Injectie van volwassen Drosophila-vliegen: een methode voor samengestelde of labelafgifte

Published: April 30, 2023

Abstract

Bron: Nazario-Toole, A. E., Wu, L. P. Assessing the Cellular Immune Response of the Fruit Fly, Drosophila melanogaster, Using an In Vivo Phagocytosis Assay. J.Vis. Exp. (2019).

Deze video beschrijft hoe een injectie van levende volwassen vliegen uit te voeren en bevat een voorbeeldprotocol waarin gelabelde deeltjes en trypanblauw in de buik van vliegen worden geïnjecteerd om fagocytose te meten.

Protocol

Dit protocol is een fragment uit Nazario-Toole en Wu, Assessing the Cellular Immune Response of the Fruit Fly, Drosophila melanogaster, Using an In Vivo Phagocytosis Assay, J. Vis. Exp. (2019). 1. Bereid fluoresceïnedeeltjes voor op injectie Reconstitueer 10 mg in de handel verkrijgbare, warmtegedode bacteriedeeltjes gelabeld met fluoresceïne (zie tabel met materialen)tot een voorraadconcentratie van 10 mg/ml door toevoeging van 990 μL s…

Materials

5430-10 PicoNozzle Kit World Precision Instruments 5430-10 Holder for 1.0mm pipette
E. coli (K-12 Strain) BioParticles, Fluorescein conjugate Invitrogen E2861 Killed E. coli labeled with FITC (Fluorescein). Use to test phagocyte recogntion and uptake of gram-negative bacteria. (~494/~518 nm)
Needle Pipette Puller David Kopf Instruments Model 725
Pneumatic PicoPump PV820 World Precision Instruments SYS-PV820 The World Precision Instruments Pneumatic PicoPump PV820 uses differential pressures to hold liquid in the glass needle between injections.
The user manually controls short bursts of gas pressure to expel the liquid – allowing delivery of sub-nanoliter volumes.
The amount of liquid delivered depends on two main variables – the size of the glass needle opening and the amount of time injection pressure is applied.
set the instrument to 100 ms "TIMED" mode.
Thin Wall Glass Capillaries World Precision Instruments TW100F-3 Needles for injection. OD = 1.0 mm
Trypan Blue Solution (0.4%) Sigma T8154 Used to quench extracellular fluorescence of Fluorescein, Alexa Fluor, or Texas Red labeled particles.

Play Video

Cite This Article
Injection of Adult Drosophila Flies: A Method of Compound or Label Delivery. J. Vis. Exp. (Pending Publication), e20113, doi: (2023).

View Video