. Les mouches sinusoculées sans yeux sont insérées pour l’orientation (flèches). B) Schéma montrant l’orientation des têtes de mouche dans le col. C) Da…

Materials

Collar	Genesee Scientific	TS 48-100	We are using custom made collars that are made from one piece of metal instead of layers as the ones by Genesee.
Rubber ice cube tray for embedding	Household store		The size can be made-to-fit by glueing in additional walls
Crystallizing dish	Fisher Scientific Company	08-762-3
Ether	Fisher Scientific Company	E138-1
Ethanol	Decon Laboratories Inc.	2701
Choloroform	Fisher Scientific Company	C298-500
Glacial Acetic Acid	Fisher Scientific Company	A38-212
Methylbenzoate	Fisher Scientific Company	M205-500	Distinct Odor – Use in fume hood!
Low Melting Point Paraffin Wax	Fisher Scientific Company	T565	Make sure to keep extra melted in a 65 °C waterbath